高效液相色谱法在甘草锌口腔复合膜剂测定中的应用效果

应宝洪+张庆鸿

[摘要] 目的 利用高效液相色谱法对甘草锌口腔复合膜剂中的氨来呫诺与甘草酸的含量进行测定，以提高口腔质控的水平。方法 利用标准曲线的制备方法称取适量的氨来呫诺和甘草酸单铵盐的标准品进行处理，对其峰面积进行测定，最后利用回归方程计算其各自的浓度。结果 经测定与计算，氨来呫诺的精密度RSD约为0.51%；甘草锌的精密度RSD约为0.58%，金属锌的含量约为0.66%，甘草酸的平均回收率约为98.82%。 结论 氨来呫诺可以有效地减轻患者的疼痛感，而甘草锌则具有锌与甘草酸的药理作用，在临床中具有推广价值。

[关键词] 高效液相色谱法；甘草锌；口腔复合膜；氨来呫诺；甘草酸；口腔溃疡

[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）17-0131-03

Analysis on application effect of HPLC in licozinc oral composite membrane measurement

YING Baohong1 ZHANG Qinghong2

1.Department of Stomatology，Quzhou City People's Hospital in Zhejiang Province， Quzhou 324004，China；2.Department of Stomatology，Dental Hospital Affiliated to Medical College of Zhejiang University， Hangzhou 310000，China

[Abstract] Objective To measure the content of amlexanox and glycyrrhizic acid in licozinc oral composite film by high performance liquid chromatography， aim to improve the level of oral quality control. Methods The right amount of amlexanox and monoammonium glycyrrhizinate was taken by the preparation of standard curve method， then the peak area was determined， finally， the concentration was calculated by the regression equation. Results After the determination and calculation， amLexanox of precision of RSD was about 0.51%； licozinc of precision of RSD was about 0.58%， the zinc metal was about 0.66%， the average recovery rate of glycyrrhizic acid was about 98.82%. Conclusion Ammonia can effectively relieve the pain of patients， while licorice zinc has zinc and glycyrrhizic acid pharmacological effects， has the value of popularization in clinical practice.

[Key words] HPLC； Licozinc； Oral composite membrane； Amlexanox； Glycyrrhizic acid； Oral ulcer

在日常生活中，口腔溃疡困扰着许多人，病发时会使人产生强烈的灼痛感，而且经常反复发作，所以给口腔溃疡患者造成了很大的痛苦[1]。如何提高口腔质控水平，已成为当前口腔溃疡治疗领域的一项重要课题。2013年11月，衢州市人民医院利用高效液相色谱法对甘草锌口腔复合膜中的氨来呫诺与甘草酸含量进行了测定，目的是探究高效液相色谱法在口腔用药方面的检测效果，这对于提升口腔质控水平有一定的实践意义，具体测定情况报道如下。

1材料与方法

1.1药品与仪器

本次实验的时间为2013年11月，所选药品为山东中科泰斗化学有限公司生产的批号为060624的氨来呫诺、中国生物制品鉴定所生产的批号为110731-200511的甘草酸单铵盐、山西临汾珠宝制药有限公司生产的批号为061203的甘草锌；天津凯通化学试剂三厂生产的乙酸铵（分析纯）；天津市化学一厂生产的批号为90085的乙酸二钠（分析纯）、天津北方天意化学试剂厂生产的甲醇（分析纯）、天津康科德科技有限公司生产的甲醇（色谱纯）、天津化学试剂一厂生产的浓度为36%的乙酸与天津精细化工开发中心生产的正丁醇、氯化锌、氯化钠和浓度为10%的HCI及自制重蒸水和亚铁氰化钾试液。

本次试验的仪器主要有孔径为0.8μm、Ф为25的微孔滤膜；型号为BP210S的电子分析天平；由昆山超声仪器有限公司生产的KQ-10B型号的超声波清洗仪器；美国热电公司生产的型号为SP8810的高效液相色谱仪和型号为spectra100的检测器；天津中环实验锅炉公司生产的高温炉；Anastar色谱的工作站；坩埚钳；坩埚和酸式滴定管。

1.2测定方法

1.2.1制备标准曲线 称取实验所需的氨来呫诺样品量，保证其精密性，然后将其放入容量为50 mL的容量瓶中，并用流动相溶液将其稀释、溶解直至刻度，之后将其摇匀再制取实验所需的母液，保证其浓度为50 μg/mL，然后再分别吸取1.2、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mL母液，放入10 mL的容量瓶里，再对其进行稀释直至要求刻度，最后摇匀得到梯度浓度分别为6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0 μg/mL的液体。最后测定所得的不同浓度的液体的峰面积，并利用回归方程式来计算推测浓度与峰面积的关系。在计算时，相关系数r为0.9999，用X表示氨来呫诺的浓度，用Y表示峰面积，那么Y=69288X+6527.7。endprint

称取实验所需甘草酸单铵盐样品量，保证其精密性，然后将其放入容量为50 mL的容量瓶中，并用流动相溶液将其稀释、溶解直至刻度位置，之后摇匀制取实验所需母液，保证浓度为180 μg/mL[2]。然后再分别吸取2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0 mL母液，放入10 mL容量瓶里，再对其进行稀释直至要求刻度，最后摇匀得到梯度浓度分别为10.0、9.0、8.0、7.0、6.0、5.0 μg/mL的液体。最后测定所得的不同浓度的液体的峰面积，并利用回归方程式来计算推测浓度与峰面积的关系。在计算时，相关系数r为0.9999，用X表示甘草酸单铵盐的浓度，用Y表示峰面积，那么Y=6329.8X+3426。

1.2.2色谱的具体情况 色谱的具体情况为：流动相为-0.2 mol/L的醋酸铵溶液和比例为67∶33∶1的冰醋酸甲醇；色谱柱为5μm，Ф为4.6mm×200mm的Kromasil-C18色谱柱；流速为0.8 mL/min；检测波长为250 nm；柱温为正常室温；进样量则为20μL。

1.2.3制备试验所需的样品溶液 取10片4cm×2cm的药膜，并将其剪碎，然后利用精密的方法对其称取1片药剂的量，放到容量为250 mL的量瓶里，再用事先准备好的流动相溶液将其稀释、过滤。最后稀释到之前的5倍直至指定的刻度。阴性样品溶液的制取方法与之相同。

1.2.4测定样品的RSD值 准备4cm×2cm的药膜，氨来呫诺与甘草锌的复合膜3批，并将其剪碎放到容量为250mL的量瓶中，用流动相进行稀释直到指定刻度的位置，并将其摇匀，然后继续稀释至5倍获得测试溶液[3]。对制得的溶液进行取样，每样3份，并分别进样20μL，计算三次测试的平均值，最后再计算3批的RSD结果。

1.2.5测定回收率 将适量的甘草酸单铵盐放入准备好的阴性样品溶液中，制成与样品溶液浓度相当的分别为120%、100%、80%的甘草酸单铵盐溶液，并将其稀释至5倍，再放入20μL的样品进行测定。最后统计其回收率，计算平均值与RSD数值[4]。同样按照该法制备120%、100%和80%浓度的氨来呫诺溶液，再进行相同的稀释与测定，求其RSD值与回收率。

1.2.6测定重现性 取6份甘草锌膜剂的样品来制备试验所需的溶液，并和之前一样进样20μL，然后计算其甘草酸的面积积分数值，之后要对其RSD的数值进行计算[5]。按照同样的方法测定氨来呫诺的相应数据，测定其重现性。

1.2.7测定稳定性 把制备好的甘草酸单铵盐溶液分别静置8h、6h、4h、2h、1h、0h，然后再进样20μL，根据溶液的具体情况来测定其RSD的值与峰面积，并且用相同的办法对氨来呫诺的制取溶液进行测定，最终测算出其稳定性的大小[6]。

1.2.8测定精密度 吸取浓度为7μg/mL的标准的曲线溶液甘草锌，并分别将其进样20μL，并且重复该动作6次，对其峰面积与RSD进行测定与计算[7]。然后按照相同的方法对氨来呫诺的相关数值进行计算，测定其精密度。

1.2.9测定甘草锌中锌的含量 取3片4cm×2cm的甘草锌药膜，并分别对其进行精密称量，记录其质量大小，然后放在准备好的坩埚钳里，并放在高温炉里加热1h，在加热期间要保持其温度维持在700℃。当药膜完全灰化以后再冷却移至烧杯，加入2mL的浓度为10%的HCl溶解产生的残渣，再加入适量的铬黑剂、10mL氯化铵和25mL水，再利用EDTA对其进行滴定，当溶液的颜色从紫红色转变为纯蓝色时即为制取成功[8]。

2结果

经过测定与计算，氨来呫诺的重现性RSD约为0.22%，稳定性RSD约为1.12%，精密度RSD约为0.51%，平均回收率约为99.62%；甘草锌的重现性RSD约为0.82%，稳定性RSD约为1.01%，精密度RSD约为0.58%。甘草酸的平均回收率约为98.82%。金属锌的含量约为0.66%。氨来呫诺与甘草酸的样品含量测定结果具体见表1。

表1 氨来呫诺与甘草酸样品含量的测定结果

3讨论

随着人们生活节奏的加快和饮食习惯的改变，口腔溃疡的发病率出现逐年升高的趋势，现在已经高达20%[9，10]。目前，比较通用的治疗口腔溃疡的药物有普通膜剂、含漱液、含片、涂剂和散剂等普通制剂。但是，对于人体口腔这个比较特殊的生理环境来说，绝大多数的制剂都无法长时间停留，无法满足人体口腔的特点需求就无法在口腔的病变部位保持适量的药物，所以治疗效果总是差强人意。但是，随着药物水平的不断发展，复合膜剂的出现在一定程度上弥补了这些传统药物的缺陷，它在含药的膜上再覆盖了一层膜，这样就可以和含药膜组合成双层的复合膜，作为亲水层的含药层，向内贴在患处，这样可以保证膜剂更好地完成单向释药的过程，保证口腔溃疡的病变部位接受到足够的药量[11]。

氨来呫诺（Amlexanox）是食品和药物管理局批准的用于治疗口腔溃疡的一种药物。根据临床试验统计可知，约5%的氨来呫诺在治疗轻微性复发性口腔类溃疡时非常安全，具有可行性，可以有效地减轻患者的疼痛感，并且可以提高患者口腔溃疡部位创面的愈合程度。而甘草锌则是将豆科类植物甘草（Glycyrrhi-zauralensis Fisch）的干燥根进行分离得到的[10-12]。它是锌与甘草酸的结合物，因此，具有锌与甘草酸这两种药物的药理作用。首先，锌可以提高口腔创伤组织自身的再生能力，提高黏膜的再生能力；其次，甘草酸可以抗炎、抗溃疡、解毒、抗病毒和肾上腺皮质激素等，从而加速患者口腔溃疡部位的愈合[13，14]。为了使这两种药物的质量得到恰当的控制，本实验将氨来呫诺、甘草酸与金属锌作为指标，利用高效液相色谱法对氨来呫诺与甘草酸进行测定，并且利用配位滴定法对金属锌的含量进行测定。

经过试验，本文对氨来呫诺与甘草酸样品中的含量做了具体的测定，为高效液相色谱法在甘草锌口腔复合膜的质控中提供了相应的依据。由此可知，甘草酸口腔复合膜对于口腔溃疡等特殊的口腔病变部位的治疗具有很好的疗效，可以补给患者口腔病变部位足够的治疗药物，帮助患者早日康复，比传统的普通膜剂、含漱液、含片、涂剂和散剂等普通制剂效果更好，而且，从本次试验两种药剂的制备、精密度、平均回收率、稳定性、重现性以及锌含量等的测定结果可知，该口腔复合膜具有稳定性好、利用率高、密度精确等优点[15-17]。因此，这种复合膜药剂更易于被广大患者接受，具有很广阔的市场发展空间。需要注意的是，在进行制备与测定的过程中必须注意其准确性，只有这样才能保证测定结果的科学性。endprint

综上，高效液相色谱法在测定复方甘草锌口腔复合膜中的氨来呫诺与甘草酸含量的方法与配位滴定方法测定甘草锌中锌含量的方法具有很多优点，操作方便，而且测定结果也十分准确。因此，本文的试验方法在临床中具有很大的推广价值。

[参考文献]

[1] 陈虹. 氨来呫诺和表皮生长因子口腔复合膜的质控方法研究[J]. 河北医药，2011，16（33）：2521-2522.

[2] 王同顺，房志仲. 复方甘草锌与氨来呫诺口腔复合膜的处方筛选[J]. 现代药物与临床，2010，25（3）：207-209.

[3] 宋九华，李琼，万东海. HPLC测定九味羌活丸中甘草酸的含量[J]. 乐山师范学院学报，2010，25（5）：43-44.

[4] 杨凤昆，蔡莉娟，房志仲，等. 反相高效液相色谱法测定复方甘草锌口腔复合膜中甘草酸的含量[J]. 天津医药，2009，37（3）：221-222.

[5] 王同顺，房志仲，李锡晶，等. 复方甘草锌口腔复合膜的质控方法研究[J]. 天津医科大学学报，2010，16（1）：54-56.

[6] 汪秋兰，王文清，马永贵，等. 高效液相色谱法在中药有效成分含量测定中的应用[J]. 医药导报，2011，11（3）：1474-1476.

[7] 郝旭华，刘斌钰. 甘草锌与维生素B2联合治疗中年复发性口腔溃疡疗效观察[J]. 实用医技杂志，2011，18（9）：959-960.

[8] 张春雨，杨丽杰，郭美华，等. 高效液相色谱法测定复方口腔扁平苔癣涂膜剂中左氧氟沙星含量[J]. 中国药业，2012，10（21）：43-44.

[9] 叶志清，饶春芳，胡友德，等. 用布喇格光纤光栅传感器测定口腔复合树脂材料光固化收缩与温度演化特性[J]. 光子学报，2012，41（5）：528-530.

[10] 刘丽波，李玉红，岳炳芬，等. 护理质控在护理管理中的重要性[J]. 中国保健营养，2013，1（2）：256-257.

[11] 孙磊，蔡莉娟. 正交实验法筛选甘草锌口腔溃疡膜处方的实验研究[J]. 天津医药， 2013，（8）：826-827.

[12] 李沙，李晓飞，黄郁莹，等. 紫草膜剂的制备及左旋紫草素的含量测定[J]. 中国医院药学杂志， 2011，（12）：961-966.

[13] 邓利军. 表皮生长因子在复发性口腔溃疡中的疗效研究[J]. 中外医疗，2013，5（21）：67-68.

[14] 张复兰，罗晓冰，杜池，等. 甘草锌复合维生素B联合治疗ROU90例临床观察[J]. 临床口腔医学杂志， 2010， 2（25）：115-116.

[15] 姚冬梅. 甘草锌胶囊治疗复发性口腔溃疡疗效观察[J]. 医药卫生， 2013，（8）：147-148.

[16] 尹文国. 甘草锌联合康复新液治疗复发性阿弗他溃疡的效果观察[J]. 中国医药导报， 2013，10（13）：73-75.

[17] 汪春梅. 维生素B2联合甘草锌治疗复发性口腔溃疡的临床研究[J]. 中国医药指南，2012，（23）：488-489.

（收稿日期：2013-11-06）endprint

综上，高效液相色谱法在测定复方甘草锌口腔复合膜中的氨来呫诺与甘草酸含量的方法与配位滴定方法测定甘草锌中锌含量的方法具有很多优点，操作方便，而且测定结果也十分准确。因此，本文的试验方法在临床中具有很大的推广价值。

[参考文献]

[1] 陈虹. 氨来呫诺和表皮生长因子口腔复合膜的质控方法研究[J]. 河北医药，2011，16（33）：2521-2522.

[2] 王同顺，房志仲. 复方甘草锌与氨来呫诺口腔复合膜的处方筛选[J]. 现代药物与临床，2010，25（3）：207-209.

[3] 宋九华，李琼，万东海. HPLC测定九味羌活丸中甘草酸的含量[J]. 乐山师范学院学报，2010，25（5）：43-44.

[4] 杨凤昆，蔡莉娟，房志仲，等. 反相高效液相色谱法测定复方甘草锌口腔复合膜中甘草酸的含量[J]. 天津医药，2009，37（3）：221-222.

[5] 王同顺，房志仲，李锡晶，等. 复方甘草锌口腔复合膜的质控方法研究[J]. 天津医科大学学报，2010，16（1）：54-56.

[6] 汪秋兰，王文清，马永贵，等. 高效液相色谱法在中药有效成分含量测定中的应用[J]. 医药导报，2011，11（3）：1474-1476.

[7] 郝旭华，刘斌钰. 甘草锌与维生素B2联合治疗中年复发性口腔溃疡疗效观察[J]. 实用医技杂志，2011，18（9）：959-960.

[8] 张春雨，杨丽杰，郭美华，等. 高效液相色谱法测定复方口腔扁平苔癣涂膜剂中左氧氟沙星含量[J]. 中国药业，2012，10（21）：43-44.

[9] 叶志清，饶春芳，胡友德，等. 用布喇格光纤光栅传感器测定口腔复合树脂材料光固化收缩与温度演化特性[J]. 光子学报，2012，41（5）：528-530.

[10] 刘丽波，李玉红，岳炳芬，等. 护理质控在护理管理中的重要性[J]. 中国保健营养，2013，1（2）：256-257.

[11] 孙磊，蔡莉娟. 正交实验法筛选甘草锌口腔溃疡膜处方的实验研究[J]. 天津医药， 2013，（8）：826-827.

[12] 李沙，李晓飞，黄郁莹，等. 紫草膜剂的制备及左旋紫草素的含量测定[J]. 中国医院药学杂志， 2011，（12）：961-966.

[13] 邓利军. 表皮生长因子在复发性口腔溃疡中的疗效研究[J]. 中外医疗，2013，5（21）：67-68.

[14] 张复兰，罗晓冰，杜池，等. 甘草锌复合维生素B联合治疗ROU90例临床观察[J]. 临床口腔医学杂志， 2010， 2（25）：115-116.

[15] 姚冬梅. 甘草锌胶囊治疗复发性口腔溃疡疗效观察[J]. 医药卫生， 2013，（8）：147-148.

[16] 尹文国. 甘草锌联合康复新液治疗复发性阿弗他溃疡的效果观察[J]. 中国医药导报， 2013，10（13）：73-75.

[17] 汪春梅. 维生素B2联合甘草锌治疗复发性口腔溃疡的临床研究[J]. 中国医药指南，2012，（23）：488-489.

（收稿日期：2013-11-06）endprint

综上，高效液相色谱法在测定复方甘草锌口腔复合膜中的氨来呫诺与甘草酸含量的方法与配位滴定方法测定甘草锌中锌含量的方法具有很多优点，操作方便，而且测定结果也十分准确。因此，本文的试验方法在临床中具有很大的推广价值。

[参考文献]

[1] 陈虹. 氨来呫诺和表皮生长因子口腔复合膜的质控方法研究[J]. 河北医药，2011，16（33）：2521-2522.

[2] 王同顺，房志仲. 复方甘草锌与氨来呫诺口腔复合膜的处方筛选[J]. 现代药物与临床，2010，25（3）：207-209.

[3] 宋九华，李琼，万东海. HPLC测定九味羌活丸中甘草酸的含量[J]. 乐山师范学院学报，2010，25（5）：43-44.

[4] 杨凤昆，蔡莉娟，房志仲，等. 反相高效液相色谱法测定复方甘草锌口腔复合膜中甘草酸的含量[J]. 天津医药，2009，37（3）：221-222.

[5] 王同顺，房志仲，李锡晶，等. 复方甘草锌口腔复合膜的质控方法研究[J]. 天津医科大学学报，2010，16（1）：54-56.

[6] 汪秋兰，王文清，马永贵，等. 高效液相色谱法在中药有效成分含量测定中的应用[J]. 医药导报，2011，11（3）：1474-1476.

[7] 郝旭华，刘斌钰. 甘草锌与维生素B2联合治疗中年复发性口腔溃疡疗效观察[J]. 实用医技杂志，2011，18（9）：959-960.

[8] 张春雨，杨丽杰，郭美华，等. 高效液相色谱法测定复方口腔扁平苔癣涂膜剂中左氧氟沙星含量[J]. 中国药业，2012，10（21）：43-44.

[9] 叶志清，饶春芳，胡友德，等. 用布喇格光纤光栅传感器测定口腔复合树脂材料光固化收缩与温度演化特性[J]. 光子学报，2012，41（5）：528-530.

[10] 刘丽波，李玉红，岳炳芬，等. 护理质控在护理管理中的重要性[J]. 中国保健营养，2013，1（2）：256-257.

[11] 孙磊，蔡莉娟. 正交实验法筛选甘草锌口腔溃疡膜处方的实验研究[J]. 天津医药， 2013，（8）：826-827.

[12] 李沙，李晓飞，黄郁莹，等. 紫草膜剂的制备及左旋紫草素的含量测定[J]. 中国医院药学杂志， 2011，（12）：961-966.

[13] 邓利军. 表皮生长因子在复发性口腔溃疡中的疗效研究[J]. 中外医疗，2013，5（21）：67-68.

[14] 张复兰，罗晓冰，杜池，等. 甘草锌复合维生素B联合治疗ROU90例临床观察[J]. 临床口腔医学杂志， 2010， 2（25）：115-116.

[15] 姚冬梅. 甘草锌胶囊治疗复发性口腔溃疡疗效观察[J]. 医药卫生， 2013，（8）：147-148.

[16] 尹文国. 甘草锌联合康复新液治疗复发性阿弗他溃疡的效果观察[J]. 中国医药导报， 2013，10（13）：73-75.

[17] 汪春梅. 维生素B2联合甘草锌治疗复发性口腔溃疡的临床研究[J]. 中国医药指南，2012，（23）：488-489.

（收稿日期：2013-11-06）endprint