HPLC法测定金马肝泰分散片中淫羊藿苷的含量

冯庭平，黄顺旺，陈 曼，宋少江

（1.安徽省立医院药剂科，安徽 合肥 230001；2.安徽省药物研究所，安徽 合肥 230022 3.安徽大学化学化工学院，安徽 合肥 230601；4.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016）

HPLC法测定金马肝泰分散片中淫羊藿苷的含量

冯庭平1，黄顺旺2，4，陈 曼3，宋少江4

（1.安徽省立医院药剂科，安徽 合肥 230001；2.安徽省药物研究所，安徽 合肥 230022 3.安徽大学化学化工学院，安徽 合肥 230601；4.沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016）

目的 建立高效液相色谱法测定金马肝泰分散片中淫羊藿苷（C33H40O15）含量的方法。方法 采用 Diamonsil-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈—水（25∶75）为流动相，流速为1.2 mL·min-1，检测波长：270 nm。结果 淫羊藿苷对照品在0.255 5～0.766 5 μg范围内成良好的线性关系（r＝0.999 9），平均回收率为99.67%（n＝5），RSD为1.00%。结论 此法简便、快速、准确、专属性强，适用于金马肝泰分散片中淫羊藿苷（C33H40O15）的含量测定。

高效液相色谱法；金马肝泰分散片；淫羊藿苷

“金马肝泰颗粒”［1］是在贵州苗族验方的基础上，以中医理论为指导加以筛选研制而成的，处方有马蹄金、铁包金、马鞭草、防己、败酱草、淫羊藿、黄芪、赤芍、丹参等九味药材组成，功能为清热解毒，健脾利湿，活血化瘀，用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢性肝炎。收载于《国家中成药标准汇编》肝胆科分册，是目前国内治疗肝炎疾病的首选中成药之一［2］。目前，该药国内上市的有颗粒、片剂、胶囊，金马肝泰分散片为改剂型新药。

原剂型质量标准中只是对本品中赤芍的有效成分芍药苷 （C23H28O11）进行含量测定研究，为了更好的控制本品质量，确保临床用药的有效性，我们参照有关文献［3-5］，采用高效液相色谱法，对金马肝泰分散片中淫羊藿的有效成分淫羊藿苷 （C33H40O15）进行含量测定，尚未见文献报道。

1 仪器与试药

二元高压梯度高效液相色谱系统，包括紫外／可见可变波长检测器；METTLER TOLEDO AB135-S双量程电子天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）DZF-1型真空干燥箱（上海跃进医疗器械厂）；AS2060B超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。

淫羊藿苷对照品（批号110737-200810，含量测定用），购自中国药品生物制品检定所，金马肝泰分散片样品（批号110401、110402，110403、规格：每片0.5 g）以及缺味阴性样品为自制。乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 采用 Diamonsil-C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈—水（25∶75）；流速1.2 mL· min-1；检测波长：270 nm，柱温：40℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷减压干燥24 h的淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 按处方组成，取除淫羊藿外的其余药材，按制备工艺要求，制成不含淫羊藿的分散片，按供试品溶液制备项下的方法，制成阴性对照溶液。

2.5 系统适用性试验 精密吸取淫羊藿苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，在此条件下淫羊藿苷分离效果好，峰形较好；供试品溶液色谱图中淫羊藿苷保留时间与对照品一致，而阴性对照无干扰；淫羊藿苷对照品溶液色谱图中，理论塔板数为7 339（n＝3），因此将理论塔板数定为不少于3 500。供试品溶液色谱图中，测得淫羊藿苷的分离度R＝2.114（n＝3）（应大于1.5），淫羊藿苷拖尾因子 T＝1.04（0.95＜T＜1.05）符合《中国药典》2010年版一部规定。见图1～3。

图1 淫羊藿苷对照品 HPLC图谱

图2 阴性样品 HPLC图谱

图3 供试品 HPLC图谱

2.6 线性关系考察 分别精密吸取淫羊藿苷对照品溶液（51.1 mg·L-1）5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件，分别进行分析，测定其峰面积值，并以对照品量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，得淫羊藿苷回归方程：Y＝948 928.6X-10 116.5，r＝0.999 9，n＝5。结果表明：淫羊藿苷对照品在0.255 5～0.766 5 μg范围内成良好的线性关系。

2.7 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样 5次，测定峰面积值，经计算RSD＝1.34%。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号110401），每隔一定的时间（2 h）进样、测定一次，经计算淫羊藿苷的 RSD＝1.76%，结果表明：供试品溶液至少在10 h内稳定。

2.9 重复性试验 取同一批号（110401）的样品，分别制备 5份供试品溶液，按上述色谱条件测定，淫羊藿苷的平均含量为每片 2.87 mg，RSD为0.98%（n＝5），表明本方法重复性良好。

2.10 加样回收率试验 取已知淫羊藿苷含量（每片2.87 mg）的样品5份，每份约0.1 g，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液（0.6447 g·L-1）1 mL，按2.3项下供试品溶液的制备方法进行制备，测定，结果淫羊藿苷平均回收率为99.67%，RSD为1.00%，表明：本法测定淫羊藿苷含量准确度高。见表1。

2.11 样品测定 经对自制 3批次样品（批号：110401、110402，110403）进行淫羊藿苷含量测定，含量测定结果分别为每片2.86、3.06、2.99 mg（n＝3），RSD分别为1.21%、1.13%、0.97%。

表1 淫羊藿苷含量测定加样回收率试验结果（n＝5）

3 讨论

3.1 提取方法选择 本研究比较了2种提取方法：即回流提取和超声提取。结果由于2种方法在同一时间（20 min）内测得的结果非常相近，考虑到超声提取比回流提取更简便快捷，故本研究采用超声提取方法提取淫羊藿苷。

3.2 提取溶剂的选择 取本品研细的细粉约 0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、稀乙醇两种溶剂各 25 mL，称定重量，超声处理20 min，分别测定其峰面积，两种提取溶剂峰面积比较，甲醇提取的峰面积高，故提取溶剂选择甲醇。

3.3 提取时间的选择 取本品研细细粉约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，超声处理20、40、60 min，分别测定其峰面积，结果提取20、40、60 min淫羊藿苷含量很接近，20 min就可基本提取完全，故提取时间选择20 min。

试验表明采用HPLC法测定金马肝泰分散片中淫羊藿苷的含量，方法准确、快速、方便、重复性好，对进一步完善该品种的质量标准提供参考依据。

参考文献：

［1］国家食品药品监督管理局.国家中成药标准汇编肝胆科分册［S］.2002：金马肝泰颗粒WS-10313（ZD-0313）-2002.

［2］ 刘三都，王吉超，舒德云，等.金马肝泰治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究.世界中西医结合大会论文摘要集［C］.1997：200.

［3］ 陈 玲，刘 智，杨桂芬，等.金马肝泰片质量标准研究［J］.贵州医药，2013，37（4）：361-363.

［4］ 丁伟杰，胡 盈，白敦耀.加味五子补肾丸的质量标准［J］.中国医院药学杂志，2008，13（28）：1118-1119.

［5］ 国家药典委员会.中国药典：一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：306.

Assay of icarrin in jinma gantai dispersible tablets by HPLC

FENG Ting-ping1，HUANG Shun-wang2，4，CHEN Man3，et al
（1.Department of Pharmacy，Anhui Provincial Hospital，Hefei 230001，China；2.Anhui Provincial Institute of Pharmacology，Hefei 230022，China；3.College of Chemical Engineering，Anhui University，Hefei 230601，China；4.School of Chinese Materia Medicia，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China）

Objective To establish an HPLC method for assay of Icarrin in jinma gantai dispersible tablets.Methods The assay was performed on a Diamonsil-C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）.The mobile phase was composed of acetonitrile∶water（25：75）.The flow rate was 1.2 mL·min-1.The detection wavelength was 270 nm.Results Icarrin showed a good linear（r＝0.9999）in the range of 0.255 5～0.766 5 μg.The average recovery was 99.67%（n＝5），and RSD was 1.00%.Conclusions The method might be simple，rapid，accurate and specific，which is suitable for the assay of Icarrin（C33H40O15）in jinma gantai dispersible tablets.

HPLC；jinma gantai dispersible tablets；assay

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.03.014

2013-10-29，

2013-12-08）

黄顺旺，男，副主任药师，研究方向：新药研究与开发，E-mail：huangsw5503＠163.com