卷羽鹈鹕幼鸟感染大肠杆菌诊治报告

徐正强，沈莉萍，桂剑峰，傅建义，杨天春

（1.上海动物园，上海 长宁 200335；2.上海市动物疾病预防控制中心，上海 长宁 201103）

卷羽鹈鹕（Pelecanus crispus）属鹈形目（Pele⁃caniforms）鹈鹕科（Pelecanidae），是一种大型游禽，被IUCN列为受威胁物种（Vulnerable），属国家二级重点保护动物[1-3]。上海动物园于20世纪50年代引进卷羽鹈鹕进行试养，并在20世纪70年代成功繁殖，现在种群已发展至40多只。从20世纪80年代开始探索鹈鹕的人工孵化和育雏技术并取得初步成功，从2008年开始，人工孵化和育雏的1周龄鹈鹕幼鸟出现陆续发病并死亡的现象，至2012年共计82只幼鸟发病，造成56只幼鸟死亡。发病幼鸟一般于7日龄时出现呕吐，食欲不振，排泄物呈橘红色，呼吸困难。发病幼鸟生长发育较差，身体裸露，缺乏绒毛，体重增长缓慢。

为了探求鹈鹕幼鸟的发病原因和医治方法，从2010年开始连续对发病死亡的幼鸟进行细菌的分离鉴定、药敏试验和治疗试验，取得了较好的结果，现就2008-2012年间鹈鹕幼鸟发病情况、疾病诊断和治疗结果报告如下，希望为今后鹈鹕的人工繁育和野外保护提供基础资料。

1 研究方法

1.1 幼鸟的发病、治疗及存活情况统计 对2008-2012年成功出壳的鹈鹕幼鸟的发病情况、药物处理及其存活情况进行统计，存活个体指大于3月龄的鹈鹕个体。

1.2 细菌的分离鉴定、药敏试验 2010-2011年共对幼鸟饲料（1份）、未受精蛋（2份）、死亡胚胎（5份）和死亡幼鸟（4份）共12份样本进行了细菌的分离鉴定、药敏试验。

1.2.1 试验材料 培养基：哥伦比亚琼脂、伊红美蓝琼脂、三糖铁琼脂、营养肉汤、MHA等，由北京陆桥技术有限责任公司提供并按常规法配制；GNI+革兰阴性鉴定卡，批号：S109M，由法国梅里埃公司提供；药敏纸片，共16种，由杭州天和微生物试剂有限公司提供；药敏试验质控标准菌株，大肠杆菌(ATCC25922)，购自中国兽医药品监察所。

1.2.2 细菌分离培养 将无菌采集的病料（心、肝、脾、肺、肾、胆汁、卵黄、脑等）接种于哥伦比亚(Columbia)羊血琼脂平板，36℃培养24 h后，挑取可疑菌落涂片镜检并纯培养。将纯培养菌分别接种于哥伦比亚血琼脂平板、伊红美蓝、三糖铁琼脂等，37℃培养24 h，观察其培养特性。

1.2.3 VITEK鉴定 对分离菌的纯培养物按照细菌鉴定卡操作规范进行操作，并在VITEK-32全自动细菌鉴定仪上读取细菌鉴定结果。

1.2.4 药敏试验 将细菌纯培养物接种于MHA平板，用纸片法进行体外药敏试验，36℃培养24 h，观察结果。试验方法及判读标准参照CLSI2010。

2 研究结果

2.1 细菌的生化特性和分离鉴定 将无菌采集的病料分别接种于哥伦比亚羊血琼脂平板，36℃、24 h培养后，5#～12#均无细菌生长，而样品1#～4#（死亡幼鸟）初代培养均分离纯一的细菌（表1），经革兰染色、涂片镜检，均为革兰阴性杆菌。4株分离菌在Columbia羊血琼脂平板上形成湿润、边缘整齐、圆形、隆起、灰白色中等大小菌落，β溶血；肉汤中培养为均匀浑浊、管底有多量沉淀、振摇呈絮状升起，管壁有菌环；伊红美蓝上为黑色有金属光泽菌落；三糖铁琼脂上为斜面和底层变黄、产气、无H2S产生（表2）。4株细菌在VITEK-32全自动细菌鉴定仪上鉴定均为大肠杆菌Escherichia coli（表2）。

表1 不同样品中分离到大肠杆菌情况

表2 分离菌株生化特性

2.2 药敏试验 分离菌药敏试验结果见表3，从表3中可以看出，4株分离菌对头孢哌酮、丁胺卡那霉素敏感，而对其他药物部分敏感。

2.3 不同药物处理幼鸟组的存活情况 2008-2012年间分别根据药敏试验结果采用不同药物对82只发病幼鸟进行医治，其治疗效果见表4。从表4中可以看出，2008-2010年分别使用青霉素、庆大霉素和大观霉素对56只发病幼鸟进行医治，其治疗效果不明显，发病幼鸟全部死亡；而2011-2012年使用丁胺卡那霉素对26只发病幼鸟进行医治，其治疗效果明显，发病幼鸟全部存活。

表3 分离菌株药敏试验 （抑菌圈直径，mm）

2.4 鹈鹕的人工孵化、出雏和育雏管理操作 发病后鹈鹕的人工孵化、出雏和育雏管理操作如下：将自然环境下的鹈鹕巢穴中取出的蛋浸入5%碘伏溶液中消毒5 min后，晾干后放入孵化箱中孵化，不同批次的蛋放入不同孵化箱内分别孵化。当蛋出现破壳点后移入出雏箱内出雏，幼鸟1日龄后转移到育雏室中进行饲养。

3 讨论

大肠杆菌是一种条件致病菌，当外界条件适宜和鸟类机体免疫力下降时，刚孵化出壳的鸟类幼体容易感染该细菌。幼鸟感染的途径主要有两种类型，一是垂直感染，即直接由生病雌性母鸟感染胚胎引起的；二是水平感染，即由饲养环境、饲料等物品中有该细菌存在造成的。本试验中未受精的鹈鹕蛋和胚胎中均未检测出细菌表明，由雌鸟直接感染胚胎引起的幼鸟发病机会很少，同时幼鸟饲料中也未检测出细菌，说明由饲料引起的“病从口入”的感染途径的可能性不大。相反，死亡幼鸟中有2个个体样本的卵黄囊中检测出致病菌（表1）说明，鹈鹕幼体感染是可能在出壳以后发生，这是因为鸟类幼体出壳时孵化箱温度较高、相对湿度较大，加上出壳时胚胎的残留物，这为细菌的繁殖创造了有利条件，这可能是造成幼鸟发病的重要途径之一。

表4 不同药物医治的幼鸟存活情况

药敏试验结果表明，鹈鹕幼鸟感染的大肠杆菌对丁胺卡那霉素、头孢哌酮敏感，这也是2011年前对发病幼鸟使用庆大霉素、青霉素和大观霉素进行医治无效的原因。根据Ellis等（2003）建议[5]，在出壳后第2天对鹈鹕幼鸟肌肉注射丁胺卡那霉素进行预防性用药，预防效果明显。另外，规范鹈鹕的人工孵化、出雏和育雏管理操作环节，避免不同批次或不同种类的蛋间的相互感染，以减少幼鸟感染病菌的机会。

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