EB病毒血清学联合DNA定量检测在诊断婴儿传染性单核细胞增多症中的意义
2014-05-19朱芹郭平黄雅娟等
朱芹 郭平 黄雅娟等
[摘要] 目的 评估EB病毒抗体VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG及EBV-DNA载量检测在婴儿传染性单核细胞增多症(IM)中的诊断意义。 方法 用ELISA法检测78例IM患儿血清中EBV四种抗体及PCR荧光定量法检测外周血单个核细胞EBV-DNA载量。 结果 在IM急性期VCA-IgM阳性率在<1岁患儿中为27.8%,而≥4岁组患儿中为83.3%。有近20% <1岁患儿所有EBV抗体均阴性,需重复做抗体测定。EBV-DNA载量检测总阳性率为70.5%,<1岁患儿中阳性率为61.1%,<1岁组患儿中有5例,在1岁组患儿中3例早期检测VCA-IgM抗体是阴性,而EBV-DNA载体是阳性的,但在后来的VCA-IgG检测均是阳性的。结论 在婴儿期IM急性阶段,只用血清学方法来诊断不够灵敏,建议在VCA-IgM阴性的患儿中联合EBV-DNA载量检测,以提高婴幼儿IM临床诊断的敏感性。
[关键词] EB病毒;传染性单核细胞增多症;EBV抗体;EBV-DNA
[中图分类号] R466.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2014)11-0056-03
[Abstract] Objective To evaluation the diagnosis sensitivity of Epstein-Barr virus(EBV) DNA load and four antibodies(VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-IgG) in infantile infectious mononucleosis(IM). Methods EBV DNA loads of peripheral blood samples from 78 pediatric IM patients were analyzed by fluorescence quantitative polymerase chain reaction(PQ-PCR) as well as Elias method to detect the four antibodies in the serology. Results The anti-viral capsid antigen-IgM(anti-VCA-IgM) positive rate in the acute phase was only 27.8% in infants but 83.3% in patients ≥4 years of age. Nearly twenty percent of the infants were negative for all anti-EBV antibodies and required repeated serologic tests. The total positive rate of EBV-DNA load was 70.5% and the positive rate of the infants of <1 year old was 61.1%.Five of <1 year old and three of 1 year old seronegative infants with IM symptoms were positive in EBV - DNA load during acute phase were eventually considered as having IM on anti-VCA-IgG seroconversion thereafter. Conclusion It is not sensitive enough to diagnose IM in the infants with serologic test alone. It is proposed that the EBV-DNA load is also evaluated in peripheral blood mononuclear cells when infants presenting with IM symptoms which are negative for anti-EBV antibodies during the acute phase to increase the diagnostic sensitivity of IM in infants.
[Key words] Epstein-Barr virus; Infectious mononucleosis; Epstein-Barr virus antibodies; Epstein-Barr virus DNA
传染性单核细胞增多症(IM)是由EB病毒感染所致的急性传染病。临床上以发热、咽峡炎、淋巴结及肝脾肿大、外周血中淋巴细胞增加并出现异形淋巴细胞等为特征[1]。是儿童时期常见的病毒传染病,一年四季均可发病,临床表现多样,且往往有多脏器损害,早期诊断困难,易漏诊误诊,尤其是在婴幼儿中,由于抗EB病毒抗体反应弱,更给诊断带来困难。本研究对传染性单核细胞增多症患儿的四种抗EBV抗体及EBV-DNA载量测定进行分析,以评价此两种检测指标在IM患儿中的诊断意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年1月~2012年12月在绍兴市人民医院住院治疗的78例诊断为IM的病例,IM诊断标准参考《诸福棠实用儿科学》[2],并排除巨细胞病毒、弓形体、腺病毒及化脓性链球菌感染,其中男46例,女32例,年龄2个月~14岁。按年龄分为四个组:<1岁、1岁、2~3岁、≥4岁。
1.2 方法
静脉抽血2 mL,采用ELISA方法测定EBV四种抗体,包括:VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG和EBNA-IgG。试剂盒由德国OUMEMG公司生产。血清样本来自3个阶段:急性期≤3周,恢复期4~8周,随访期≥24周。并比较各个年龄组的EBV抗体。检测方法参考试剂说明书。低于1.0×103拷贝为阴性。实验同时设阴阳性对照。
1.3 统计学处理
采用SPSS13.0统计学软件对所得数据进行分析处理,计数资料用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 VCA-IgM检测结果
各年龄组VCA-IgM结果如表1所示,VCA-IgM在急性期,即发热开始3周内检测。<1岁组、1岁组、2~3岁组和≥4岁组阳性率分别为27.8%、41.2%、61.5%和83.3%,随着年龄上升,阳性率也在提高。比较VCA-IgM阳性率,<1岁和≥1岁(χ2=8.57,P<0.01),<2岁和≥2岁(χ2=14.25,P<0.01),<4岁和≥4岁(χ2=13.13,P<0.01),差异有统计学意义。病程8周后再检测VCA-IgM,已均为阴性。
2.2 VCA-IgG检测结果
各年龄组VCA-IgG结果如表1所示,VCA-IgG也在IM急性期测得,在IM急性期VCA-IgG总阳性率是92.3%。<1岁组、1岁组VCA-IgG阳性率分别是77.8%和88.2%,>2岁儿童在急性期均能测得VCA-IgG。<1岁组和≥4岁组VCA-IgG阳性率差异具有统计学意义(χ2=7.27,P<0.05)。
2.3 EA-IgG检测结果
各年龄段EA-IgG不同时间段检测结果如表2所示。各年龄组EA-IgG分别在急性期(≤3周),恢复期(4~8周),随访期(≥24周)测得,在急性期,<1岁组、1岁组、2~3岁组和≥4岁组阳性率分别为0、17.6%、30.8%、63.3%。在随访期(≥24周),2岁及以上儿童EA-IgG阳性率约40.0%左右。
2.4 EBNA-IgG检测结果
各年龄段EBNA-IgG不同时间段检测结果如表2所示。EBNA-IgG出现较晚,约有20%患儿在随访期仍测不到EBNA-IgG。
2.5 EBV-DNA载量检测结果及与VCA-IgM检测结果比较
各年龄段EBV-DNA载量检测结果及与VCA-IgM检测结果比较见表1、3。表1所示EBV-DNA载量阳性率是70.5%。在<1岁患儿中,EBV-DNA载体阳性率分别为61.1%,与同组VCA-IgM的阳性率27.8%比较差异具有统计学意义(χ2=4.05,P<0.05),在2~3岁组及≥4岁组患儿中,EBV-DNA载体阳性率分别为69.2%及80.0%,与同组VCA-IgM阳性率比较对IM早期检出率无明显差异(χ2分别为0.17、0.11,P>0.05)。在<1岁组患儿中有5例,在1岁组患儿中3例早期检测VCA-IgM抗体是阴性,而EBV-DNA载体是阳性的,但在后来的VCA-IgG检测是阳性的。
3 讨论
传染性单核细胞增多症(IM)是常见的一种单核巨噬细胞系统急性增生性传染病,主要由EBV感染引起。EBV感染人体后,B淋巴细胞是主要宿主细胞,EB病毒感染B淋巴细胞后,B淋巴细胞可表达一系列EB病毒特异性抗原,诱导机体产生免疫反应,产生针对EBV的多种抗体。在原发性EBV感染过程中首先产生针对衣壳抗原(CA)的IgM和IgG抗体(抗CA-IgM/IgG),抗CA-IgM早期出现,在1~2个月后消失,抗CA-IgG抗体稍迟于前者。在急性感染晚期,抗早期抗原(EA)抗体出现,可持续3~6个月,在恢复期晚期抗核抗原(NA)抗体产生,抗CA-IgG和抗NA-IgG可持续终身。抗CA-IgM阳性一直是EB病毒感染IM诊断依据,但是EB病毒感染的血清学反应复杂多样,有的病例抗CA-IgM产生延迟,有的持续缺失[3~4],这给IM的早期确诊带来一定困难。目前很多文献只是报道CA-IgM在IM诊断中的应用,且阳性率较高,可能与选择病例的年龄及有典型IM症状及体征才做检测有关。本组病例中,VCA-IgM阳性共45例,阳性率为57.7%,较文献报道低[5,6],这与本组选择病例的年龄有关,在我们选择的78例IM患儿中,婴幼儿比例较高,<1岁患儿占18/78(23.1%),1岁组占17/78(21.8%)这些患儿的抗CA-IgM、抗CA-IgG抗体阳性率均不高,抗CA-IgM为27.8%、41.2%,抗CA-IgG抗体为77.8%、88.2%,而在≥4岁的儿童中抗CA-IgM阳性率在80%以上,这表明用目前的血清学标准在急性期来诊断>2岁的患儿IM是有用的,而在1岁或1岁以下患儿的IM还缺乏相应的标准。对于<1岁的儿童,不能仅凭抗CA-IgM来诊断,在急性期和恢复期双份血清抗CA-IgG抗体滴度4倍以上的升高可能更有用,所以需重复进行血清检测。而对抗EA抗体和抗CA-IgM/IgG一样,在<1岁和1岁年龄组中,阳性率均很低,这可能与相对年长儿童、小年龄儿童的抗体反应弱有关。而NA-IgG在恢复期晚期出现,20%患儿在随访期仍测不到。
EBV-DNA检测一方面可以应用于EBV携带者的低水平复制,此外还可以检测EBV相关性疾病的活动性感染。对EBV携带者而言,其淋巴细胞内一般可能存在着较低水平的EBV-DNA载量,但这些携带者的血浆及血清中则很少检测到EBV-DNA。实时荧光定量PCR能够准确地检测病毒的拷贝数,能更准确地反映EB病毒感染和病毒复制情况,为IM患儿在临床诊断及治疗上提供很大帮助。在我们的研究中,EBV-DNA载体总阳性率为70.5%,与国内文献相当[7],在<1岁及1岁组患儿中,EBV-DNA载体阳性率分别为61.1%及64.7%,与同组VCA-IgM阳性率27.8%、41.2%比较差异具有统计学意义(P<0.01),我们发现在<1岁组患儿5例,在1岁组患儿3例在急性阶段血清学是阴性的,EBV-DNA是阳性的,在后来复查血清学抗CA-IgG转成阳性便作出了明确诊断。那么在IM急性期,当EBV特异抗体未被检测到,EBV-DNA检测是否可以作为补充。特别是在婴幼儿中,较弱的和延迟的抗体生成可能是由于他们的免疫反应未成熟[8,9],所以当婴幼儿有典型的IM症状,而急性期中抗体又是阴性,我们是否可以通过增加检测EBV-DNA作为补充来提高诊断敏感性。
[参考文献]
[1] Olson D, Huntington MK. Co-infection with cytomegalovirus and Epstein-Barr virus in mononucleosis. Case report and review of literature[J]. S D Med,2009,62(9):349-353.
[2] 吴瑞萍,胡亚美,江载芳. 诸福棠实用儿科学[M]. 第7版.北京:人民卫生出版社,2002:821-827.
[3] Robertson P,Beynon S,Whybin R,et al. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection[J]. J Med Virol,2003,70(8):617-623.
[4] Beutel K,Gross -Wieltsch U,Wiesel T,et al. Infection of T lymphocytes in Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in children of non-Asian origin[J]. Pediatr Blood Cancer,2009,53(2):184-190.
[5] 朱易萍,高举,杜惠容,等. 196例传染性单核细胞增多症的并发症和实验室检查[J]. 实用儿科临床杂志,2003, 18(11):902-903.
[6] 刘春艳,闫静,刘亚谊,等. EB病毒相关性传染性单核细胞增多症的血清学诊断[J]. 中华流行病学杂志,2007,28(9):898-900.
[7] 严海燕,罗晓红,陈娟,等. EB病毒抗体和DNA联合检测可提高儿童传染性单核细胞增多症的诊断灵敏度[J].中国微生态学杂志,2011,23(6):540-542.
[8] 阳惠,刘湘梅. 儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症58例疗效观察与护理[J]. 齐鲁护理杂志,2011,17(28):35-36.
[9] 肖小鹏. 小儿传染性单核细胞增多症的诊治分析[J]. 临床合理用药杂志,2012,5(33):84.
(收稿日期:2013-09-23)
[参考文献]
[1] Olson D, Huntington MK. Co-infection with cytomegalovirus and Epstein-Barr virus in mononucleosis. Case report and review of literature[J]. S D Med,2009,62(9):349-353.
[2] 吴瑞萍,胡亚美,江载芳. 诸福棠实用儿科学[M]. 第7版.北京:人民卫生出版社,2002:821-827.
[3] Robertson P,Beynon S,Whybin R,et al. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection[J]. J Med Virol,2003,70(8):617-623.
[4] Beutel K,Gross -Wieltsch U,Wiesel T,et al. Infection of T lymphocytes in Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in children of non-Asian origin[J]. Pediatr Blood Cancer,2009,53(2):184-190.
[5] 朱易萍,高举,杜惠容,等. 196例传染性单核细胞增多症的并发症和实验室检查[J]. 实用儿科临床杂志,2003, 18(11):902-903.
[6] 刘春艳,闫静,刘亚谊,等. EB病毒相关性传染性单核细胞增多症的血清学诊断[J]. 中华流行病学杂志,2007,28(9):898-900.
[7] 严海燕,罗晓红,陈娟,等. EB病毒抗体和DNA联合检测可提高儿童传染性单核细胞增多症的诊断灵敏度[J].中国微生态学杂志,2011,23(6):540-542.
[8] 阳惠,刘湘梅. 儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症58例疗效观察与护理[J]. 齐鲁护理杂志,2011,17(28):35-36.
[9] 肖小鹏. 小儿传染性单核细胞增多症的诊治分析[J]. 临床合理用药杂志,2012,5(33):84.
(收稿日期:2013-09-23)
[参考文献]
[1] Olson D, Huntington MK. Co-infection with cytomegalovirus and Epstein-Barr virus in mononucleosis. Case report and review of literature[J]. S D Med,2009,62(9):349-353.
[2] 吴瑞萍,胡亚美,江载芳. 诸福棠实用儿科学[M]. 第7版.北京:人民卫生出版社,2002:821-827.
[3] Robertson P,Beynon S,Whybin R,et al. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection[J]. J Med Virol,2003,70(8):617-623.
[4] Beutel K,Gross -Wieltsch U,Wiesel T,et al. Infection of T lymphocytes in Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in children of non-Asian origin[J]. Pediatr Blood Cancer,2009,53(2):184-190.
[5] 朱易萍,高举,杜惠容,等. 196例传染性单核细胞增多症的并发症和实验室检查[J]. 实用儿科临床杂志,2003, 18(11):902-903.
[6] 刘春艳,闫静,刘亚谊,等. EB病毒相关性传染性单核细胞增多症的血清学诊断[J]. 中华流行病学杂志,2007,28(9):898-900.
[7] 严海燕,罗晓红,陈娟,等. EB病毒抗体和DNA联合检测可提高儿童传染性单核细胞增多症的诊断灵敏度[J].中国微生态学杂志,2011,23(6):540-542.
[8] 阳惠,刘湘梅. 儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症58例疗效观察与护理[J]. 齐鲁护理杂志,2011,17(28):35-36.
[9] 肖小鹏. 小儿传染性单核细胞增多症的诊治分析[J]. 临床合理用药杂志,2012,5(33):84.
(收稿日期:2013-09-23)