应用CLSM对自体表皮移植治疗白癜风的疗效观察

应用CLSM对自体表皮移植治疗白癜风的疗效观察

罗 卫，马春林，吕俊卿，蔡瑞康

目的 应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察自体表皮移植治疗白癜风后的黑素细胞恢复状况。方法 采用CLSM对白癜风皮损进行检测，选择镜下显示黑素细胞完全消失的皮损进行自体表皮移植，移植后1、3、6个月动态观察黑素细胞恢复状况。结果 20例白癜风患者中，28块皮损进行了自体表皮移植，临床总成活率为96.43%，移植后CLSM成像显示黑素细胞完全恢复率为82.14%。结论 CLSM检测可作为白癜风自体表皮移植治疗适应证的选择方法，也可作为移植治疗后连续动态观察黑素细胞恢复状况的可靠手段。

共聚焦激光扫描显微镜；白癜风；表皮移植；黑素细胞

白癜风是一种常见的皮肤色素脱失性疾病，其基本病理变化表现为皮损部位黑素细胞数目的减少或者消失，传统的口服、外用药物和外科的自体表皮移植是常用的治疗方法。然而，对于外科自体表皮移植适应证的选择以及移植治疗后的效果观察，目前临床上尚无客观的影像学依据。共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)是一项新的无创性皮肤影像技术，具有在体、实时、动态三维计算机断层成像的特点[1]。笔者将这一技术应用于白癜风自体表皮移前适应证的选择和移植后的黑素变化的观察，现总结报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2011年4～6月就诊于解放军空军总医院和北京方舟白癜风医院门诊的白癜风患者共387例，按照自体表皮移植治疗的纳入标准，选择有适应证的患者20例(5.17%)，其中男性12例，女性8例，年龄15～35岁，平均22.30岁；病程1～18年，平均4.58年。共选择自体表皮移植皮损28块，其中面部16块，颈部4块，上胸及背部3块，四肢5块；皮损移植最大面积为7 cm×3 cm，最小移植面积为1 cm×2 cm。

自体表皮移植治疗白癜风适应证的纳入标准：(1)稳定期、小面积的白癜风皮损，并且经其他传统方法治疗无明显疗效；(2)Wood灯阳性；(3)CLSM检查示皮损处基底层及真皮乳头周围的黑素分布完全消失。

1.2 主要设备 共聚焦激光扫描显微镜(Vivascope 1500型，美国Lucid 公司)，光源波长为830 nm的激光束，输出功率1.0～4.5 mJ/cm2，横向分辨率2 μm(XY水平方向)，轴向分辨率1.6 μm(Z轴方向)，扫描深度为120 μm以内的表皮层及真皮浅层组织。

1.3 治疗方法 按文献[2]的方法进行自体表皮移植，移植后7 d常规换药。此后定期随访观察疗效情况。

1.4 检测方法 按照CLSM的常规检测方法，对28块移植靶皮损移植前和移植后1、3、6个月进行CLSM检测和图像的采集，观察黑素颗粒的成像情况及亮度变化，图像保存于计算机中便于自身前后对比分析。

1.5 疗效评价

1.5.1 临床评价标准 显效：移植的白斑区出现色素时间≤2 w，色素逐渐变深且有扩大趋势；有效：白斑区出现色素>2 w，且色素较浅；无效：白斑区未见色素出现或表皮移植未存活。

1.5.2 CLSM评价标准 完全恢复：移植后的白斑区出现皮肤复色与CLSM检测出现皮下黑素环及亮度一致，且黑素环恢复良好；部分恢复：移植后的白斑区出现复色与CLSM检测出现皮下黑素环及亮度基本一致，但恢复一般；无变化：移植后的白斑区未出现复色，CLSM检测也未出现皮下黑素。

2 结果

2.1 自体表皮移植结果 进行自体表皮移植的28块皮损中，临床显效25块(89.29%)，有效2块(7.14%)，无效1块(3.57%)，总有效率为96.43%。在整个过程中，除部分患者供皮区可见少许色素沉着外，均无疤痕形成和同形反应。移植治疗前后的效果见图1。

图1 胸部白斑皮损3年患者自体表皮移植治疗前后比较

2.2 CLSM检测结果 移植前检测皮损区域内基底层及真皮乳头周围明亮的“圆形”或“椭圆形”的黑素帽完全消失(图2)。自体表皮移植成活后，随着复色的出现，CLSM观察可见皮肤色素含量逐渐增多，黑素细胞树突交叉增多，逐渐形成完整的色素环，黑色素颗粒环逐渐变亮(图3)。本组28块皮损中，完全恢复23块(82.14%)，部分恢复4块(14.29%)，无变化1块(3.57%)。

图2 自体表皮移植前CLSM检测结果

白癜风表皮移植治疗前，皮损处棘细胞层下部黑素密度及亮度不同程度减少或消失

图3 自体表皮移植后不同时间CLSM检测结果

A：移植后2个月，皮肤和基底层逐步出现色素环；B：移植后3个月，皮肤棘细胞层下部和基底层色素环进一步融合增大，呈明亮的“圆形”或“椭圆形”

3 讨论

白癜风是一种常见的色素脱失性皮肤病，国内外的研究表明，稳定期白癜风的病理变化是由黑素细胞功能的失活到调亡过程，晚期因黑素细胞调亡而采用自体表皮移植是一种有效的治疗方法[3]。然而，既往对于白癜风移植手术适应证的选择尚无一种理想的方法，主要通过临床经验进行判断确定治疗方式；而组织病理检查有创伤性，同时存在过程复杂、耗时较长、不能连续观察等局限性；皮肤镜只是在放大的状况下观察皮肤的表面结构，也观察不到皮下黑素细胞的状况。CLSM作为一种先进的细胞生物分析仪器[4]，能观察到皮肤全层细胞结构。由于皮肤中的黑素细胞含黑色素高，可呈现出折射率较高的明亮轮廓，与遮光率相对较低的角质形成细胞背景，易于辨认和观察，通常会在真皮乳头上部或周围聚集，形成特征性的“帽状”或“花环状”结构[5]。由于白癜风晚期黑素细胞调亡，CLSM检测可见皮损基底层及真皮乳头周围的黑素分布完全消失，因此该检测方法可作为白癜风患者选择自体表皮移植治疗的重要依据之一。

在移植后的复色过程中，随着移植后黑素细胞的存活，树突分裂增多，树突交叉增多，逐渐形成完整的色素环，色素含量逐渐增多，黑色素颗粒环逐渐变亮，与临床复色一致。因此，CLSM对皮肤黑素细胞的检测较目前现有的检测方法具有独特的优势[6]，可在自体表皮移植治疗白癜风后，连续动态观察黑素细胞恢复状况，值得在临床上推广应用。

[1] 王婷，后桂荣，张宁，等.基于激光共聚焦显微镜图像的黑色素瘤计算机辅助诊断算法研究[J].中国医学影像学杂志,2013,21(2):130-133.

[2] 董秀芹,刘涛,王红燕，等.白癜风自体表皮移植改良方法的临床研究[J].中国美容医学,2012,211(11):23-24.

[3] 赵辨.临床皮肤病学[M].4版.南京：江苏科技出版社，2010：1268-1274.

[4] Calzavara-Pinton P,Longo C,Venturini M,et al.Reflectance confocal microscopy for in vivo skin imaging[J].Photochem Photobiol,2008,84(6):1421-1430.

[5] 李彦希，黎智，陶轶妮.激光共聚焦扫描显微镜在皮肤科的应用进展及评价[J].重庆医学,2013,42(16):1904-1906.

[6] 李泓馨,张选棉,高天文.“皮肤CT”——皮肤病诊断的新手段[J].中国皮肤性病学杂志,2007,21(7):432-434.

Application of CLSM to observesion of curative effect of autologous epidermal grafting on vitiligo

Luo Wei1,Ma Chunlin2,Lü Junqing2,Cai Ruikang1

1.Department of Dermatology,Air Force General Hospital of PLA,Beijing,100142,China;2.Fangzhou Vitiligo Hospital,Beijing,100022,China

Objective To observe the changes of melanocytes in vitiligo after autologou epidermal grafting under confocal laser scanning microscope(CLSM).Methods CLSM was applied to detect the skin lesions of vitiligo;the lesions without melanocytes under CLSM were selected for autologou epidermal grafting and dynamic observation under CLSM was made for the changes of melanocytes 1,3 and 6 months after grafting.Results 28 lesions in 20 cases with vitiligo were performed autologou epidermal grafting;the total clinical survival rate was 96.43%;the full recovery of melanocytes on CLSM imaging after grafting reached 82.14%.Conclusions CLSM detection can help the indication selection of autologous epidermal grafting for vitiligo and it is a reliable method of dynamic observation of melanocyte recovery after grafting.

confocal laser scanning microscope(CLSM)；vitiligo；epidermal grafting；melanocyte

100142 北京，解放军空军总医院皮肤科(罗 卫，蔡瑞康)；北京方舟白癜风医院(马春林，吕俊卿)

R 758.41

A

1004-0188(2014)05-0513-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.05.019

2014-03-17)