参红补血颗粒薄层色谱鉴别研究

徐 岩，初洪波，于秀华，金 蕊，位 鸿，段 青，黄晓巍*

(1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.吉林大学，吉林 长春 130012；3.中国中医科学院,北京 100700)

“参红补血颗粒”是用于血虚证治疗的中药复方新药，是在长春中医药大学院内制剂“参脉注射液”的临床应用基础上研制开发的．其处方由红景天、红参、黄精、白术、麦冬等五味中药组成，具有益气生血，养血安神的功效.库页红景天分布于吉林和黑龙江，尤其吉林的长白山是其主要分布地．吉林也是红参的主产地．红参与红景天配伍相得益彰，治疗血虚证疗效尤为突出．处方中红景天、红参为君，大补元气，益气生血；黄精、白术为臣，补气养阴，健脾益肾；麦冬为佐，滋阴补血，养心安神[1]．现代研究表明，红景天能促进机体骨髓有核细胞的增殖、分化和成熟，并能提高淋巴细胞的免疫活性且具有抗肿瘤作用，其主要有效成分为红景天苷和多种黄酮苷及水溶性多糖[2-3]．红参含有多种人参皂苷及多糖，有增强体液免疫、促进造血、抗肿瘤等作用[4]．此外，黄精、白术、麦冬均有很好的增强免疫，益气滋阴的功效[5-7]．为了更好地控制参红补血颗粒的质量，本研究对其质量标准进行研究，采用薄层色谱法[8]对红景天、红参、黄精、白术进行了鉴别．

1 实验部分

1.1 仪器与试药

CAMAG型薄层色谱成像仪(瑞士CAMAG公司)；CP225D型双量程电子分析天平(德国 Sartoris公司)；KQ-100型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；GZX-9240MBE型电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司)；薄层板为青岛海洋化工厂分厂生产及烟台市化学工业研究所生产．

红景天对照药材(批号:121412-200907)；红参对照药材(批号:121045-200609)；黄精对照药材(批号:121341-201002)；白术对照药材(批号:120925-200805)；红景天苷对照品(批号:110774-200206);人参皂苷Re对照品(批号:110754-201123);人参皂苷Rg1对照品(批号:110703-201027);人参皂苷Rb1对照品(批号:110704-201318))；以上对照药材及对照品均购于中国食品药品检定研究院．参红补血颗粒样品1、样品2、样品3，批号分别为:20130901、20130902、20130903，均由长春中医药大学附属医院制剂中心提供．

1.2 红景天的薄层鉴别

取本品5g，研细，加甲醇10ml，超声处理30min，滤过，取续滤液，作为供试品溶液．同时按处方和制法及供试品溶液制备方法制成不含红景天的阴性对照溶液．另取红景天对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液．再取红景天苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液．按照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6:3:1:1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏．供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，如图1所示.

图1 红景天薄层鉴别

1.3 红参的薄层鉴别

取本品5g，研细，加水1ml搅拌湿润，加水饱和的正丁醇50ml，超声处理30min，吸取上清液，加3倍量氨试液，摇匀，分层，取上层液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液.按处方和制法及供试品溶液制备方法制成不含红参的阴性对照溶液．另取红参对照药材1g，同法制成对照药材溶液．再取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液．按照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰．供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，如图2所示.

图2 红参薄层鉴别

1.4 黄精的薄层鉴别

取本品5g，研细，加70%乙醇20ml，加热回流1h，抽滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液．同时按处方和制法及供试品溶液制备方法制成不含黄精的阴性对照溶液.另取黄精对照药材1g，同法制成对照药材溶液．按照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(5:2:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰．供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，如图3所示.

图3 黄精薄层鉴别

1.5 白术的薄层鉴别

取本品5g，研细，加正己烷10ml，超声处理15min，滤过，取滤液作为供试品溶液．同时按处方和制法及供试品溶液制备方法制成不含白术的阴性对照溶液．另取白术对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液．按照薄层色谱法试验，吸取上述新制备的三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰．供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，如图4所示.

图4 白术薄层鉴别

2 讨论

2.1 上样技术问题

上样是薄层色谱分析操作最关键的一步，也是第一步．它直接关系到能否得到分离度好的薄层色谱．在进行上样操作时，由于操作不当等原因，毛细管或注射器等上样装置可能会对薄层表面造成一定的机械性损伤，这将会对物质的定量分析结果带来一定的影响．质量高、流程规范的上样操作，对于样品的定量及定性分析至关重要．此外，在选用溶剂时应尽可能地避免使用溶解度相对大的溶剂，同时尽可能地保证溶剂的粘度小，沸点适中．在实际应用中，由于中药中含有许多并不十分明确的物质，同时又要保证其所含成分尽可能地全部得到分析处理，在实验中使用最频繁的溶剂还是甲醇和乙醇．而许多甲醇或乙醇的萃取液却常常由于含有太多杂质而无法得到较高质量的薄层色谱，这是因为其萃取液还没有经过预处理环节所致，所以对于中药的薄层色谱鉴别实验，样品的预处理也是一个非常值得注意的步骤．

2.2 展开剂的选择

在薄层鉴别中，对于同一种吸附薄层，展开剂极性越大，对化合物的展开能力越强，反之则弱．为防止某些被分离化合物斑点的拖尾，可以在展开剂中加入少量酸、碱等化合物．在展开剂中加入丙酮等中等极性的溶剂可使两种互不混合的溶剂进行混溶，同时加快展速，并降低展开剂的粘度．

2.3 展开剂与显色剂的使用问题

对于薄层色谱鉴别，展开剂的预饱和是非常重要的，最好在展开之前预饱和5～10min，这样可以防止斑点的拖尾现象以及边缘效应；其次，展开剂不可放置太久或者再次使用，否则会因有机溶剂不同程度的挥发而造成展开剂比例的改变，使薄层板出现假前沿；最后，喷显色剂时不应太靠近薄层板，否则会因力度太大而将斑点喷花．

薄层板在经过上样和展开剂展开操作后，有些样品还需要用显色剂进行显色处理，如果需要用到氨水和碘蒸气进行熏蒸处理，熏蒸的时间要足够长，使之反应充分，直至显色后再将其取出．如果要进行喷雾显色，所压缩的气体要均匀．加热显色时需注意加热的时间和温度．有的成分加入试剂(如挥发油成分或甾醇类成分经香草醛硫酸、硫酸醋酐等试剂显色)后，加热温度的高低、时间长短的不同或加热后放置时间的不同，斑点的显色都可能会随之而发生改变．

3 结论

本研究参照《中国药典》2010年版红景天、红参、黄精、白术薄层鉴别方法，同时查阅了大量相关文献．在此基础上，建立了上述四味药材的薄层层析鉴别方法，方法简便、可靠、重现性好．该方法能有效控制产品的内在质量，可作为参红补血颗粒的质量控制标准．

参考文献：

[1]黄晓巍,初洪波,位鸿.正交试验优选参红补血颗粒提取工艺[J].吉林中医药,2012,32(11):1152-1153.

[2]孙晓军,赵慧,林杰.红景天的药理与制剂研究综述[J].中国药师,2005,8(5):415-516.

[3]马莉.红景天苷抗疲劳作用及其机制的实验研究[D].上海:第二军医大学,2006.

[4]许海顺,蒋剑平,徐攀,等.红参多糖抗氧化活性的研究[J].浙江中医药大学学报,2011,35(6):909-912.

[5]雷震,杨光义,叶方.黄精多糖药理作用及临床应用研究概述[J].中国药师,2012,15(1):114-116.

[6]陈晓萍,张长林.白术不同化学成分的药理作用研究概况[J].中医药信息,2011,28(2):124-126.

[7]陈屏,徐东铭,雷军.麦冬化学成分及药理作用的研究现状[J].长春中医学院学报,2004,20(1):35-36.

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部[M].北京:化学工业出版社,2010.