IL-33测定及其与蜂蛰伤致急性肾损伤关系的研究

朱平，谢莉，杨林

(三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院肾病内科1、普外科2，湖北宜昌 443000)

IL-33测定及其与蜂蛰伤致急性肾损伤关系的研究

朱平1，谢莉2，杨林1

(三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院肾病内科1、普外科2，湖北宜昌 443000)

目的通过检测蜂蛰伤致急性肾损伤患者早期血清IL-33的水平，探讨其与蜂蛰伤致急性肾损伤的发生和发展的关系。方法收集30例蜂蛰伤致急性肾损伤患者3 h内入院和28例健康体检对照者的血清标本。应用抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清IL-33的水平；应用全自动生化分析仪、全自动血液分析仪检测生化指标，并分析IL-33水平与各生化指标的相关性。结果蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清中IL-33水平为(128.4±68.8)pg/m l，明显高于健康对照组[(29.1±14.3)pg/m l，P＜0.01]。血清IL-33水平明显与血清肌酐、肌酸激酶、肌红蛋白、尿NAG、α1M呈正相关(P＜0.01)，而与血总胆红素及血色素无明显相关(P＞0.05)。结论蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清IL-33水平明显增高，且与疾病的发生发展密切相关，其可能通过影响肾小管功能参与蜂蛰伤致急性肾损伤的发生发展。

蜂蛰伤；急性肾损伤；IL-33

蜂蜇伤在山区夏秋季节较常见，毒蜂尤其黄蜂蜇伤可并发过敏性反应、肾功能衰竭甚至多脏器功能损害（MODS），严重时可危及患者生命。少处蜂蛰伤可引起局部反应，多处蜂蛰伤可迅速出现全身中毒反应，同时或者相继出现肾、肝、心、脑及肺功能衰竭，以肾功能衰竭最为常见[1]。急性肾功能不全(ARF)常由血管内溶血、横纹肌溶解或休克引起的急性肾小管坏死(ATN)所致，也有少数报道可继发于肾小管间质性肾炎，蜂蛰伤导致的急性肾损伤病理研究提示存在肾小管坏死[2]。IL-33是最近发现的IL-1家族细胞因子，IL-33主要表达在成纤维细胞、上皮细胞和内皮细胞[3-4]，IL-33可主动或者被动释放出来，参与炎症反应。蜂蛰伤致急性肾损伤患者病理提示肾小管上皮细胞坏死[2]，IL-33可以从坏死的肾小管上皮细胞中释放出来，但关于IL-33与蜂蛰伤致急性肾损伤的关系，国内外未见报道。本研究主要探讨蜂蛰伤引起急性损伤患者血清IL-33水平变化及与疾病的相关性，推测IL-33参与疾病发生发展的可能机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料30例黄蜂蜇伤致急性肾损伤的患者，男性18例，女性12例，年龄18～63岁，平均（35.34±14.92）岁，均来自本院2011年8月至2013年8月肾病科住院患者。诊断均符合2005年修订的急性肾损伤诊断标准[5]。所有患者均在蜂蜇伤3 h以内入院，平均蜂蜇针眼数(14.46±9.35)个，且院外未使用药物治疗，无全身各系统慢性疾患。28例正常对照为本院健康体检人员，男性12例，女性16例，年龄22～65岁，平均(37.24±17.31)岁。

1.2 研究方法

1.2.1 血清IL-33检测(ELISA法)取正常人和蜂蛰伤急性肾损伤患者外周血2 m l，于4℃下离心10m in，分离血清。人IL-33的ELISA检测试剂盒由美国Ebioscience公司提供，按试剂盒说明书进行操作。简述如下：捕获抗体稀释为3µg/m l后，每孔加入100µl，4℃下过夜；洗涤3次后，室温封闭液封闭1 h；将100µl分离血清加到包被孔中，室温孵育2 h；洗涤3次后，将生物素标记的检测抗体100µl加到孔中，室温再孵育1 h；洗涤3次后，将链亲和素标记的HRP加入样品中，室温孵育30m in；洗涤6次后，加HRP的底物，室温孵育15m in；上机检测OD值。

1.2.2 相关血液指标检测血生化指标应用HITACHI7600型全自动生化分析仪检测，按照说明书进行；血色素由Sysmex XE-2100全自动血液分析仪检测，均采用国际公认的常规检测方法。

1.2.3 尿液检测样品的收集与处理：取任意中段尿3m l离心后取上清液测定；尿NAG及α1微球蛋白应用日本OLYMPUSAU2700全自动生化分析仪检测。

1.3 统计学方法所有数据均采用SPSS19.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，计量资料的比较采用t检验；相关性分析采用Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 蜂蛰伤急性肾损伤患者及正常对照组血清IL-33比较水平30例蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清IL-33水平为(128.4±68.8)pg/m l，28例正常健康体检者血清IL-33水平为(29.1±14.3)pg/m l，蜂蛰伤致急性肾损伤患者早期血清IL-33的含量明显高于正常对照组，差异具有统计学意义(t=7.495，P＜0.05)，见图1。

2.2 蜂蛰伤致急性肾损伤患者血尿检测结果30例蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清生化指标分别为Scr (457.7±240.6)µmol/L、CK(2135.1±964.1)U/L、肌红蛋白(301.3±181.7)µg/L、总胆红素(61.34±43.78)µmol/L、血红蛋白(97.3+21.7)g/L。在所有检测的蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清标本中，100%的患者血肌酐大于133µmol/L，肌红蛋白大于50µg/L，肌酸激酶大于200 U/L(见表1)。

图1 蜂蛰伤致急性肾损伤患者及健康对照组血清IL-33水平

图2 血清IL-33水平与Scr、CK及Mb相关性

表1 蜂蛰伤致急性肾损伤患者血尿检测结果(±s)

表1 蜂蛰伤致急性肾损伤患者血尿检测结果(±s)

注：Scr，血肌酐；CK，肌酸激酶；Mb，肌红蛋白；TBIL，总胆红素；Hb，血红蛋白；α1-MG，α1微球蛋白。

项目蜂蛰伤致急性肾损伤患者参考值Scr(µmol/L) CK(U/L) M b(µg/L) TBIL(mmol/L) Hb(g/L) NAG(U/L) α1-MG(mg/L) 457.7±240.6 2135.1±964.1 301.3±181.7 61.34±43.78 97.3±21.7 68.8±36.7 159.1±67.7 44～133 20～175 50～80 1.7～20 110～160 0～21 0～12

2.3 血清IL-33与血Scr、CK、Mb、TBIL、Hb相关性分析蜂蛰伤致急性肾损伤患者中血清IL-33水平与Scr(r=0.975，P＜0.01)、CK(r=0.838，P＜0.01)、Mb(r=0.872，P＜0.01)具有显著性正相关，而与TBIL(r=0.108，P=0.07)、Hb(r=0.216，P=0.08)无相关性(见图2)。

2.4 血清IL-33水平与肾小管功能的关系在蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清IL-33水平与尿NAG (r=0.864，P＜0.01)及α1微球蛋白(r=0.661，P＜0.01)显著正相关(见图3)。

图3 血清IL-33水平与尿NAG酶及α1微球蛋白相关性

3 讨论

多肽类(蜂毒肽、蜂毒明肽)、酶类(磷脂酶A2、透明质酸酶)及非肽非酶类物质(组胺、儿茶酚胺)等组成了蜂毒液的主要成分[6]。局部疼痛主要由生物胺类引起；酶类(磷酸酶、透明质酸酶、组胺及儿茶酚胺等)可引起变态反应。蜂毒肽可引起血管内溶血、横纹肌溶解及凝血功能障碍，破碎的红细胞碎片及肌溶解蛋白对肾小管阻塞和毒性作用可致肾小管坏死，从而导致急性肾损伤。此外，也有证据表明蜂毒素可以直接损伤肾小管，但血管内溶血及横纹肌溶解导致的血红蛋白尿、肌红蛋白尿仍然是引起急性肾小管坏死的主要原因[7]。

IL-33mRNA可表达于人和鼠的多种器官和细胞。IL-33主要表达在成纤维细胞、上皮细胞和内皮细胞[3-4]。然而，在静息状态下IL-33定位于细胞核，在某些特定条件下可被动释放出来。蜂蛰伤致急性肾损伤病理表现主要表现为急性肾小管坏死[2]。本课题组前期研究显示在蜂蛰伤所致急性肾损伤中坏死肾小管上皮细胞可表达IL-33，提示IL-33在该疾病过程中起重要作用（未发表）。本实验研究发现，蜂蛰伤致急性肾损害患者早期血清中IL-33水平明显高于正常对照组(P＜0.05)，可能与早期肾损伤导致肾小管坏死释放IL-33有关。

IL-33的受体ST2和IL-1RAP也广泛表达在多种细胞特别是Th2和肥大细胞表面。IL-33能保护宿主抗蠕虫感染；能促进Th2反应而降低动脉粥样硬化的发生。相反，IL-33同样能加重由肥大细胞介导的哮喘、关节炎、遗传性过敏皮炎及过敏反应等[8]。IL-33是否参与蜂蛰伤致急性肾损伤未见报道。本研究分析了IL-33与蜂蛰伤致急性肾损伤严重程度（血肌酐）的相关性，结果显示IL-33与血肌酐呈正相关(P＜0.05)。肌酸激酶及肌红蛋白是引起肌溶解导致急性肾损伤的重要原因。本研究也分析了血清IL-33水平与CK及肌红蛋白的关系，结果提示IL-33与CK及肌红蛋白明显正相关(P＜0.05)，提示IL-33与蜂蛰伤引起急性肾损伤的危险因素呈正相关；尿NAG酶及α微球蛋白升高提示肾小管功能受损，本研究提示IL-33尿NAG酶及α1微球蛋白明显正相关(P＜0.05)，推测IL-33可能通过促进肾小管阻塞等机制参与蜂蛰伤导致急性肾损伤的过程。

研究表明，蜂毒可通过抑制红细胞膜上的Na-K-ATP酶和葡萄糖磷酸脱氢酶活性而使细胞渗透压改变引起膨胀破裂而导致血管内溶血。蜂毒也可通过影响肝脏细胞色素p450酶系代谢产生的毒性产物而直接引起肝脏损伤，本研究也分析了IL-33与血色素、总胆红素之间的关系，结果显示IL-33与血总胆红素及血色素无明显相关，提示IL-33与蜂蛰伤导致的血液系统及肝脏损伤不相关，其主要在蜂蛰伤引起急性肾损伤过程中起重要作用。但IL-33如何参与蜂蛰伤引起急性肾损伤的机制还需要进一步研究。

综上所述，本研究在国内外首次发现，蜂蛰伤致急性肾损伤患者的血清中IL-33含量显著上调，且可能参与导致急性肾损伤危险因素相关。但IL-33与蜂蛰伤引起血液系统及肝脏损伤的危险因素无明显相关。

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Association of interleukin-33 and acute kidney injury induced by wasp stings.

ZHU Ping 1,XIE Li2,YANG Lin 1. Department of Nephrology 1,Department of Surgery 2,the First College of Clinical Medical Science,Three Gorges University,Yichang 443000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo analyze the association between serum interleukin(IL)-33 and acute kidney injury induced by wasp stings.MethodsThirty patients with acute kidney injury by wasp sting and 28 health controls were recruited.The serum level of IL-33 was detected by ELISA,and other parameters(Scr,CK,Mb,TBiL,Hb, NAG,α1M)were detected by automatic clinical chemistry analyzer.ResultsThe level of serum IL-33 in wasp sting induced acute kidney injury patientsw as significantly higher than thatof the healthy controls(P＜0.01).The levels of serum IL-33were related with Scr,CK,Mb,NAG andα1M(P＜0.01).However,the levelsof IL-33 wasnotassociated w ith TBiL and Hb.ConclusionThe level of serum IL-33 is significantly higher in acute kidney injury induced by wasp stings,and itmay exacerbate the kidney injury through influencing the function of renal tubules.

Wasp sting;Acute kidney injury;Interleukin-33

R692

A

1003—6350（2014）04—0526—03

2013-11-12)

湖北省自然科学基金项目（编号：2012FFB03708）；宜昌市科学研究与开发项目(A13301-020)

朱平。E-mail：topgan2000@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.04.0202