HPLC-ELSD法测白癜风胶囊中黄芪甲苷的含量

2014-07-18郑凯王雅静

中国现代药物应用 2014年6期

郑凯王雅静

郑凯王雅静

目的建立HPLC-ESLD法测定白癜风胶囊中黄芪甲苷含量的方法。方法采用Aglient C18 色谱柱；漂移管温度：50℃；载气压力：30 PSI 流动相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0 ml/min, 柱温：20℃。结果黄芪甲苷进样量在0.4169～8.036 ug范围内浓度对数与峰面积对数线性关系良好(r=0.9994)；平均回收率(n=6)为101.3%, RSD为1.7% 。结论本法简捷、准确、重复性好, 可作为评价白癜风胶囊中黄芪甲苷的质控方法。

蒸发光散射检测器；高效液相色谱；黄芪甲苷；白癜风胶囊

白癜风胶囊收在于《中国药典》2010年版一部, 由补骨脂、黄芪、红花、川穹、当归、香附、桃仁、丹参、乌梢蛇、紫草、白鲜皮、山药、干姜、龙胆、蒺藜等15味中药材组成的复方制剂。具有活血行滞、祛风解毒。用于经络阻隔、气血不畅所致的白癜风, 症见白斑散在分布、色泽苍白、边界较明显。药典规定含量测定以补骨脂素为指标成分, 有关黄芪甲苷含量未作规定, 本研究为白癜风胶囊中的黄芪甲苷含量提供了一种较为有效的检验方法。

1 仪器与试剂

美国Waters E2695高效液相色谱仪(蒸发光散射检测器)；CPA225D赛多利斯电子天平(精度±0.01 mg)

标准品：黄芪甲苷(批号：110781-200612 由中国食品药品检定研究院提供)；色谱乙腈(20130322 安徽时联), 自制超纯水, 试剂均为分析纯, 白癜风胶囊, 见表2。

2 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-4 5u (4.6 mm×200 mm)；漂移管温度50℃；空气压力：30 psi；流动相：乙腈-水(32:68)；流速：1.0 ml/min; 柱温：35℃, 进样量：20 μl。

3 溶液的配制

3.1对照溶液精密称定黄芪甲苷对照品, 加甲醇分别制成含0.2 mg/ml和0.1 mg/ml的溶液。

3.2供试溶液取20粒样品内容物, 研细, 称取, 精密称定4.0 g置具塞锥形瓶中, 精加甲醇100 ml, 称重, 超声30 min,放冷, 再称重, 补足减失的重量, 摇匀, 过滤, 精取50 ml, 置水浴上蒸干, 残渣加水50 ml使溶解, 用水饱和正丁醇振摇提取3次, 共50 ml, 合并正丁醇提取液, 用100 ml氨试液洗涤1次, 再用100 ml正丁醇饱和的水洗涤一次, 取正丁醇液,置水浴上蒸干, 残渣加甲醇溶解, 转移5 ml量瓶中, 稀至刻度, 摇匀, 过滤, 取续滤液。

3.3空白辅料实验按处方量制不含黄芪甲苷空白辅料溶液, 按3.2项下方法制备, 即得。

4 方法与结果

4.1专属性试验取3.3项下空白辅料溶液, 对照溶液和供试溶液各20 μl, 依法测定, 结果表明, 对照溶液色谱图中黄芪甲苷主峰的保留时间为10.806 min, 供试溶液色谱图与对照溶液色谱图主峰保留时间处有色谱峰出现, 空白辅料溶液在相应的保留时间处无色谱峰, 表明空白辅料溶液无干扰,专属性好, 见图1。

图1 白癜风胶囊HPLC色谱图

4.2精密度试验精取供试溶液, 连续进样6次, RSD=1.3%,精密度良好。

4.3重复性试验取同一批供试溶液(批号为120406), 依法测定含量, 结果6次测定平均含量黄芪甲苷为45 μg/粒, RSD=1.5%。

4.4溶液稳定性试验取同一批供试液, 室温放置后0、2、4、8、24 h, 精密量取20 μl进样, 计算黄芪甲苷含量平均值为42 μg/粒 RSD=1.7% 表明稳定性好。

4.5线性关系考察精取黄芪甲苷对照溶液(0.4169 mg/ml) 1、2、5、10、15、20 μl, 重复进样两次, 用外标两点对数方程计算, 以进样量(μg)为横坐标, 色谱峰面积为纵坐标, 所得线性回归方程为：logY=1.2937logX+6.0825 r=0.9994 结果表明, 黄芪甲苷在0.4169～8.036 μg范围内浓度对数与峰面积对数呈良好的线性关系。

4.6加样回收率试验精取2 g已知含量的样品6份, 精密加入对照溶液(0.008338 mg/ml) 50 ml, 摇匀, 再精密加入50 ml甲醇, 摇匀, 依法测定, 结果平均回收率为101.3% (n=6), RSD=1.3%,见表1。

4.7样品测定分别精取对照溶液2、5 μl与供试溶液20 uL, 按给定色谱条件测定, 用外标两点对数方程计算, 结果见表2。