34βE12、P63、CK5/6、α-SMA在前列腺基底细胞中的表达及意义

冯小兰，黄喜健

(广西医科大学附属民族医院病理科1、泌尿外科2，广西南宁530001)

·临床病理·

34βE12、P63、CK5/6、α-SMA在前列腺基底细胞中的表达及意义

冯小兰1，黄喜健2

(广西医科大学附属民族医院病理科1、泌尿外科2，广西南宁530001)

目的 探讨高分子量细胞角蛋白34βE12、肌上皮标记物p63、细胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌动蛋白α-SMA在前列腺基底细胞中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测，观察34βE12、p63、CK5/6、α-SMA在前列腺增生(PH)、低级别上皮内瘤变(LGPIN)、高级别上皮内瘤变(HGPIN)、前列腺癌(Pca)中的表达。结果30例PH组标本34βE12、p63、CK5/6大多阳性表达，10例LGPIN组多(++)表达，15例HGPIN组多(+)表达，Pca组大多阴性表达。Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。α-SMA基底细胞少量表达，Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论前列腺基底细胞表达34βE12、p65、CK5/6，p65优于34βE12，α-SMA多阴性表达。在前列腺标本中联合检测34βE12、p65、CK5/6有助于对前列腺癌及其他不同病变的鉴别诊断。

34βE12蛋白；p65蛋白；CK5/6蛋白；α-SMA蛋白；前列腺增生；前列腺上皮皮病变；前列腺癌

前列腺癌是当前威胁全球老年男性健康的主要恶性肿瘤，欧美发达国家最常见，我国近几年来发病率有所增加，但前列腺良恶性病变的鉴别是病理诊断中的难点之一。当前列腺高分化癌与良性增生的鉴别诊断出现困难时，常用的解决方法是根据前列腺基底细胞的存在与否决定其性质。本研究采用免疫组化方法，检测高分子量细胞角蛋白34βE12、肌上皮标记物p65、细胞角蛋白CK5/6、平滑肌肌动蛋白α-SMA在前列腺增生、上皮内瘤变及癌组织中的表达情况，探讨其在前列腺良恶性病变鉴别诊断中的价值。

1 材料与方法

1.1 材料选取2010-2013年广西民族医院收治并确诊的30例良性前列腺增生症(PH)[在PH病例中找到前列腺上皮内肿瘤形成，5例并低级别上皮内瘤变(LGPIN)，2例并高级别上皮内瘤变(HGPIN)]和30例前列腺癌(Pca)(癌旁找到5例LGPIN，13例HGPIN)。抗34βE12、p65、CK5/6、α-SMA单克隆抗体及试剂盒均购自福州迈新生物技术公司产品。标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋。每例前列腺病变的病理诊断均经过2名高年资病理医生的复查，诊断准确无误。

1.2 免疫组织化学方法采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法进行免疫组织化学检测，以磷酸盐缓冲液(PBS)代一抗作为阴性对照，已知阳性的前列腺组织切片作为阳性对照，操作步骤按SP试剂盒说明书进行。

1.3 阳性判断标准镜下观察切片阳性信号呈棕黄色颗粒状，p65阳性为胞核着色，34βE12、CK5/6、α-SMA阳性为胞质着色,分级标准：基底细胞层无着色细胞(-)；基底细胞层少数细胞散在着色(+)；基底细胞层着色有间断(++)；基底细胞层着色连续、明显(+++)。

1.4 统计学方法应用SPSS17.0统计学软件进行分析。双向有序等级资料的关联性分析采用行X列表法。假设检验的显著性水准取α=0.05。

2 结果

2.134 βE12表达34βE12阳性颗粒定位于前列腺基底细胞胞质。PH组30例腺泡基底细胞多阳性表达，其中3例阴性(-)表达，4例弱阳(+)表达，余均为(++)～(+++)，阳性率为90%(27/30)；LGPIN组10例多为(++)，其中1例弱阳(+)表达，1例阴性表达，阳性率为90%(9/10)；HGPIN组15例多为弱阳(+)，其中2例阳性(++)表达，3例阴性(-)表达，阳性率为80% (12/15)；Pca组30例多阴性(-)表达，其中2例弱阳(+)表达，阳性率为6.67%(2/30)。Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 p65 表达阳性颗粒定位于基底细胞胞核(图1)，着色明显，背景清晰。PH组30例腺泡基底细胞多阳性表达，其中1例阴性(-)表达，3例弱阳(+)表达，余均为(++)～(+++)，阳性率为96.7%(29/30)；LGPIN组10例多为(++)，其中2例弱阳(+)表达，1例阴性表达，阳性率为90%(9/10)；HGPIN组15例多为弱阳(+)，其中3例阳性(++)表达，2例阴性(-)表达，阳性率为86.7% (13/15)；Pca组30例多阴性(-)表达，其中2例弱阳(+)表达，阳性率为6.67%(2/30)。Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 CK5/6表达CK5/6阳性颗粒定位于前列腺基底细胞胞质。PH组30例腺泡基底细胞多阳性表达，其中4例弱阳(+)表达，5例阴性表达，余均为++～+++，阳性率为83.3%(25/30)；LGPIN组10例多弱阳(+)表达，2例阴性表达，阳性率为80%(8/10)；HGPIN组15例多为弱阳(+)，5例阴性(-)表达，阳性率66.7% (10/15)；Pca组30例多阴性(-)表达，其中3例弱阳(+)表达，阳性率为10%(3/30)。Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.4 α-SMA表达α-SMA阳性颗粒定位于前列腺间质平滑肌细胞胞质，基底细胞阴性(图2)或少量表达。PH组30例腺泡基底细胞4例弱阳(+)表达，阳性率为13.3%(4/30)；LGPIN组10例其中2例弱阳(+)表达，阳性率为20%(2/10)；HGPIN组15例其中1例弱阳性(+)表达，阳性率为6.67%(1/15)；Pca组30例多阴性(-)表达，1例弱阳(+)表达，阳性率为3.33% (1/30)。Pca组与PH组、LGPIN组、HGPIN组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

图1 良性腺体p65(++)，癌腺体p65(-)(SP×400)

图2 良性腺体α-SMA（-）（SP×400）

3 讨论

在前列腺临床病理检查中，基底细胞的存在与否是鉴别前列腺良、恶性病变的最关键指标，它的重要性甚至超过了肌上皮细胞消失对诊断乳腺导管癌的重要性。在乳腺良恶性病变诊断中34βE12、p65、CK5/6、α-SMA抗体的联合使用提高了诊断的准确性[1]。有作者认为前列腺的底层细胞和乳腺或涎腺的相似，为肌上皮细胞[2]。本研究探讨在前列腺良恶性病变中这四种抗体的表达情况及对鉴别诊断的价值。

人前列腺腺体主要由3种细胞构成，即分泌细胞、基底细胞和神经内分泌细胞。基底细胞约占前列腺细胞总数的10%，不具有分泌功能，被认为是前列腺的多潜能干细胞。光镜下基底细胞圆形，细胞小，细胞核大而不规则，细胞质少[3]。自从1995年Wojno等[4]通过免疫组织化学方法发现正常或良性增生的前列腺腺泡及导管的基底细胞表达高相对分子质量的角蛋白34βE12以来，34βE12广泛应用于临床诊断。有些实验证明，在少数前列腺癌中34βE12可以有明确的阳性表达[5]，而良性增生中也有假阴性的出现，有学者认为原因可能是标本在甲醛溶液中固定过久导致基底细胞着色不清[6]，因此，单独采用34βE12标记基底细胞有一定局限性。

p65是一种核蛋白，由位于染色体3q27-29的一种与p53(一种肿瘤抑制细胞)有同源性的基因编码，具有皮肤、宫颈、乳腺及泌尿生殖道上皮细胞生长及发育的功能。p65的特定同型体可在前列腺假复层上皮细胞的基底细胞、肌上皮细胞等中表达，而在前列腺分泌腺细胞和神经内分泌细胞中不表达[7]，被认为是前列腺基底细胞的良好标记物，但也有学者发现其敏感性不如34βE12[8]。两者在前列腺基底细胞中表达敏感性仍然为困扰诊断的一个问题。本研究结果显示在PH组中，34βE12表达率为90%(27/30)，p65表达率为96.7%(29/30)，两者相比p65更敏感，与部分报道的相似[9]。且与34βE12相比，p65的优点是：(1)可标记34βE12阴性的基底细胞；(2)不易产生类似于34βE12染色的不稳定性(尤其是经灼烧的TURP标本)；(3)由于其染色结果可使细胞核呈强阳性，且背景低，因此阳性结果易于鉴别[10]。

在正常和良性增生的前列腺腺体和导管周围34βE12及p65大部分表达(++)～(+++)，在LGPIN中大部分表达(++)，在HGPIN中大部分表达(+)，Pca大部分表达(-)。由此可见在前列腺PIN中基底细胞出现缺失，前列腺癌时基底细胞完全消失。基底细胞的缺失状况是鉴别良恶性病变的关键指标。34βE12及p65分别标记基底细胞的胞质和胞核，此两种抗体联合使用，或按一定稀释度混合使用，对提示良性腺泡中基底细胞标记的阳性率有帮助。

但是，本研究中PH组1例34βE12及p65均阴性表达，Pca组2例34βE12及p65均阳性表达，由于在少数良性腺体中基底细胞层可不连续或不明显，因此对于一些小灶性的腺体其基底细胞层完全消失不能单独作为确诊恶性的指标；相反，某些早期浸润性前列腺癌，如伴有或不伴有前列腺高级别上皮内瘤变的微浸润性前列腺癌，可有残留的基底细胞；前列腺腺癌可偶尔含有p65阳性的细胞，其中大多数是由于良性腺体的陷入或癌组织在有残余基底细胞的导管内扩散造成的。因此病理诊断中要以HE切片为基础，结合多方面免疫组化结果，只有在HE染色切片中见到腺泡增生有可疑恶性的细胞学和/或组织学特征时，基底细胞层的消失才可支持浸润性前列腺癌的诊断[10]。

CK5/6是一种基底细胞的标记物，在正常组织中鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞呈阳性表达[1]。本组资料中显示，除了基底层细胞呈阳性外，腺腔内部分细胞也呈阳性，在LGPIN、HGPIN、Pca中大部分呈弱阳性及阴性表达，说明在普通型增生和肿瘤增生性组织中CK5/6表达存在明显差异。

平滑肌肌动蛋白(α-Smooth MuscleActin，α-SMA)为真核细胞的一种细胞骨架蛋白，在一般情况下，α-SMA常特异性地分布于间充质来源的细胞，如平滑肌、肌上皮细胞、周细胞和基底细胞等。有报道电镜观察前列腺基底细胞体积小，细胞器较少，细胞间可见桥粒或半桥粒结构，细胞质内未见到成熟束的肌丝，表明该细胞属于基底细胞而不是肌上皮细胞[11]。本研究结果显示α-SMA主要表达于前列腺间质平滑肌细胞胞质，基底细胞少量表达，前列腺癌间质细胞出现高表达。

综上所述，前列腺基底细胞表达34βE12、p65、CK5/6，p65优于34βE12，且与乳腺不同的是α-SMA多阴性表达。我们在实际工作中首选p65，最好联合运用34βE12、p65、CK5/6这三种抗体标记基底细胞，同时一定要以光镜下形态学的观察为基础，这样才能明确诊断，为临床提供可靠的诊疗依据。

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Expression and significance of 34βE12,p65,CK5/6 and α-SMA in prostatic basic cell.

FENG Xiao-lan1,HUANG Xi-jian2.Department of Pathology1,Department of Urology2,the Affiliated Minzu Hospital of Guangxi Medical University,Nanning 530001,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and significance of high molecular weight cytokeratin(34β E12),myoepithelium marker(p65),cytokeratin(CK5/6)and smooth muscle actin(α-SMA)in the basic cells of prostate.MethodsImmunohistochemical SP method was performed to detect the expression of 34βE12,p65,CK5/6 and α-SMA in prostatic hyperplasia(PH),low-grade intraepithelial neoplasia(LGPIN),high-grade intraepithelial neoplasia(HGPIN)and prostate cancer(Pca).ResultsIn 30 PH samples,34βE12,p65 and CK5/6 were expressed(++)in 10 LGPIN samples,(+)in 15 HGPIN samples and negative in Pca samples.There were significant statistical differences between Pca group and PH,LGPIN and HGPIN groups.Little α-SMA was expressed in basal cells and there was no significant statistical difference between these groups(P＞0.05).Conclusion34βE12,p65 and CK5/6 were expressed in prostate basic cells and p65 was expressed more than 34βE12.α-SMA was negative in most of the prostatic basic cells.Joint detection of 34βE12,p65 and CK5/6 was helpful for the differential diagnosis of prostate cancer.

34βE12 protein;p65 protein;CK5/6 protein;α-SMA protein;Prostatic hyperplasia;Prostatic intraepithelial neoplasia;Prostate cancer

R697+.3

A

1003—6350(2014)21—3248—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.21.1274

2013-12-13)

冯小兰。E-mail：fengxiaolan2010@163.com