SPARC、E-cadherin、EZH2在子宫内膜癌中的表达及意义

王 婷，赵琳蕾，张 煦，何君芳

(1.兰州大学基础医学院病理研究所；2.甘肃省康复中心医院妇产科，兰州 73000)

子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，生育年龄至绝经后均可发生，发病高峰在50～69岁，近年来其发病率呈逐年上升趋势，但其发病机制尚未完全阐明[1]。富含半胱氨酸(secreted protein acidic and rich in cysteine，SPARC)是结合于细胞和细胞外基质的生物活性糖蛋白，调节细胞黏附、增殖和基质合成。上皮型钙黏素(epithelial cadherin or E-cadherin)是一种钙依赖性细胞黏附分子，参与钙依赖性细胞黏附机制，它介导嗜同种性的细胞黏附。转录抑制因子增强子(enhancer of zeste homolog 2， EZH2)是果蝇zeste基因增强子的人类同源物，参与细胞生长调节，与恶性肿瘤发生密切相关。我们用免疫组化Envision二步法检测SPARC、E-cadherin、EZH2在正常子宫内膜、单纯型增生、复杂型增生、不典型增生、子宫内膜癌组织的表达，并进一步分析SPARC、E-cadherin、EZH2表达与子宫内膜癌发生、发展的关系。

1 资料和方法

1.1 临床资料 选取甘肃省康复中心医院2009年1月至2013年1月手术切除子宫内膜组织标本225例，分为以下五组：A组：正常子宫内膜40例；B组：单纯型增生40例；C组：复杂型增生40例；D组：不典型增生40例；E组：不同病理分期子宫内膜癌(均为子宫内膜样腺癌)组织65例。按照FIGO(2000)标准对E组进行手术-病理学分期和组织病理学分级。按肿瘤恶性程度、预后分为四组：① 组织病理学分级：G1+G2 30例，G3 35例(因 G1 和 G2 例数相对 G3 较少，故取 G1 和 G2 例数的和与 G3比较)；② 手术-病理分期：I期+ II期42例，III 期+IV期23例(因 II 期、III 期和 IV 期例数相对 I 期较少，故取 I～II 期总病例数与 III～IV 期相比较)；③ 肌层浸润深度≤1/2有37例，>1/2有28例；④ 有淋巴转移者24例，无淋巴转移者41例。患者年龄28～75岁，平均(51.09±6.88)岁。所有患者未合并其他系统恶性肿瘤，术前均未进行激素治疗、放疗、化疗。患者临床、病理资料完整。

1.2 研究方法 兔抗人SPARC多肽合成抗体(bs-1133R，工作浓度1∶100)购自北京博奥森生物技术有限公司，兔抗人E-cadherin多克隆抗体、EZH2多克隆抗体、过氧化酶标记的链霉亲和素(streptevidin/peroxidase)染色试剂盒、联苯二胺(DAB)染色剂购自北京中杉金桥生物制品有限公司。所有石蜡包埋组织均4 μm连续切片、脱蜡、水化，并以微波法进行抗原修复，按照Sp(Envision二步法)试剂盒说明书步骤进行操作。苏木素复染,脱水,透明,封片,显微镜观察。

1.3 染色结果判断 SPARC染色定位于胞浆，E-cadherin定位于细胞膜，EZH2定位于细胞核，以出现棕黄色颗粒且染色强度高于背景非特异性着色者为阳性。染色阳性的判断标准：① 染色强度：0 分为无色；1 分为黄色；2 分为棕黄色；3 分为棕褐色；② 阳性细胞所占百分比：1分为阳性细胞≤10%；2分：11%～50%；3分：51%～75%；4分：≥76%。染色强度与阳性细胞所占百分比的乘积大于3为免疫反应阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 12.0统计学软件进行统计分析，所有计数资料的比较均采用χ2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同子宫内膜组织中SPARC、E-cadherin、EZH2阳性表达 SPARC基因在五组之间比较有统计学差异(χ2=48.41，P<0.01)。SPARC阳性表达在正常子宫内膜较高，较其他四组有显著性差异(χ2=7.44，χ2=14.05，χ2=17.07，χ2=43.16，P均<0.01)。E-cadherin蛋白在五组之间比较有统计学差异(χ2=37.37，P<0.01)。E-cadherin阳性表达在正常子宫内膜较高，较其他四组有显著性差异(χ2=6.67，χ2=10.31，χ2=11.67，χ2=35.43，P均<0.01)。EZH2在五组之间比较有统计学差异(χ2=29.02，P<0.01)。EZH2阳性表达在E组较高，较其他四组有显著性差异(χ2=21.61，χ2=17.39，χ2=11.92，χ2=7.44，P均<0.01)。详见表1。

表1 不同子宫内膜组织中SPARC、E-cadherin、EZH2阳性表达 [n(%)]

2.2 SPARC、E-cadherin、EZH2表达与子宫内膜癌病理特征的关系 SPARC的低表达与子宫内膜癌组织病理学分级、手术-病理分期、肌层浸润深度、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。E-cadherin的低表达与子宫内膜癌组织病理学分级、手术-病理分期、肌层浸润深度、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。EZH2的高表达与子宫内膜癌组织病理学分级、手术-病理分期、肌层浸润深度有关(P<0.05)，与有无淋巴转移无关(P>0.05)。

表2 SPARC、E-cadherin、EZH2的阳性表达与子宫内膜癌病理特征的关系

2.3 子宫内膜癌组织中SPARC、E-cadherin、EZH2表达的相关性分析 在65例子宫内膜癌组织中SPARC阳性表达19例, 其中16例E-cadherin表达阳性, 一致性为84.21%;SPARC阴性46例中 E-cadherin 阴性44例, 一致性为95.65%,经Spearman等级相关分析 提示SPARC和E-cadherin 蛋白在子宫内膜癌的表达呈显著正相关(r=0.226，P<0.05)。而SPARC阳性表达19例, 其中5例EZH2 表达阳性, 一致性为26.32%;SPARC阴性46例中EZH2阴性为3例, 一致性为6.52%, 经Spearman等级相关分析,提示SPARC和EZH2在子宫内膜癌的表达呈显著负相关(r=-0.201，P<0.05)；E-cadherin阳性表达18例, 其中4例EZH2表达阳性, 一致性为22.22%;E-cadherin阴性47例中EZH2阴性为3例, 一致性为6.38%, 经Spearman等级相关分析,提示SPARC和EZH2在子宫内膜癌的表达呈显著负相关(r=-0.214，P<0.05)。

3 讨 论

子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一, 其发生是多基因作用、多因素参与和多阶段发展的病理过程, 涉及多种癌基因和抑癌基因的异常。有关子宫内膜癌相关基因,已有不少研究报道。SPARC又称作骨连接蛋白(osteonectin)、基膜-40 (BM-40)、43 kD蛋白，最初是作为人骨和牛骨主要非胶原成分于1981年被纯化的[2]。SPARC是结合于细胞和细胞外基质的生物活性糖蛋白, 主要作用为调节细胞黏附、增殖和基质合成。近年来国内外研究发现, 在正常人的甾体细胞、软骨细胞、胎盘滋养层细胞、血管平滑肌细胞中,SPARC呈限制性中度表达, 在很多恶性肿瘤被SPARC表达上调,如乳腺癌[3]、胃癌[4]、膀胱癌[5]、食管癌[6]、非小细胞肺癌[7]等；也有些肿瘤组织呈低水平表达或不表达，如卵巢癌[8]、胰腺癌[9]。本研究结果显示SPARC在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著低于正常子宫内膜、单纯型增生、复杂型增生、不典型增生子宫内膜组织(P<0.05)，且其低表达与子宫内膜癌组织病理学分级、手术-病理分期、肌层浸润深度、有无淋巴转移有关(P<0.05)。这表明SPARC蛋白表达水平的下调可能是子宫内膜癌病理进程的分子标志。由于SPARC表达易于用免疫组化的方法检测,使用于临床可判断肿瘤恶性程度及患者预后。对 SPARC低表达或表达缺失者,需加强术后辅助治疗,并严密随访。

上皮型钙黏素属于钙依赖的黏附素家族成员, 它的生物学功能主要是介导同型细胞间的连接来维持正常上皮细胞的形态、促进细胞间黏附及具有保持上皮细胞形态稳定的功能，因此表达下降时细胞黏附作用减弱,使得肿瘤细胞易于脱离原发灶; 细胞表型改变, 获得侵袭性生长特性[10]。研究表明在胃癌[11]、卵巢癌[12]及非小细胞肺癌[13]中出现表达下调的现象，且表达下调的E-cadherin亦与恶性肿瘤的发生及侵袭转移密不可分。本研究结果显示, 在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著低于正常子宫内膜、单纯型增生、复杂型增生、不典型增生子宫内膜组织(P<0.05)，且其低表达与子宫内膜癌组织病理学分级、手术-病理分期、肌层浸润深度、有无淋巴转移有关(P<0.05)，因此其表达下降与子宫内膜癌的发生、发展及预后密切相关。

转录抑制因子增强子属于PcG 家族成员之一。EZH2参与染色质结构形成和基因表达调节。近年来研究表明EZH2基因在人类多种肿瘤中高表达, 与恶性肿瘤发生、发展及转移密切相关。如前列腺癌[14]、乳腺癌[15]、淋巴瘤[16]中均为高表达。本研究结果显示EZH2在子宫内膜癌组织中的阳性表达率显著高于正常子宫内膜、单纯型增生、复杂型增生、不典型增生子宫内膜组织(P<0.05), 其高表达与子宫内膜癌组织病理学分级、手术-病理分期、肌层浸润深度有关(P<0.05)，与有无淋巴转移无关(P>0.05)。与淋巴转移无关的原因也可能与研究样本有限有关，故有待于扩大样本量后进一步研究。

本研究显示子宫内膜癌中SPARC、E-cadherin在子宫内膜癌组织中低表达，EZH2在子宫内膜癌组织中的高表达。SPARC、E-cadherin随着组织分化越差，手术分级越晚、肌层浸润越深、且伴有淋巴转移，其表达呈下降趋势。而EZH2随着组织分化越差，手术分级越晚、肌层浸润越深、其表达呈上升趋势，但与淋巴转移无关。SPARC与E-cadherin表达呈正相关性，与EZH2表达呈负相关性，E-cadherin与EZH2呈负相关。这种复合表达反映不同信号传导途径的同时激活促进了肿瘤细胞的增殖与进展。但这几种基因蛋白相互调节的具体机制目前尚不清楚, 有待进一步研究。总之, 联合检测SPARC、E-cadherin与EZH2的表达,可作为子宫内膜癌早期诊断及预测子宫内膜癌转移的生物潜能的生物学标志, 对预后评估具有重要意义。

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