均匀设计法优选温度刺激响应型雌三醇缓释凝胶的处方

贾守雄 王法琴 高峻 余强

温度刺激响应型雌三醇阴道缓释凝胶是以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188为主要材料,将雌三醇均匀分散于以上基质中制成的水凝胶,此水凝胶在阴道腔道温度下由流动的液体转变为固态凝胶黏附于阴道黏膜。温度刺激响应型凝胶具有室温或室温温度以下是液态, 体温时转变为凝胶的特点。随着凝胶被侵蚀, 药物逐步释放, 而达到缓释目的。本实验采用均匀设计法对温度刺激响应型雌三醇阴道缓释凝胶的处方进行优化, 从而得到泊洛沙姆407与泊洛沙姆188的适宜配比。

1 仪器与试药

电子分析天平(德国塞多利斯仪器系统有限公司)；78-1磁力加热搅拌器(江苏金坛市正基仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(江苏金坛市大地自动化仪器厂)；温度计；pHS-25(上海日岛科学仪器有限公司)。雌三醇(江苏苏州市苏瑞医药化工有限公司,批号：20100311,含量：99.8%)；泊洛沙姆407；泊洛沙姆188；水为纯化水(兰大二院自制)。

2 试验方法和结果

2.1 雌三醇缓释凝胶的制备方法 采用冷法制备凝胶, 称取处方量的P407和P188, 在不断搅拌下将P407和P188逐渐溶解于纯化水中, 于4℃冰箱冷藏24 h以上, 直至形成澄清溶液。

2.2 相变温度的测定 胶凝温度(Tsol-gel), 又称为相转变温度, 是温度敏感型凝胶最重要的评价指标之一。本实验采用磁力搅拌法测定相变温度, 磁力搅拌法是把含磁力搅拌子和温度计的待测泊洛沙姆样品放入水浴中, 搅拌下逐步加热,由于胶凝作用而使搅拌子停止转动时的温度即为相转变温度。

2.3 均匀设计法优选处方

2.3.1 以均匀设计法进行实验 泊洛沙姆407形成凝胶的浓度较低, 25℃时为20%, 而泊洛沙姆188的加入能够提高体系的相变温度, 故采用以泊洛沙姆407浓度X1(w/v)和泊洛沙姆188浓度X2(w/v)为考察因素, 以两因素五水平进行正交设计, 采用U5(52)表安排实验, 进行多次预实验后选取P407与P188各5个水平, 以相变温度(34±0.5)℃范围为指标, 实验安排见表1。按2.1项下方法制备不同处方试验样品, 按2.2项下方法测定每个处方的相变温度, 结果见表2。

表1 实验安排

表2 均匀试验结果表

由表2中结果可看出, 当泊洛沙姆407浓度为20%、泊洛沙姆188浓度为18%所得的凝胶相变温度较好, 在(34±0.5)℃内。 根据上表数据, 用SPSS软件进行回归分析,得回归方程y=61.56-1.370x1, R2=0.994, S=0.39328,F=485.4,P<0.01, 该回归方程具有统计学意义。其中y为相变温度, X1为P407浓度。此回归方程剔除了X2(P188)影响, 可预测, 泊洛沙姆407在14%～22%浓度范围内是影响相变温度的主要原因, 泊洛沙姆188起调节作用。 根据以上回归方程, 当泊洛沙姆407浓度为20%时, 预测的相变温度为34.16℃, 与均匀试验结果中四试验组(P407/P188)结果相当。

2.3.2 回归方程预测结果的验证 固定泊洛沙姆407浓度(w/v)为20%, 选择泊洛沙姆188浓度(w/v)分别为12%、14%、16%、18%、20%五个水平进行实验。结果当P188浓度为18%时, 相变温度在指标(34±0.5)℃范围内, 而且与均匀设计结果中四试验组结果相近 , 故选择P407为20%、P188为18%为最佳处方。

2.3.3 加入雌三醇后的相变温度 泊洛沙姆407和188均为高分子材料, 认为雌三醇的加入对相变温度影响不大。以泊洛沙姆407浓度为20%、泊洛沙姆188浓度为18%制备凝胶, 向凝胶中按每3 ml加入2 mg的雌三醇的量分别制备三批雌三醇凝胶, 分别测得相变温度为33.8℃、33.8℃、33.6℃, 均在指标(34±0.5)℃范围内。

3 讨论

泊洛沙姆407(Poloxamer407, P407)是由聚氧乙烯与聚丙乙烯以7：3的比例形成的共聚物。P407的凝胶化温度及凝胶强度强烈依赖于P407的浓度, 在其中添加了同系物泊洛沙姆188,以改善制剂的生物黏附性和胶凝强度,延长药物在用药部位的滞留时间［1］。使用不同比例的泊洛沙姆407与泊洛沙姆188, 可以制得胶凝温度符合需要的缓释凝胶［2］。雌三醇能选择作用于子宫颈及阴道上皮, 能有效的治疗和预防老年性阴道炎。而一般通过口服药物进行治疗, 给药剂量大,局部给药血药浓度低,给药次数频繁,副作用大,患者依从性差［3］。以栓剂形式给药, 在阴道中融化或软化, 由于吸水作用引起不适。将雌三醇制备为温度刺激响应型凝胶以液体状态给药, 由于流动性良好, 进入体内后能最大面积与黏膜充分接触, 形成凝胶后缓慢释药, 可提高药物的生物利用度［4］。

综上所述, 与其他实验设计方法相比, 均匀设计法在P407和P188浓度筛选过程中实验次更少, 所筛选出的处方制得的凝胶常温下有良好的流动性, 在体温温度下能迅速胶凝, 可进一步进行制剂研究。

［1］ 王玮,叶放,周建平.泊洛沙姆407原位凝胶作为药物载体的研究进展.中国新药杂志, 2009,18(8):699-703.

［2］ 程海兴,王君平,孙海燕.等.泊洛沙姆407的基础和药剂学新进展.中国药业, 2006,15(9):64.

［3］ 贾守雄,李平,魏琴,等.复方雌三醇阴道生物黏附膜的制备及质量控制.中国药房, 2008,19(7):526-527.

［4］ 金璐燕,李娟.泊洛沙姆407在制剂中的应用进展.药学与临床研究, 2009,17(3):231-234.