反高效液色谱法测定通络逐瘀丸中芍药苷的含量

刘家海

（宁陵县食品药品检验所，河南 商丘 476000）

反高效液色谱法测定通络逐瘀丸中芍药苷的含量

刘家海

（宁陵县食品药品检验所，河南 商丘 476000）

目的建立通络逐瘀丸的质量控制标准。方法采用反高效液相色谱法对通络逐瘀丸中芍药苷的含量进行测定。结果通络逐瘀丸中芍药苷的含量在0.3082～6.164 μg的范围内，线性关系良好，r=0.9999，芍药苷的回收率为99.82%，RSD为0.79%。结论该方法操作易行，稳定可靠，重复性好，可以用于通络逐瘀丸的质量控制。

通络逐瘀丸；芍药苷；反高效液相色谱法

通络逐瘀丸是经批准生产的医院中药制剂[1]，处方由赤芍、赤芍、柴胡、、枳壳、桔梗、桃仁、红花、盐补骨脂、等十四味药组成，具有活血化瘀，清障除滞，补肾通胞的功效。主要用于因盆腔炎症引起的输卵管阻塞性不孕症，月经不调，色暗有块等症状，具有很好的疗效。虽然疗效很显著，但是原来的质量控制标准中只有薄层色谱鉴别的鉴别和一般的检查项目，是不能很好地控制通络逐瘀丸的质量。为了进一步提高标准，保证制剂的稳定可靠，笔者采用高效液相色谱法对制剂中主要药味之一赤芍中的芍药苷的含量进行了测定。

1 仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪；反相色谱柱：Agilent-C18（5 μm，4.6 mm×150 mm），MSA225S-000-DU电子分析天平，对照品芍药苷（批号：110736-201035，来源：中国药品生物制品检定所），通络逐瘀丸为商丘市医院提供（批号为：140201，140223，140301），缺位阴性自行配制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86），检测波长为230 nm，柱温：25 ℃，流速为1.0 mL/min，进样量10 μL。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取，对照品芍药苷15.41 mg，置50 mL量瓶中，加稀乙醇使溶解，稀释至刻度，摇匀，过滤备用。

2.3 供试品溶液的制备[3]：取一定量的供试品，混匀，研细，取1 g，精密称定，置50 mL锥形瓶中，加稀乙醇50 mL，超声提取30 min，取续滤液25 mL，至量瓶中，并加稀乙醇至刻度，摇匀，过滤备用。

2.4 阴性对照品溶液的制备：除赤芍外，其他各药按通络逐瘀丸的处方比例量投料，按照通络逐瘀丸的制备工艺制备成阴性对照，同供试品的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.5 系统适应性试验

2.5.1 线性关系、范围：取对照品（30.82 μg/mL）的浓度，分别取1.0、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0 μL进样，记录芍药苷峰面积积分值，以芍药苷峰面积的积分值对芍药苷的进样量进行线性回归，y=94.803x+2.865，r=0.9999。结果表明芍药苷的线性关系良好，芍药苷的线性范围为：0.3082～6.164 μg。

图1 对照品（A）；样品（B）；阴性对照（C）

2.5.2 精密度试验：取上述配制的对照品溶液，重复平行，进样6次，测定芍药苷的峰面积积分值峰面积。结果，芍药苷的峰面积积分值的RSD=0.47%，表明精密度良好。

2.5.3 重复性试验：取已知含量的同一批样品，称取6份，同供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，测定芍药苷的峰面积积分值。结果，平均含量为 0.2107毫克/粒，RSD=0.85%，表明重复性良好。

2.5.4 稳定性试验：取同一份样品制备成供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12 h进样，测定，芍药苷的峰面积积分值RSD=0.79% ，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.5.5 加样回收率试验：取样品9份，约0.25 g，称量好的样品中分别精密加入3个浓度梯度的芍药苷对照品溶液，照供试品溶液的制备方法制备成样品溶液，测定芍药苷峰面积的积分值，计算芍药苷的含量，计算该制剂中的芍药苷的回收率。结果见表1。

表1 通络逐瘀丸中芍药苷的回收率实验结果

3 样品含量测定

按通络逐瘀丸样品处理方法，并按照上述芍药苷含量测定的色谱条件，测定3批通络逐瘀丸样品中芍药苷含量，3批通络逐瘀丸批号分别为140201，140223，140301，测定的芍药苷的含量分别为3.0027、3.0114、3.0471 mg/g，3批通络逐瘀丸样品中芍药苷含量的相对标准偏差（RSD）为0.78%，说明该方法测定通络逐瘀丸中芍药苷的含量重复性较好。

4 结 论

在通络逐瘀丸供试品制备的过程中，处方中其他的药材的存在对赤芍中芍药苷的提取是有影响的[3]，我们考察了用不同提取方法[4-6]，设计了超声与回流时间梯度，结果显示回流提取出的杂质较多，超声效果较好，所以对通络逐瘀丸的供试品的处理方法为稀乙醇超声处理30 min，和中国药典白芍项下芍药苷的含量测定的条件一致。

通络逐瘀丸是医院制剂，活血化瘀，清障除滞，补肾通胞的功效非常显著，主要用于因盆腔炎症引起的输卵管阻塞性不孕症，月经不调，色暗有块等症状的治疗，有非常好的疗效，但是由于原来没有具体的质量控制标准，我们采用反高效液相色谱法测定了该制剂中的芍药苷含量，因为赤芍是通络逐瘀丸的主药之一，且该方法稳定可靠，操作简便，专属性较强，可以作为通络逐瘀丸制剂的质量控制标准的参考。

[1] 河南省医疗机构制剂标准[S].豫药制字:Z04140011.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2010:96.

[3] 凌明,马安宇. HPLC测定胃肠合剂中芍药苷和黄芩苷的含量[J].中成药,2008,30(9):1111-1113.

[4] 陈晓燕,李顺祥.HPLC法测定阿归养血糖浆中芍药苷含量[J].中医药导报,2009,15(3):81-83.

[5] 马连英,于秀华,李长惠.高效液相色谱法测定血府逐瘀口服液中阿魏酸含量[J].药物鉴定,2006,15(16):28.

[6] 张建业,冯向东.HPLC法同时测定八珍益母丸中芍药苷和甘草酸铵的含量[J].中国药师2011,14(7):992.

R927.2

B

1671-8194（2014）34-0062-02