正交试验法优化陈皮中橙皮苷的提取工艺研究

徐宁宁

(徐州生物工程职业技术学院生物工程系，江苏 徐州 221000)

陈皮由芸香科植物柑橘的成熟果皮干燥后制得，具有理气健脾，燥湿化痰的功效，临床上主要用于治疗消化系统及呼吸系统疾病。主要成分包括黄酮、肌醇、维生素、挥发油、柠檬烯、对羟福林，胡萝卜素、果胶、N-甲基酪胺等，其中陈皮黄酮的主要成分有:橙皮甙、新橙皮苷、柚皮甙元、川陈皮素、红橘素。

橙皮苷在陈皮中的含量约为3%，临床上用其维持血管正常渗透压，降低血管脆性，抑制口腔癌、大肠癌等的癌变以及抗病毒作用。橙皮苷提取工艺的研究，对开发和利用柑桔皮、增加经济效益具有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

陈皮，无水乙醇，橙皮苷对照品。

1.2 仪器与设备

紫外可见分光光度计:T6;R系列旋转蒸发仪:上海申生科技有限公司;多用真空泵:SHZ-DⅢ循环水式，巩义市予华仪器有限责任公司;FA-220413电子天平;其他试剂均为分析纯。

1.3 工艺流程

1.4 陈皮药材的不同提取方法的比较

1.4.1 提取方法

⑴水蒸气蒸馏提取法。称取陈皮粗粉20g，加入250mL水，照蒸馏法提取并收集馏液，然后将提取液滤过后进行浓缩，混合到含挥发油的蒸馏液中，调至20mL，待用。

⑵乙醇回流提取法。取陈皮粉末20g，加8倍量乙醇加热回流提取2次，每次1h，滤液浓缩调节至20mL，待用。

⑶乙醇渗漉法。称取陈皮药材20.0g，将其粉碎使成粗粉，用60%的乙醇作溶剂，浸渍24小时后，缓缓进行渗漉，速度保持每分钟3-5mL，收集漉液200mL，浓缩并调节至20mL，静置，取上清液即得。

1.4.2 检测波长的选择

取适量的橙皮苷对照品，加入少量的甲醇进行溶解，稀释制成浓度为0.1mg/mL，在200-400 nm波长范围内测定吸收光谱，橙皮苷在甲醇中的最大吸收波长为283 nm。分析扫描结果可得出，橙皮苷的最大吸收波长为283nm。因此将HPLC的检测波长设定为283nm。

1.4.3 色谱条件

色谱柱:使用C18-ODS反向柱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

流动相:乙腈-水-36%的冰乙酸溶液(19:81:0.8);流速为0.8-1.2 mL/min;

检测波长:UV283 nm;峰分离符合规定，无拖尾，保留时间适中，理论塔板数达2500以上，符合定量要求。

1.4.4 对照品溶液的制备

精密称定适量的橙皮苷对照品，加入甲醇，使其浓度为0.1mg/mL，即得。

1.4.5 供试品溶液的制备

表1 不同的提取方法的橙皮苷的量

分别量取以上制得的浓缩液1mL，各加入20mL甲醇后超声处理20min，收集滤液，即为供试品溶液。经过水蒸气蒸馏法与乙醇回流法和渗漉法提取的陈皮提取液中橙皮苷的含量见表1。

由试验结果可知，水蒸气蒸馏法提取的橙皮苷远少于乙醇回流提取和乙醇渗漉提取法所得，又因为处方中的香橼和紫苏叶与陈皮同时提取，综合考虑，故选取乙醇渗漉提取法作为陈皮的提取工艺。乙醇的相关影响因素将在工艺条件优化中研究确定。

2 陈皮的提取工艺的研究

乙醇提取工艺中，乙醇的浓度、用量、提取的时间和次数对提取效果的影响较大，为提高药材的提取收率，本次实验以橙皮苷的量、干浸膏的量为指标，采用正交试验法对其进行研究，根据实践经验，其中将溶剂的浓度、溶剂的用量、提取的时间、提取的次数作为因素，故以b(3 4)进行设计，结果以橙皮苷的量、干浸膏的量为依据进行了考察。

2.1 橙皮苷标准曲线的绘制

准确称取橙皮苷标准品0.0500g，于100mL容量瓶中，用碱性乙醇溶液配制成0.5mg/mL的母液。从中各取出0.25mL、0.50mL、0.75mL、1.00mL、1.25mL、1.50mL、1.75mL、2.00mL、2.25mL、2.50mL、2.75mL的母液，分别移入50mL的容量瓶中，用碱性乙醇溶液将其稀释至刻度，摇匀。用紫外-可见分光光度计在283.0nm波长下测定标准溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=0.1571X+0.0015，相关系数R2=0.9992，表明在0.25～2.75mL的浓度范围内，线性关系良好。

2.2 最大吸收波长的确定及对提取物的检验

取一定体积的上述标准溶液(质量浓度0.004mg/mL)稀释至10mL。用空白液对照进行紫外光谱分析，测定出其最大吸收波长。另取上述的陈皮提取液进行实验，做空白对照然后再进行紫外光谱分析，通过对比可得出，两者的最大吸收波长基本一致，由此可以确定出所提的物质为橙皮苷。

2.3 提取液中橙皮苷含量的测定

将以上测得的吸光度A的值代入下式，计算出橙皮苷的提取率/%:

2.4 陈皮提取工艺设计方案如下

精密称取陈皮药材50.0g，按照表2进行提取，过滤、定容、备用。

表2 正交实验设计表

3 结果与讨论

3.1 结果与分析

表3 提取工艺正交实验表

表4 干浸膏方差分析表

表5 橙皮苷提取率方差分析表

3.2 讨论

上表显示，在溶剂的浓度、溶剂的用量、提取时间、提取次数四个影响因素中，溶剂的浓度是主要影响因素，以干浸膏的用量作为依据时，最佳工艺为A2B2C3D2;以橙皮苷的提取率作为依据时，最佳工艺为A2B2C2D3。极差排列顺序为:RA＞Rc＞RB＞RD，方差分析显示乙醇的浓度，能显著影响橙皮苷的产率，其余的因素对橙皮苷影响不大，因此最佳陈皮提取工艺为:15倍量75%的乙醇渗漉提取2次，每次2h。

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