乳腺癌组织中VEGF、bFGF表达变化及其与微血管密度的关系

沈 叶，盛友华，冯一中

(1上海市第六人民医院南院奉贤区中心医院，上海201499;2苏州大学附属第二医院)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，且发病年龄不断趋于年轻化［1］。大量研究已证实，肿瘤组织内新血管的生成是肿瘤生长、转移及预后的重要影响因素［2］，而血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是最重要的血管生成正性调控因子［3，4］，在多种实体肿瘤中有高表达，且表达水平与肿瘤的恶性程度、预后密切相关［5］。肿瘤微血管密度(MVD)是特定肿瘤区域微血管计数，现已被视为生物学侵袭性、转移潜能的判定指标，其中以血管内皮细胞标记物CD34的抗原敏感性最高，但关于乳腺癌血管生成活性与MVD关系的报道较少。本研究通过检测乳腺癌组织中VEGF、bFGF、CD34的表达，探讨其与MVD的关系，为乳腺癌的基因靶向治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 上海市交通大学附属第六人民医院南院奉贤区中心医院2009年1月～2012年12月手术切除且临床资料齐全的乳腺癌组织标本75例(观察组)，均经手术及组织病理学确诊，术前均未行放、化疗。患者均为女性，年龄39～76(54.7±6.1)岁;AJCC分期:Ⅰ期26例，Ⅱ期20例，Ⅲ期24例，Ⅳ期5例;病理分型:浸润性导管癌42例，导管内癌21例，浸润性小叶癌12例。另取我院同期收治的20例女性乳腺腺瘤患者的乳腺组织作为对照组，两组年龄具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 采用免疫组化SP法。标本经10%甲醛固定、石蜡包埋，制成厚4 μm的切片;常规脱蜡、水化、0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)抗原热修复。抗人bFGF单克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司，抗人 VEGF、CD34、bFGF单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒均购自上海森雄科技实业有限公司;均采用试剂盒已知阳性组织作为阳性对照，以PBS代替一抗体作为阴性对照。bFGF、VEGF的判定标准:随机选择10个高倍镜视野(×400)计数1 000个肿瘤细胞，肿瘤细胞胞质内呈棕黄色颗粒为阳性细胞。采用许良中等［6］的计分方法对阳性细胞百分数及染色程度进行计分，两项积分乘积≥3为阳性。MVD计数:CD34定位于血管内皮细胞核，呈棕黄色，胞质可见棕黄色颗粒，参照Weidner［7］的方法，计算 MVD 值。

1.2.2 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计量资料以±s表示，比较采用t检验或方差分析;计数资料以率或百分比表示，比较采用χ2检验;相关性用配对资料的关联分析，用Spearman秩相关系数表示。P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组VEGF、bFGF蛋白表达及MVD比较 观察组VEGF、bFGF蛋白阳性表达率分别为72.0%、69.3%，MVD 为(33.81±10.95)条/HP;对照组分别为 20.0%、25.0%、(17.41±6.04)条/HP，P 均 ＜0.05。

2.2 观察组VEGF、bFGF表达及MVD与临床病理参数的关系 VEGF、bFGF表达及MVD均与TNM分期、淋巴结转移有关(P均＜0.05)，且VEGF与肿瘤直径有关(P ＜0.05)。

表1 VEGF、bFGF及MVD与乳腺癌临床病理参数的关系

2.4 观察组VEGF、bFGF表达与MVD的关系 乳腺癌患者组织中VEGF、bFGF表达与MVD均呈正相关(r分别为 0.687、0.573，P 均 ＜0.05)。

3 讨论

乳腺癌的生长、转移是一个复杂的过程，其中肿瘤组织内新生血管的生成是较为重要的影响因素。研究认为，当肿瘤直径＞2 mm时，逐步进入血管化期，肿瘤病灶将局部迅速扩散，其远处转移能力也大大增强［8，9］。肿瘤细胞诱导血管生成的潜能，需经生长因子的刺激才能转变为发挥作用的表型，其中以VEGF、bFGF对肿瘤血管生成的调控占据主导地位［10］。

本研究结果显示，乳腺癌组织中VEGF、bFGF阳性表达率及MVD计数显著高于乳腺腺瘤组织。其机制可能是VEGF、bFGF促进肿瘤血管生成，导致肿瘤组织血管数量及血管通透性增加，促进血管内物质外渗，肿瘤细胞所需氧和营养物质更加充分［11］。进一步分析发现，乳腺癌肿瘤组织中VEGF、bFGF阳性表达率及MVD计数随肿瘤直径的增大、TNM临床分期增高、淋巴结转移而增高，说明其对判断乳腺癌的恶性程度、浸润及转移具有重要价值。

目前，关于恶性肿瘤VEGF、bFGF表达与MVD的相关性仍存在争议。研究认为，VEGF表达越高的结肠癌MVD也越高，且伴转移的结肠癌VEGF及其受体的表达水平高于未转移者;但亦有学者指出，卵巢癌、子宫内膜癌等的MVD计数与其组织学分型、分化程度无关。本组资料中，乳腺癌组织中VEGF、bFGF表达均与MVD计数呈正相关。VEGF、bFGF过度表达促进血管再生，进而产生大量结构与功能异常的肿瘤血管，最终导致MVD增加。这表明肿瘤血管新生是一个多因素共同参与的复杂过程，各个因素相互协同作用，为乳腺癌肿瘤细胞的侵袭性生长提供了条件。

综上所述，乳腺癌患者癌组织中VEGF、bFGF呈过度表达，且与MVD计数呈正相关，共同参与了乳腺癌发生、发展及转移的过程，有望成为乳腺癌抗血管生成治疗的重要生物靶点。

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