安徽进口鸡群禽白血病感染状况的调查

程宝艳 刘长坤 黄金华 邵建明 胡晓苗 赵瑞宏 张丹俊*

（1.安徽出入境检验检疫局 安徽合肥 230022；2.安徽省农科院）

1 前言

禽白血病(Avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis visus，ALV)／肉瘤病毒群病毒（Rous sarcoma virus，RSV）引起的禽类多种良性和恶性肿瘤性疾病，临床上多以免疫抑制、生长抑制和多器官组织出现肿瘤等为主要特征[1]。近年来国内有关引进品系（蛋鸡和肉鸡）及地方品种鸡鸡白血病的病例报告或研究报告的病例增多[2-6]，安徽省一些肉鸡病例和蛋鸡发病的病例以及一些蛋肉兼用型地方品种中鸡白血病的病例报告

也逐渐增多[7-10]。为调查进口祖代蛋鸡和肉鸡的鸡白血病感染情况，本研究调查了安徽3家进口祖代蛋鸡和肉鸡种鸡场鸡白血病的感染情况。

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验材料

（1）蛋鸡为海兰鸡。安徽某鸡场从美国引进一批1日龄蛋用型海兰祖代鸡，在出机场放行后随机选择2个配套系（编号分别为C、D）各11只、22只，采集胎粪和抗凝血。到200日龄时采集抗凝血各20、40份，泄殖腔棉拭子各20、40份。海兰父母代鸡180日龄时采集抗凝血30只，泄殖腔棉拭子30份。

（2）肉鸡。哈伯德祖代鸡，147日龄，采集抗凝血母鸡30份、公鸡10份，泄殖腔棉拭子30、10份；AA祖代鸡：54周、68周，血清各30份、蛋清各30份。

2.1.2 试剂

ALV-AB ELISA检测试剂盒：美国IDEXX公司，批号：99-09257；ALV-J抗体ELISA检测试剂盒：美国IDEXX公司，批号：99-09268。白血病病毒群特异性抗原p27：美国IDEXX公司，批号：99-09254。

2.2 方法

2.2.1 泄殖腔棉拭子样品的p27抗原检测

胎粪和棉拭子样品加1mL样品稀释液，冻融后，取100μL上清用ALV-p27抗原酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒检测禽白血病病毒群特异性抗原p27，具体检测方法参见试剂盒说明书。

2.2.2 AL特异性抗体的检测

一日龄雏鸡颈静脉采集抗凝血，3000r/min离心5min；成年鸡群用医用采血管翅静脉采集抗凝血，放冰箱过夜，自然分离血清，用ALV-AB ELISA检测试剂盒、ALV-J抗体ELISA检测试剂盒检测ALV-A/B亚型及J亚型2种抗体。具体检测方法参见试剂盒说明书。

2.2.3 种蛋p27抗原的检测

海兰祖代鸡200日龄时C系和D系各收集种蛋30枚，父母代鸡群30枚种蛋；哈伯德和AA鸡祖代种蛋也各取30枚。每枚种蛋取1mL蛋清冻融后，用禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒检测ALV群特异性抗原p27。具体检测方法参见试剂盒说明书。

3 结果

3.1 泄殖腔棉拭子和蛋清p27抗原检测结果

海兰祖代鸡群2次泄殖腔棉拭子p27抗原检测结果显示，产蛋高峰（200日龄）比刚引进时（1日龄）阳性率高。经T检验，2个配套系之间p27抗原的检出率差异显著；海兰父母代鸡群（180日龄）泄殖腔棉拭子与祖代鸡群检出率差异不显著。海兰祖代鸡群与父母代鸡群蛋清全部判定为阴性，检出率为0%。在进口祖代肉鸡方面，p27抗原检出率明显低于祖代海兰蛋鸡，哈伯德检出率为5%（147日龄），AA鸡样品6.7%（378日龄）和3.3%（476日龄），而蛋清也全部判定为阴性，检出率为0%。见表1。

表1 鸡群ALV泄殖腔棉拭子和蛋清p27抗原检测结果

3.2 抗体阳性率检测结果

在采集肛拭子同时鸡翅静脉采血，检测ALVAB和ALV-J血清抗体。经T检验，海兰祖代鸡群ALV-AB两次(1日龄和200日龄)抗体阳性率差异不显著，ALV-J两次抗体阳性率均为0%。海兰父母代鸡群ALV-AB抗体阳性率与祖代鸡群差异显著，ALV-J抗体阳性率也为0%。在进口祖代肉鸡方面，ALV-AB抗体阳性率比祖代海兰蛋鸡普遍高，哈伯德为32.5%（147日龄），而AA鸡更高达63.3%（378日龄）和80%（476日龄）；ALV-J抗体阳性率方面，哈伯德为0%，只有AA鸡有检出率，两个日龄均为20%。见表2。

表2 不同品种鸡群ALV-AB、ALV-J抗体阳性率检测结果

4 讨论

（1）进口祖代蛋鸡方面，海兰祖代鸡2个配套系1日龄胎粪和200日龄棉拭子均有不同程度的阳性率，其中200日龄阳性率显著高于1日龄；血清检测方面，2个配套系ALV-AB有阳性，而ALV-J全部为阴性。说明进口海兰祖代鸡ALV-J净化效果良好，ALV-AB有20%的感染率。海兰父母代鸡群泄殖腔棉拭子p27抗原也有检出率，血清抗体ALV-AB的检出率比祖代高，而且种蛋蛋清的检出率（10%）也比祖代鸡群高（0%），说明进口鸡群随着在国内饲养时间的增长，ALV的感染有增高趋势。

（2）进口祖代肉鸡方面，哈伯德和AA鸡棉拭子ALV群特异性p27抗原均有检出率，哈伯德鸡群ALV-J全部为阴性，ALV-AB抗体有较高的阳性率。同样说明进口哈伯德祖代鸡ALV-J净化效果良好，ALV-AB还有32.5%的感染率；AA鸡ALV-AB阳性率最高，ALV-J也有较高的阳性率。种蛋方面，两种进口祖代肉鸡蛋清的检出率均为零。此次调查进口祖代肉鸡的日龄偏高，没有检测到1日龄的感染状况，是不是在国内感染或在国内饲养时感染率增高，有待进步一调研。

（3）ELISA方法适用于ALV大规模流行病学调查和生产净化的检测。尽管针对ALV保守p27抗原的ELISA方法无法区分内外源ALV，但ALV是易发生突变的反转录病毒，其中ALV-J又是ALV中最易发生变异的一个亚群，特别是其gp85的高变区引起ALV-J持续不断的抗原性变化[11]。人们推测ALV-J的出现及其不断变异是一些外源性ALV病毒和内源性ALV成分重组的结果[12]。为了防止病毒的不断变异，各国研究人员试图建立更多无内源性ALV病毒污染的新品种改良鸡系，进而阻止新亚群病毒的出现[13]。作为进口祖代鸡，无内源性ALV尤其重要，使用ELISA 法调查可以反映其感染情况。

5 结论

此次以禽白血病为目标，以血清学调查和病原学检测为主旨，最终了解安徽辖区引进国外种鸡的禽白血病感染状况。调查结果可为制定相关双边动物贸易条款提供参考依据，更大程度地拒疫病于国门之外，保护我国畜牧业健康发展。

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