复方多肽核酸溶液对雏鸡免疫增强作用的研究

张从敬　张再辉　刘霞　齐静　孙振华　胡明　刘玉庆　骆延波

摘要：对7日龄健康雏鸡免疫前24 h按照分组分别使用复方多肽核酸溶液和生理盐水，然后以新城疫克隆30弱毒苗点眼滴鼻，在免疫后7、14天心脏采血，采用HI法检测新城疫抗体水平。结果表明：应用复方多肽核酸溶液及新城疫克隆30弱毒苗后各试验组7天抗体水平明显升高， 14日龄、21日龄抗体水平经t检验，试验组与对照组组间差异显著（P<0.05），试验组间差异不显著（P>0.05）。14日龄时各试验组外周血T细胞值与对照组差异显著（t>1.96，P<0.05）。21日龄时各试验组外周血T细胞值与对照组差异极显著（t>2.57，P<0.01）。研究结果显示复方多肽核酸溶液是一种很有前途的生物免疫增强剂。

关键词：复方多肽核酸溶液； 体液免疫；细胞免疫 ；α-醋酸萘酯酶法； 抗体； T细胞比例

中图分类号：S852.5+2文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）05-0115-03

兽用细胞因子类产品具有作用剂量小、生物活性高、作用迅速、疗效确实等优点，因此该类产品具有广阔的市场前景。但目前开发研制技术尚未完全成熟，此类产品开发与研制正处于试验阶段，能在兽医临床大量应用的则更少[1，2]。复方多肽核酸溶液以特殊工艺合成的小分子多肽辅以少量稳定剂、防腐剂研制而成。本品生物活性高，具有增强免疫力、提高疫苗免疫效果、缓解疾病临床症状的作用，且具有广谱提高畜禽免疫力的作用[3]。现将本品对新城疫克隆30弱毒苗免疫增强作用临床情况汇报如下。

1材料与方法

1.1试验材料

试验动物：7日龄健康雏鸡200只。

试验药品：复方多肽核酸溶液，批号20120601，规格为5 mL/瓶，由山东省健牧生物药业有限公司（原山东省农业科学院实验兽药厂）提供。

饲料：雏鸡全价配合饲料，购于兽药批发市场。

鸡红细胞悬液：本试验室自制。

化学试剂：淋巴细胞分离液、2.5%戊二醛、副品红溶液、4%亚硝酸钠溶液、六偶氮副品红溶液、醋酸萘酯溶液、磷酸盐缓冲液、甲基绿染色液等，均购自有关单位或自行配制。

主要仪器：血球计数板、六位数分类计数器、双目生物显微镜等。

新城疫克隆30弱毒苗：购自相关兽药销售商。

1.2试验方法

1.2.1试验分组将试验用鸡随机分成A、B、C、D四个组，A、B为试验组，C、D为对照组。A组每只鸡注射0.2 mL复方多肽核酸溶液，B组每只鸡口服0.2 mL复方多肽核酸溶液，C组口服0.2 mL生理盐水，D组注射0.2 mL生理盐水。

1.2.2试验方法A、B、C、D四组7日龄雏鸡免疫前24 h按照分组分别处理，然后以新城疫克隆30弱毒苗点眼滴鼻，分别在免疫后7、14天心脏采血，采用HI法检测新城疫抗体水平，并求其平均值。同时参照α-醋酸萘酯酶法（α-ANAE法）[5]进行外周血T、B细胞计数，重复6次，求其百分率平均值，并采用新复极差检验。

2结果与分析

2.1抗体水平

试验结果表明，应用复方多肽核酸溶液及新城疫克隆30弱毒苗后7天各试验组抗体水平明显升高。即由表1可以看出14日龄及21日龄抗体水平明显高于对照组（生理盐水及新城疫克隆30弱毒苗组），经t检验，试验组A、B组与对照组C、D组间差异显著，试验组间差异不显著（P>0.05）。

2.2外周血T细胞值百分率

从表2中可以看出，A、B、C、D组14日龄雏鸡的外周血T细胞平均值分别为56.467%、53.767%、34.645%、35.366%，经统计处理表明，各试验组T细胞平均值与对照组相比提高极显著（t>1.96，P<0.01）。A、B、C、D组21日龄雏鸡的外周血T细胞平均值分别为65.767%、61.334%、38.655%、39.765%，经统计表明各试验组外周血T细胞平均值与对照组相比提高极显著（t>2.57，P<0.01）。

3结论与讨论

3.1本试验抗体水平测定结果显示，两个试验组与对照组新城疫HI抗体水平差异显著（P<0.05），证明复方多肽核酸溶液对新城疫克隆30弱毒苗具有明显的免疫增强作用。复方多肽核酸溶液中含有具有生物活性的小分子多肽，当其进入机体内能够提高免疫系统的功能，机体对于疫苗毒株反应能力大大提高，从而使得试验组新城疫HI抗体水平较对照组高，且差异显著。

两个试验组与对照组T淋巴细胞百分率差异极显著（P<0.01），证明复方多肽核酸溶液对T细胞值具有明显的提高作用。复方多肽核酸溶液能够提高免疫系统的功能，而T淋巴细胞作为免疫细胞的一种，也得到一定程度的提高，因此试验组T细胞百分率较对照组高，且差异显著。

3.2注射组和口服组抗体水平相差不显著，证明注射和口服复方多肽核酸溶液的效果相同。由于复方多肽核酸溶液含有小分子多肽等成分，通过注射途径其被机体吸收的速度较快，因此注射组新城疫抗体水平会升高，T细胞比例升高。小分子多肽分子量较小（低于10 000道尔顿），能够不被胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、DNA酶和RNA酶等分解，因此当其进入体内时能够快速被肠道吸收，进入血液循环，从而作用于免疫系统[5，6]，所以口服组新城疫抗体水平也会升高，T细胞比例也会升高。注射与口服途径吸收利用有效成分的速度均较快，因此在临床上表现为两者的免疫效果相当，差异不显著，因此该免疫增强剂应用前途很广阔。

3.3复方多肽核酸溶液具有较高生物活性，其作用机理与化学类免疫增强剂（例如盐酸左旋咪唑等）存在较大差异。复方多肽核酸溶液中多肽等为动物机体内正常存在的物质，正常状态下其浓度较低，当浓度提高后，其生物活性表现相当显著，能够在较短时间内提高机体免疫应答反应的强度及速度[6]，因此生物活性优势较传统化学类免疫增强剂显著，是极具有发展前途的生物免疫增强剂。endprint

参考文献：

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