高效液相色谱法测定左金胶囊中盐酸小檗碱的含量

康馨元,任伯颖,曲 朋,张 辉,孙佳明

(长春中医药大学，长春 130117)

左金丸出自《丹溪心法·火六》，丹溪认为：“气从左边起者，乃肝火也。”左金丸作为治火“入方”(主方),书中标明：“左金丸,治肝火,一名回令丸。”[1]本品左金胶囊是在左金丸的基础上采用现代工艺提取精制而成的胶囊剂型[2]。左金胶囊由黄连总碱和吴茱萸总碱组成，清肝泻火，主治肝经火旺之胁肋胀痛、呕吐吞酸、嗳气口干、舌红苔黄、脉象弦数等。方中重用黄连为主，以泻心火[1]，黄连主要含有小檗碱、黄连碱、药根碱、甲基黄连碱等生物碱成分,其中以小檗碱含量最高[3]。黄连中生物碱的含量测定方法报道较多[4-9]，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，在文献报道及法定标准的基础上，本试验采用高效液相色谱法对其有效成分盐酸小檗碱为定量控制指标进行测定。

1 试验材料

1.1 仪器与试剂 Aglient 1100高效液相色谱仪，G1314A紫外检测器，7725i手动进样器，Aglient色谱数据工作站。盐酸小檗碱化学对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110715-200212，规格：供含量测定用)。所用试剂均为色谱纯和分析纯。

1.2 色谱工作条件 色谱柱为ZORBAX 80A Extend-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为0.05 mol/L磷酸二氢钾-乙腈(75∶25)；流速为0.6 mL/min，进样体积5 μL，检测波长为350 nm。

2 试验方法

2.1 对照品溶液的制备 精密称取在60 ℃真空干燥4 h的盐酸小檗碱对照品0.010 59 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL含0.105 9 mg盐酸小檗碱)。

2.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下内容物，混匀，取0.1 g，精密称定置100 mL量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)约95 mL，置60 ℃水浴中加热15 min，取出超声处理30 min，放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性对照品溶液的制备 取不含黄连总碱的处方,按制备工艺制成缺黄连总碱的阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

3 结果与分析

3.1 检测波长的选择 按试验方法对盐酸小檗碱进行全波长扫描，结果表明盐酸小檗碱在350 nm处有较大吸收，试验选择检测波长为350 nm。

3.2 流速的选择 曾选用流速为0.8 mL/min，0.6 mL/min，0.4 mL/min，后改为0.6 mL/min，分离度较好，保留时间适中。

3.3 系统适应性试验 按上述色谱条件测定,理论板数按盐酸小檗碱计算应不低于3 000，高效液相色谱图略。

3.4 线性关系考察 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(0.105 9 mg/mL)2、4、6、8、10 μL分别注入液相色谱仪,依法测定，根据对照品的峰面积积分值对盐酸小檗碱质量绘制标准曲线，见表1。

表1 盐酸小檗碱进样量与峰面积

结果表明盐酸小檗碱对照品在0.211 8～1.059 0 mg之间,进样量与峰面积积分值呈良好线性关系，r=0.999，回归方程Y=583.715 62X-149.859 015。

3.5 精密度考察 分别吸取同一剂量的对照品溶液，依法测定其峰面积值。精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(0.105 9 mg/mL)5 μL连续进样5次。结果见表2，RSD%=1.09(n=5)，表明仪器精密度良好。

表2 方法精密度试验

3.6 稳定性试验 精密吸取对照品溶液5 μL,于0、2、4、24、36 h分别进样5 μL进行测定(n=5)，峰面积见表3。RSD%=1.47(n=5)，结果表明盐酸小檗碱对照品溶液在36 h内测定结果稳定。

表3 盐酸小檗碱对照品稳定性试验

3.7 重现性试验 精密称取同一批样品(批号:040601)5份，每份约0.1 g，依法制备供试品溶液并测定含量。结果见表4，RSD%=0.86(n=5)，表明方法重现性良好。

3.8 加样回收率试验 精密称取已知样品含量(418.92 mg/g)样品(批号： 040401)5份， 分别加入一

表4 样品重现性实验

定量盐酸小檗碱，测定，并根据样品含量及盐酸小檗碱对照品加入量，计算回收率。结果见表5，RSD%=0.19(n=5)。

表5 回收率试验

3.9 样品含量测定 分别精密吸取10批供试品溶液5 μL,注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表6。

表6 样品中盐酸小檗碱含量

4 结论

经过多次实验，本品中盐酸小檗碱总含量为每粒不得低于22.7 mg。本试验建立的采用高效液相色谱法测定左金胶囊中盐酸小檗碱的含量，方法学考察结果表明，本方法测定左金胶囊中盐酸小檗碱的含量快速、简便、结果准确可靠，稳定性较好。

[1]陈荣,杨少华.《丹溪心法》左金丸浅识[J].江西中医药,2003,34(11):33.

[2]陆步实,乔成,郭立玮.左金丸和左金胶囊中小檗碱的释放度比较[J].时珍国医国药,2010,21(12):3352-3353.

[3]王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析[M].北京:科学出版社,1999:315-318.

[4]江汉美,卢金清,冯小路,等.HPLC法测定不同工艺的一清颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].湖北中医杂志,2010,32(11):62-64.

[5]肖田梅,金丽杰,乌兰格日乐.复方制剂中小檗碱含量测定方法研究概况[J].内蒙古民族大学学报：自然科学版,2001(4):417-419.

[6]尹清.HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量[J].上海中医药杂志,2003(7):53-55.

[7]汪寒林.HPLC法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量[J].安徽医药,2005(9):671-672.

[8]朱颖虹,张清民.三黄片中盐酸小檗碱的含量测定[J].中成药,2002(1):31-33.

[9]奚燕,余敏英,杨铭,等.黄连素软膏中盐酸小檗碱的含量测定[J].上海中医药大学学报,2004(4):49-50.