鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗的效果评价研究

2014-05-30李宝臣叶曼曼李肖梁方维焕

浙江畜牧兽医 2014年6期

孟超，李宝臣，叶曼曼，周飞，李肖梁，方维焕

(1.浙江大学动物预防医学研究所，浙江杭州310058;2.浙江诺倍威生物技术有限公司;3.宁波大学)

鸭传染性浆膜炎，又称鸭疫里默氏杆菌病，是由鸭疫里默氏杆菌(RA)引起，危害养鸭业的主要疫病之一。1932年，美国学者Hendrickson 和Hilbert首次报道该病［1］，1936年，美国伊利诺斯州的一个商品鸭场发生该病，曾被称为“鸭败血症”，Dougherty(1955)［2］等，经全面病理学研究后，将该病命名为“传染性浆膜炎”。Leibovitz(1972)［3］提议使用“鸭疫里默氏杆菌感染”名称。

我国自1982年郭玉璞(1982)［4］等从北京郊区鸭场首次分离到鸭疫里默氏杆菌以来，所有养鸭地区几乎均有该病的发生，鸭、鹅及火鸡等多种禽类易感，是一种接触性传染病，多呈急性或慢性败血症过程，以纤维素性肝周炎、心包炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎为主要特征，传播速度快，死亡率较高，对抗生素的耐药性不断增加，疫苗免疫是控制该病的有效方法之一。

1 材料与方法

1.1 试验材料鸭疫里氏杆菌血清1 型SG4 株和血清2 型ZZY7 株由中国农业大学提供;鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗(1 型SG4 株+2 型ZZY7 株)由浙江某生物技术有限公司生产提供，批次分别为201305、201306 和201307。

试验动物为3日龄雏鸭，由绍兴某种鸭场提供，品种为绍兴麻鸭。

试验在杭州某生物技术有限公司进行。

1.2 安全性检验选取3日龄玻板凝集试验为RA血清抗体阴性的雏鸭，免疫剂量为每羽0.25 mL 和0.5 mL，每一剂量组各免疫雏鸭30 羽，免疫途径为颈部皮下注射。30 羽作为空白对照，相同条件下饲养观察35 d。

每日观察供试鸭精神、采食、粪便及临床变化;每周分别扑杀5 羽，观察接种部位的吸收情况及其他异常状况。

1.3 攻毒效果试验主要通过免疫攻毒方法进行，每批次疫苗选取3日龄玻板凝集试验为RA 血清抗体阴性的雏鸭50 羽，随机分为5 组，每组10 羽。其中两组为免疫组，免疫剂量为0.25 mL/羽;另两组为未免疫攻毒对照组，第五组为不免疫和攻毒对照组。

免疫途径为颈部皮下注射，动物隔离器内饲养观察21 d。免疫组与未免疫攻毒组分别使用血清1型SG4 株和血清2 型ZZY7 株强毒进行攻毒，腿部肌内注射1.0 ×1010CFU 的鸭疫里氏杆菌SG4 或1.0 ×105CFU 鸭疫里氏杆菌ZZY7 株菌液。攻毒后7 d 内观察发病和死亡情况。

1.4 微量凝集抗体检测试验将免疫后21 d 的供试鸭通过翅静脉采血至1.5 mL 离心管内，37℃温箱中静置1 h，然后8000 rpm 离心5 min，吸出析出血清，备用。将培养的鸭疫里默氏杆菌SG4 株和ZZY7 株菌液计数，然后用0.3%甲醛溶液灭活，再将灭活后的菌液5000 rpm 离心30 min。用生理盐水离心洗涤3 次，最后一次菌悬液用生理盐水调节至1.0 ×109CFU/mL，作为微量凝集抗体检测试验用抗原。

试验步骤:将96 孔凝集板中加入50 μL 生理盐水，再将第一孔加入50 μL 待检血清，然后进行倍比稀释，直至212 次方。

每个血清样品两次稀释，分别加入SG4 株和ZZY7 株抗原50 μL，混匀后密封，室温条件静置24 h 后观察沉淀状况。

1.5 无菌检验根据2010年版《中华人民共和国兽药典》第三部所提供的方法进行检验。

将样品量1 mL 接种含有50 mL 硫乙醇酸盐培养基中，37℃培养72 h。然后将培养物移植至TG小管和GA 斜面(0.2 mL/支)，1 支在37℃培养，1支在25℃培养，另取1 支GP 0.2 mL/支，在25℃培养，观察7 d，应无菌生长。

1.6 剂型和黏度剂型检查主要确定剂型是油包水(O/W)或水包油(W/O)。方法是将疫苗乳剂先滴1 滴在水中，然后滴第2 滴，如果未出现扩散，其剂型则为油包水剂型，若第2 滴出现扩散则其剂型为水包油。

黏度检测主要通过黏度计测定，其原理是将转子浸入供试样品溶液中，使转子以一定的角速度旋转，通过测量作用在转子上的扭力矩，然后换算成黏度值。