RP-HPLC法测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量

冷英梅董向光

RP-HPLC法测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量

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目的建立采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量。方法采用Hypersil ODS2 C18色谱柱，以甲醇-水（45:55）为流动相，检测波长为274nm。结果丹皮酚在0.046～9.200μg/L范围内呈现良好的线性关系（r为0.9996），平均回收率为99.3%，RSD为2.16%。结论本法简便、快捷、重复性好，可用于不同产地牡丹皮药材中丹皮酚的含量测定。

高效液相色谱法；牡丹皮；丹皮酚

牡丹皮在我国已有近2000年的药用历史，占有十分重要的地位。随着对牡丹皮需求的不断扩大，各地人工种植的规模亦逐渐增大，牡丹皮中主要活性丹皮酚，不同产地牡丹皮中含量有比较大的差异，影响药材质量[1]。为提高临床治疗的效果，本文采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量进行测定，为合理选用药材及原药材质量控制提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110708-200507）；不同产地牡丹皮原药材均购自河北安国药材市场，经鉴定为牡丹皮，乙腈（山东禹王试液有限公司禹成化工厂，色谱纯）、甲醇（上海振兴化工一厂，色谱纯），其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；Agilent 1100高效液相色谱仪（Agilent 1100色谱泵，Agilent 1100自动进样器紫外检测器，Agilent 1100色谱工作站）；AL104/01电子天平（梅特勒－托利多仪器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS2 C18色谱柱；丹皮酚的色谱条件以甲醇-水（45:55）为流动相，流速1ml/min；检测波长为274nm。

1.3.2 丹皮酚对照品溶液的制备 精密称定丹皮酚对照品适量，置于10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，即得丹皮酚对照品，浓度为9.2μg/L，备用。

1.3.3 供试品溶液的制备 取牡丹皮粉末（过45目筛）0.5g，精密称定，置于100ml具塞的锥形瓶中，加入75%甲醇30ml超声（500W，40Hz）提取45min，放冷，补足减失的重量，静置10min后滤过。精密量取续滤液1ml，置于10ml的量瓶中，用甲醇适量定容，即得。

1.4 方法学考察

1.4.1 线性关系的考察 精密吸取丹皮酚对照品溶液0.05、0.5、1、2、5ml置于10ml量瓶中，定容，吸取对照品溶液20μl，测定，以浓度（X）与峰面积（Y）作图得标准曲线，经回归得 Y1=1.9325X＋7.1648，r=0.9996。结果表明，丹皮酚在 0.046～9.200μg/L范围内呈现良好的线性关系。

1.4.2 精密度实验 取供试品溶液，在色谱条件下，连续进样5次，每次进样20μl，测定丹皮酚的峰面积，RSD值为1.46%。表明精密度良好。

1.4.3 稳定性实验 取供试品溶液，在色谱条件下，每隔2h精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，连续进样7次，测定峰面积，RSD值为0.96%。表明供试品溶液中丹皮酚在12h内基本稳定。

1.4.4 重复性实验 取同一批样品，按照“2.3”项下方法平行制备5份供试品溶液，精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，按照丹皮酚的色谱条件测定丹皮酚的峰面积，计算含量。RSD值为1.25%。表明此方法测定丹皮酚的含量，重现性良好。

1.4.5 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批牡丹皮药材粉末（过45目筛）样品6份，每份0.2g，按比例加入丹皮酚对照品，按照“2.3”项下方法制备溶液，分别精密吸取20μl注入高效液相色谱仪，按照色谱条件测定丹皮酚的峰面积，计算回收率。丹皮酚回收率为99.3%，RSD值为2.16%，回收率符合相关规定。

1.4.6 样品含量测定 按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照色谱条件测定8个不同产地牡丹皮样品中丹皮酚的峰面积，按照回归方程，计算各样品中丹皮酚的含量。

2 结果

不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量，见表1。

表1 不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量(%)

3 讨论

牡丹皮是一种较为常用的大宗药材，《中国药典》2010年版规定[2]，牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮，具有清热凉血、散瘀活血等功效，临床主要用于热入营血、温毒发斑、无汗骨蒸、经闭痛经等。在临床中应用非常广泛。牡丹皮中主要活性成分为丹皮酚，研究表明，丹皮酚具有抗菌消炎、抗心律失常、保肝护肝、增强免疫等作用[3]。本研究采用 RP-HPLC测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量，可客观评定不同产地药材的质量，有利于选用合适的药材。

本文研究结果表明，不同产地牡丹皮药材中丹皮酚的含量差别非常大，药材质量参差不齐。出现差异的原因可能是由生长环境、生产管理等多因素造成。为保证牡丹皮药材的质量，须从源头抓起在，生产基地实施GAP种植。

[1] 李向阳,屠万倩,张留记.RP-HPLC法测定不同产地的牡丹皮中芍药苷和丹皮酚的含量[J].中药新药与临床药理,2011,22(5):563-565.

[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社, 2010:160-161.

[3] 李方军.牡丹皮化学成分及药理作用研究进展[J].安徽医药, 2004,8(1):9-10.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0211-02

1 山东省海阳市食品药品稽查大队，山东烟台 265100

2 山东省海阳经济开发区管理委员会，山东烟台 265100