三种血清学方法检测牦牛布鲁氏菌病的比较

李金平，郭会玲，薛晓波，薛 晶，吐尔洪·努尔，马俊杰，易新萍*

（1.新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆 乌鲁木齐 830063；2.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐 830000；3.新疆畜牧科学院科技信息研究所，新疆 乌鲁木齐 830000）

三种血清学方法检测牦牛布鲁氏菌病的比较

李金平1，郭会玲2，薛晓波3，薛 晶2，吐尔洪·努尔2，马俊杰2，易新萍2*

（1.新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆 乌鲁木齐 830063；2.新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐 830000；3.新疆畜牧科学院科技信息研究所，新疆 乌鲁木齐 830000）

采集牦牛血清237份,用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)进行布鲁氏菌病抗体检测。结果表明，RBPT和SAT与iELISA检测法阳性符合率分别为64.3%和57.1%，但iELISA与SAT和RBPT检测法总符合率达95%以上。本结果表明iELISA试剂盒检测法快速、简便，敏感性和特异性高于RBPT和SAT法。

布鲁氏菌病；牦牛；iELISA；SAT；RBPT

布鲁氏菌病（简称布病）是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病，本病严重危害养殖业，并影响人类健康，具有重要的公共卫生安全意义。我国农业部将其列为二类动物传染病，是动物引进和种畜检疫中必检的传染病。对于布鲁氏菌病的诊断，相对病原学方法而言，血清学方法因其具有快速、简便、费用低等优点，目前仍然是动物布鲁氏菌病检疫最常用的诊断方法。我国用于布病血清学诊断的国家标准方法主要有：虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)和补体结合试验(CFT)等传统布鲁氏菌抗体检测技术。前两种方法都会出现一定的假阳性及假阴性，特别是SAT，因其检测结果不令人满意，OIE于2000年宣布不主张将其用于国际贸易[1]。由于补体结合试验(CFT)操作步骤繁琐、耗时长、重复性差等缺点，该方法已很少应用于日常检疫中。酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光偏振分析法(FPA)因具有操作简单、结果确实等优点，被国际兽医局（OIE）推荐用于动物进出境布病的检测；在一些发达国家，这些方法已广泛应用于牛布鲁氏菌病的检测中[2,3]。

但在夏秋季可能与其它各种家畜在同一草场交错放牧，为感染布病提供了条件[4]。本实验应用RBPT、SAT、iELISA三种血清学诊断方法对新疆牦牛进行布病的检测，并对检测结果进行了比对分析，旨在为牦牛布病的血清学检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 试剂

虎红平板凝集抗原、试管凝集抗原购自中国CDC疾病控制中心传染病所。布鲁氏菌病间接酶联免疫吸附实验（IELISA）抗体检测试剂盒由哈尔滨平河生物技术有限公司生产。

1.2 待检血清

从新疆温宿县采集牦牛血样237份，均未进行过布病疫苗接种。分离血清置于4℃备用。

1.3 方法

RBPT和SAT按GB／T 18646-2002方法操作。

布病iELISA快速诊断试剂盒操作方法按试剂盒说明书进行实验。

2 结 果

2.1 牦牛布病的血清学检测

用3种方法对237份牦牛血清样品进行了检测。 RBPT法检出阳性11份，疑似阳性5份，阴性221份，阳性率为5.48%；采用SAT法检出阳性10份，疑似阳性3份，阴性224份，阳性率为4.22%；采用iELISA检出阳性14份，阴性223份，阳性率为5.91%（表1）。

表1 三种血清学方法对牦牛布病的检测结果

2.2 iELISA与SAT、RBPT检查结果的相关性

将14份iELISA阳性样品再用SAT方法检测，结果为8份阳性，2份疑似，4份阴性；223份iELISA阴性样品经SAT方法检测，结果为2份阳性，1份疑似，220份阴性。14份iELISA阳性样品经RBPT检测结果为9份阳性，5份阴性；223份iELISA阴性样品经RBPT检测结果为4份阳性，1份疑似，218份阴性。该检测结果表明，SAT与iELISA方法阳性符合率为57.1%，阴性符合率为98.6%，总符合率96.2%；RBPT与iELISA方法阳性符合率为64.3%，阴性符合率为97.3%，总符合率95.4%。以上数据中阳性率的计算均未计入疑似样品数据。

2.3 iELISA与SAT、RBPT检测牦牛布病的敏感性和特异性

根据以上检测数据，按照敏感性=真阳性数／(真阳性数+假阴性数)，特异性=真阴性数／（真阴性数+假阳性数）公式计算，SAT方法检测牦牛布病敏感性为80.0%，特异性为98.2%。RBPT方法检测牦牛布病敏感性为69.2%，特异性为97.7%。

3 讨 论

布鲁氏杆菌病的血清学检测方法很多且各具特色，但都存在一定局限性。在我国现行的《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB／T18646—2002)规定的血清学诊断技术中，大规模检疫可用琥红平板凝集试验RBPT作筛选，SAT和CFT作综合诊断。

RBT与iELISA检测方法均为OIE指定的国际贸易中牛布鲁氏菌病的检测试验，适合于牛布鲁氏菌病的初筛[4]。本试验结果显示，RBPT、SAT与iELISA这3种检测方法用于牦牛布鲁氏血清抗体检测时，RBPT特异性较高（97.7%），但敏感性最低（69.2%）。SAT检测方法敏感性与特异性都高于RBPT，但与iELISA方法检测的阳性符合率较低（57.1%）。国内外应用ELISA检测牛布病的结果表明，ELISA和CFT的符合率较高，且阳性检出率高于CFT和SAT[5,6]，而且iELISA方法相较前两种方法操作更加精准，对结果的判定简捷明了，从而避免了人为的误判。从本试验结果可以看出，iELISA方法的阳性检出率最高。牛布鲁氏菌抗体ELISA方法可克服SAT试验中操作用时较长，需要准备大量的玻璃仪器，操作工作较繁重等缺点和不便，检测结果的敏感性和特异性均高于SAT方法且与RBPT方法相一致[7]。

根据上述检测结果，建议在对牦牛群进行布鲁氏菌病血清学检疫时，采用RBPT、SAT和ELISA相结合的监测方法，以便对检疫阳性牛早隔离、早处理，彻底净化牛群，有效的防止布病的传播。

[1]范伟兴，钟 旗，何倩倪，等．几种布鲁氏菌病血清学诊断方法的比较研究[J]．中国动物检疫，2006，23(6)：31-33.

[2]Jimenez M P，Marin C，BlascoJ M．Effect of antibiotic therapy and strain 19 vaccination on the spread of Brucella melitensis within an infected dairy herd[J]．Prev Med，1991，（11）：17-24．

[3]OIE．Bovine brucellosis[0L]／OIE Terrestrial Manua1 2008：624-659．

[4]蒲敬伟，袁立岗，缪文革，等.野牦牛布鲁氏茵病感染情况调查[J]．中国兽医杂志，2007，43（8）：53-54.

[5]Mcgiven J A，Tuker J D，Perrett L L，eta1．Validation of FPA and cELISA for the detection of antibodies to Brucella abortus in cattle sera and comparison to SAT，CFT，and iELISA[J]．J Immunol Methods，2003，278(1-2)：171-178．

[6]刘淑平，郭支喜，王曾良，等．酶联免疫吸附双抗原夹心法检测人畜布氏菌抗体的研究[J]．中国地方病防治杂志，2002，17(4)：214-216.

[7]刁彩霞,孙福先,桑学波.奶牛布鲁氏菌病检测的血清学方法比较[J]．中国畜牧兽医文摘，2013，29 （4）：39,54.

Comparison of Yak Brucellosis Detection by SAT、RBPT and iELISA

LI Jin-ping1，GUO Hui-ling2，XUE Xiao-bo3，XUE Jing2，TUERHONG·Nuer2，YI Xin-ping2*
1.Animal Health Epidemic Prevention and Monitoring Station，Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830063，China；2.Veterinary Research Institute，Xinjiang Academy of Animal Sciences，Urumqi 830000，China; 3.Institute of Science and Technology Information,Xinjiang Academy of Animal Sciences，Urumqi 830000，China）

237 serum samples from yak were detected by Bengal test(RBPT)、tube agglutination test(SAT), indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA).Comparison with iELISA of diagnostic method for Brucellosis,the positive rate of RBPT and SAT were 64.3%and 57.1%,respectively.However,the total coincidence rate for Brucellosis were up to 95.0%with iELISA、RBPT and SAT.The results showed that iELISA kit of bovine Brucellosis had the advantages of simple、quick、high sensitivity and specificity,etc.The data suggested that it was an effective way for the serological test of brucellosis for yak by combination of SAT,RBPT and iELISA.

brucellosis；yak；iELISA；SAT;RBPT

S852．5+3

：A

：1003－6377（2014）03－0052-03

2014-03-27

自治区高技术研究发展项目（201311102）

李金平（1962-），高级兽医师，从事动物布病监测工作。

易新萍（1970-），女，副研究员，从事动物布病诊断技术与防治研究。