NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

肖建波，李海丽，王轶楠，王学静，张顺礼

论著·临床

NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

肖建波，李海丽，王轶楠，王学静，张顺礼

目的探讨非霍奇金淋巴瘤患者血清和组织 NF-κB p65的表达是否一致，其表达与非霍奇金淋巴瘤临床特征的关系。方法免疫组化法检测58例非霍奇金淋巴瘤患者组织NF-κB p65的表达，ELISA 法检测患者血清NF-κB p65水平。分析血清与组织 NF-κB p65 表达及与临床特征的关系。结果58例非霍奇金淋巴瘤患者血清、组织的 NF-κB p65表达率分别为51.7%、55.2%，表达一致率为75.8%。血清及组织NF-κB p65 的阳性表达与非霍奇金淋巴瘤患者的临床分期及国际预后指数(IPI)评分有关(P<0.05)，而在不同性别、年龄及T、B细胞亚型之间阳性表达差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论非霍奇金淋巴瘤患者血清NF-κB p65表达升高，可能部分反映淋巴瘤组织NF-κB p65的表达水平，同时与非霍奇金淋巴瘤的临床分期及IPI相关。

非霍奇金淋巴瘤；核转录因子NF-κB；国际预后指数

核转录因子-κB(NF-κB)是广泛存在于真核生物细胞内的一种可诱导的转录因子家族蛋白，1986年作为B细胞转录因子首先被发现，与免疫球蛋白κ轻链基因增强子结合，促进其表达，在淋巴瘤的发生、发展过程中起着重要作用[1，2]。目前文献报道NF-κB p65在淋巴瘤组织中高表达，且与预后相关，但NF-κB p65血清蛋白表达是否与组织表达一致，其与临床特征有何关系，结果尚不清楚。现用ELISA 法和免疫组化方法检测NF-κB p65在非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者血清及组织中的表达情况，探讨两者在淋巴瘤中表达是否一致及与临床特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2011年12月—2013年2月我院收治NHL患者58例(病理诊断明确，未做过放化疗)，取患者淋巴结组织蜡块，全部重新复查均经HE及免疫组织化学方法确诊。58例患者中，男27例，女31例；年龄15～74岁，中位年龄45.5岁；其中B细胞NHL 34例(弥漫大B细胞淋巴瘤24例、伯基特淋巴瘤2例、黏膜相关淋巴瘤4例、滤泡淋巴瘤4例)，T细胞NHL 24例(T淋巴母细胞淋巴瘤2例、NK/T细胞淋巴瘤5例、非特殊型外周T细胞淋巴瘤12例、间变大细胞淋巴瘤3例、血管免疫母细胞淋巴瘤2例)；临床分期I～II期27例，III～IV期31例。国际预后指数(IPI)评分：低危组(0～1分)25例，高危组(≥2分)33例；首程治疗前采集患者血清，另收集同期40例正常人血清作为健康对照组，血清经标本经分装后，保存于-80℃冰箱。

1.2 血清NF-κB p65的ELISA检测及阳性结果判定 NF-κB p65 ELISA试剂盒购自美国RD公司，按试剂盒说明进行操作。浓度< 40ng/ml为阴性，≥40ng/ml为阳性。

1.3 免疫组化方法及阳性结果判定 患者淋巴结组织蜡块标本经10%中性福尔马林溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，4μm 厚切片，切片常规脱蜡水化；0.3% H2O2阻断内源性过氧化物酶，10%小牛血清封闭切片，滴加一抗，4℃过夜。PBS洗后滴加广谱生物素化二抗(1∶200)，SP复合物(1∶200)，DAB显色，苏木精复染胞核，脱水，透明，封片。NF-κB p65阳性为棕黄色细小颗粒，均位于胞核，在高倍镜下(×400)对每个病变组织随机选10个视野进行阳性细胞计数，根据染色强度及范围进行判断，阳性细胞数<25%为阴性，≥25%为阳性。以乳腺癌组织NF-κB p65阳性片为阳性对照，所有病理标本切片用PBS液代替一抗作阴性对照。免疫组织化学检测采用SP法，SP试剂盒购于美国RD公司。

2 结 果

2.1 NF-κB p65在血清中的表达 NHL组患者外周血NF-κB p65的表达明显高于健康对照组[(48.2±17.0)ng/ml vs.(22.7±8.3)ng/ml]，差异有统计学意义(P<0.05)。58例NHL患者血清NF-κB p65阳性表达率为51.7%(30/58)。

2.2 NF-κB p65在淋巴瘤组织中的表达 淋巴瘤组织细胞核中有NF-κB p65表达，内可见棕黄色颗粒。表达阳性率为55.2%(32/58)。

2.3 血清与组织NF-κB p65表达的关系 NHL患者中血清与组织同为阴性20例，同为阳性 24例，采用Kappa 一致性检验，Kappa值=0.516(P﹤0.05) ，可以认为具有一致性。采用Spearman秩相关系数，rs=0.517，P﹤0. 05，表达一致率为75.8%。见表1。

表1 NHL患者血清及组织NF-κB p65表达情况

2.4 NF-κB p65表达与临床特征的关系 58例淋巴瘤患者中，血清及组织NF-κB p65表达情况与临床特征关系，见表2。血清及组织NF-κB p65表达阳性与临床分期及国际预后指数(IPI)有相关性(P<0.05)，与其他临床特征无相关性(P>0.05)。见表3。

表3 血清、组织NF-κB p65和临床特征因素相关分析

3 讨 论

目前研究表明，NF-κB能抑制凋亡与肿瘤发生密切相关[3]。许多血液和实体肿瘤中都有NF-κB的异常激活。异常激活的NF-κB在肿瘤增生、凋亡、血管生成、侵袭和转移起着重要作用[4]。目前在多种类型的NHL中(例如ABC-DLBCL、MALT淋巴瘤和成人T细胞淋巴瘤等)均已被证实存在NF-κB信号通路的异常活化[5～7]。

NF-κB通路的异常激活可以上调一系列抗凋亡基因的表达(Bcl-2、TRAFs和IAPs等)，是诱导细胞持续恶性增殖及癌症发生的重要原因。它的表达与部分淋巴瘤的临床特征及预后相关。近年研究发现，NF-κB的表达与淋巴母细胞淋巴瘤的临床分期相关，在弥漫大B细胞淋巴瘤中与IPI同时作为独立不良预后因素[8]，在胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中表达提示预后不良[9]。本研究分析非霍奇金淋巴瘤患者血清及组织NF-κB p65表达与临床特征关系时发现，NF-κB表达与临床分期及IPI有相关性，与文献报道相符[10]。临床分期及IPI可大致反映非霍奇金淋巴瘤的预后，NF-κB p65表达与其相关，因此NF-κB p65检测有可能成为非霍奇金淋巴瘤的预后指标之一，但尚需大样本及生存分析统计，需要进一步病理亚型分析。

表2 NHL患者血清及组织NF-κB p65表达与临床特征的关系

由于外周血循环中存在肿瘤细胞及相关产物，同时取材容易、创伤小，操作简便，容易动态检测，成为目前研究热点。本组通过检测血清NF-κB表达情况，发现NHL患者血清NF-κB p65 表达明显高于健康对照组，提示NF-κB阳性表达与非霍奇金淋巴瘤发生有关。血清NF-κB p65表达与临床分期及IPI相关，考虑可能与多数晚期及高IPI评分患者，肿瘤负荷相对较大，组织及外周血中循环的肿瘤细胞较多，异常的NF-κB活化促进肿瘤的生长有关。同时，NHL患者血清及组织NF-κB p65表达具有一致性，提示血清NF-κB p65可能部分反映组织NF-κB p65的表达情况，一般情况下Kappa值>0.7才表明吻合度好，本组Kappa值为0.516，需要大样本进一步证实和优化、标化检验方法，因此目前外周血检测尚不能完全替代组织检测，但为探寻一个简易的指标提供了一定依据。

1 Vonach C，Viola K，Giessrigl B，et al．NF-κB mediates the 12(S)-HETE-inducedendothelial to mesenchymal transition of lymphen dothelial cells during the intravasation of breast carcinoma cells[J]． Br J Cancer，2011，105(2)：263-271.

2 Liu M，Sakamaki T，Casimiro MC，et al． The canonical NF-kappaB pathway governs mammary tumorigenesis in transgenic mice andtumor stem cell expansion [J]．Cancer Res，2010，70(24):10464-10473.

3 Loercher A, Lee TL, Ricker TL, et al. Nuclear factor- kappa B is animportant modulator of the alteredgene expression profile andmalignant phenotype in squamous cell carcinoma [J] . Cancer Res, 2004, 64(18) : 6511- 6523.

4 Bentires-Alj M, Barbu R, Fillet M, et al. NF- kappaB transcription factor induces drug resist ance through MDR1expression in cancer cells[J] .Oncogene, 2003, 22(1) : 90- 97.

5 昌红, 高颖, 张建英, 等. 存活蛋白和NF-κB 在外周T 细胞性淋巴瘤中的表达和意义[J]. 中华实验血液学杂志, 2008, 16(5) : 1079 -1081.

6 李丹,迟心左,周昌菊.胎膜早破孕妇血中NF-κB P65、IL-8、MMP-9的表达及意义[J].疑难病杂志,2012,11(10): 751-754.

7 薛令军,李培梅,汤祎,等.β-连环素和P65在喉癌侵袭转移过程中的关系研究[J].中国当代医药,2013,20(6) :4-5,8.

8 Bavi P,Uddin S,Bu R, et al. The biological andclinical impact of inhibition of NF-κB-initiatedapoptosis in diffuse large B cell lymphoma(DLBCL) [J]．J Pathol，2011，224(3):355-366.

9 吴秀玲，韩少良，万丽，等.胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤中BCL-10和NF-κB的表达与预后的关系[J] .中华普通外科杂志，2007,22(3):172-175.

10 赵兵，杨顺娥 非霍奇金淋巴瘤中C-myc与NF-κB的表达[J] .肿瘤防治研究，2010,37(9) : 1091-1093.

TheexpressionandclinicalsignificanceofNF-κBp65innon-Hodgkin'slymphoma

XIAOJianbo,LIHaili,WANGYinan,WANGXuejing,ZHANGShunli.

ThirdDepartmentofRadiochemicalTherapy,TangshanCityPeople'sHospital，Tangshan063000,China

ObjectiveTo investigate whether the non-Hodgkin's lymphoma patients andorganizations NF-κB p65 expression are consistent with the expression of non-Hodgkin's lymphoma clinical features.MethodsImmunohistochemistry is appliedto detect 58 cases of non-Hodgkin's lymphoma patient organizations NF-κB p65 expression, ELISA assay of serum NF-κB p65 levels. Analysis of serum andtissue NF-κB p65 expression andclinical features.ResultsIn 58 patients serum, the tissue NF-κB p65 expression rates were 51.7%, 55.2%, 75.8% concordance rate expression. Serum andtissue NF-κB p65 positive expression in patients with non-Hodgkin's lymphoma clinical stage andIPI score (P<0.05), but between different gender, age andT, B cell subtype expression the difference was not statistically significant (P>0.05).ConclusionPatients with non-Hodgkin's lymphoma increasedexpression of NF-κB p65, may partly reflect lymphoma NF-κB p65 expression levels, but also associatedwith non-Hodgkin's lymphoma clinical stage andIPI.

Non-Hodgkin's lymphoma; Nuclear transcription factor-κB; International prognostic index

063000 唐山市人民医院放化三科

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.01.020

2013-09-05)