探析多药耐药基因MDR1在卵巢癌化疗中的价值

仲立新范 瑞

（1 河南省南阳市第一人民医院 肿瘤科，河南 南阳 473000；2 河南省南阳市第一人民医院 病理科，河南 南阳 473000）

探析多药耐药基因MDR1在卵巢癌化疗中的价值

仲立新1范 瑞2

（1 河南省南阳市第一人民医院 肿瘤科，河南 南阳 473000；2 河南省南阳市第一人民医院 病理科，河南 南阳 473000）

目的探析多药耐药基因MDR1在卵巢癌化疗中的价值。方法收集我院2012年2月至2014年2月收治的卵巢癌患者160例初治卵巢癌患者肿瘤组织标本，利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MDR1基因表达情况，同时用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测肿瘤细胞对抗癌药的敏感性。结果91例（56.875%）卵巢癌患者MDR1基因表达阳性；耐药组和敏感组与MDR1基因表达阳性和阴性的总符合率为81. 08%（P＞0.05）；卵巢癌组织中的MDR1表达与年龄无关（P＞0.05）。MDR1基因表达阳性和阴性与化疗预后有关（P＜0. 05）。结论MDR1基因表达阴性患者应用MDR相关药物是有效的，阳性患者应避免应用MDR相关药物。MDR1的表达阴阳性的检测对临床用药有一定的指导价值，作为判断卵巢癌患者预后的一个指标。

多药耐药基因MDR1；卵巢肿瘤；化疗；价值

卵巢肿瘤是是女性生殖系统中三大恶性肿瘤之一[1]。目前综合治疗方案是以手术为主、辅以化疗、放疗和生物治疗。然而卵巢癌细胞对多种化疗药物产生耐药性[2]，严重影响了卵巢癌患者的化疗效果和生存质量。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院2012年2月至2014年2月收治的卵巢癌患者160例经术后病理检查证实的卵巢癌患者肿瘤组织标本，年龄19～71岁，且术前未经MDR相关药物化疗。根据WHO分类标准分化程度进行划分，其中低分化100例，中分化43例，高分化9例。术中采集标本立即置含营养液的无菌瓶中，尽快送实验室处理。

1.2 肿瘤细胞制备方法

肿瘤离体后即刻进行无菌取材，并用胶原酶消化肿瘤组织制成单细胞悬液备用。

1.2.1 MTT比色法

将单细胞悬液浓度调整为（1～5）×105个/毫升，设培养液对照组、肿瘤细胞对照组及加不同抗肿瘤药物的实验组，每组设3个平行孔，每孔接种200 μL，实验组内每孔加抗肿瘤药物20 μL培养2 d，培养液对照组、肿瘤细胞对照组各加20 μL MTT培养4 h，1000 r/min离心10 min，弃上清，然后加入200 μL DMSO，摇匀，用SLT-400AT型酶标仪测定每孔在570 nm和630 nm波长处的吸光度值，按抑制率（%）=（1-实验孔A值/细胞对照孔A值）×100%，（A值=A570-A630）计算各种敏感药对肿瘤细胞的抑制率。按抑制率≥50%为敏感，否则为耐药。

1.2.2 MDR1基因检测

①RNA制备：将单细胞悬液用Trizol试剂提取细胞总RNA。取1 μg总RNA，利用Promega公司提供的逆转录试剂盒标准条件进行的逆转录反应，合成cDNA的PCR反应模板。引物为北京赛百盛公司合成的MDR1（扩增片段长度为157 bp）及内参照引物为β2微球蛋白（β2-MG）（扩增产物为114 bp）。②PCR扩增：PCR反应：逆转录产物（cDNA）和10×buffer各3 μL，MgCl2为1.5 mmol/L，MDR1及β2微球蛋白引物各0.5 μmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，MgCl21.5 mmol/L，TaqDNA聚合酶1U。PCR反应条件依次为95 ℃时间30 s，55 ℃时间30 s，72 ℃时间60 s，循环35次，最后72 ℃时间5 min结束。③PCR产物电泳：取10 μLPCR扩增产物在电压为80V的含溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶中电泳1 h，用紫外透射仪观察114 bp和157 bp扩增条带。若出现此基因特异性扩增条带者，为MDR1基因表达阳性，否则为阴性。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件，两组间差异应用t检验，P＜0.05说明两组间比较差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 β2-MG在所有组织标本中均有表达，证明了逆转录所得cDNA样品是完整的。按有无MDR1基因表达分为两组，阳性组91例，占56.875%；阴性组69例，占43.125%。

2.2 MDR1基因表达与细胞耐药水平。对MDR1基因表达阴阳性与细胞耐药水平进行统计学t检验，耐药组和敏感组与MDR1基因表达阳性和阴性的总符合率为82.44%（P＞0.05）。说明MDR1基因表达阴性患者应用MDR相关药物是有效的，阳性患者应避免应用MDR相关药物。MDR1的表达阴阳性的检测对临床用药有一定的指导价值。

2.3 MDR1基因表达与预后的关系。本文160例卵巢癌患者随访资料149例，且均在半年以上，病情稳定者133例，其中12例MDR1基因表达阳性；病情严重、复发甚至死亡者27例，其中25例MDR1基因表达阳性，经统计学t检验，二者差异具有显著性（P＞0.05）。MDR1基因的表达阴阳性可作为判断卵巢癌患者预后的一个指标。如表1所示。

3 讨 论

表1 MDR1基因表达与各因素关系的分析

多药耐药性是指癌细胞通过过度表达位于其细胞表面的糖蛋白，以利用钙通道加快化疗药物向细胞内外输送而产生的抵抗抗癌药物的一种自我保护措施。本实验选择临床上常用的11种抗癌药物，应用MTT法进行体外药敏试验，其中MDR相关有7种药物，即丝裂霉素（MMC）、更生霉素（DACT）、阿霉素（ADM）、表阿霉素（E-ADM）、长春新碱（VCR）、鬼臼乙叉甙（VP16）和平阳霉素（PYM）；其他为噻替哌（TSPA）、卡铂（JM 8）、顺铂（CDDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU）。DACT、ADM、E-ADM、VCR和VP16对卵巢癌细胞抑制率的差异有显著性，其中VP16抑制率差异有高度显著性，其余则无显著性。结果说明耐药组和敏感组与MDR1基因表达阳性和阴性的总符合率较高。据癌组织中MDR1的表达与否，对耐药患者采用药敏方案治疗可助于提高疗效，还可以对卵巢癌患者进行预后判断。

[1] Munksgaard PS,Blaakaer J. The association between endometriosis and gynecological cancers and breast cancer: a review of epidemiological data[J]. Gynecol Oncol,2011,123(1):157-163.

[2] Nooter K. Multidrug resistance(mdr)genes in human cancer[J].Br J Cancer,1991,63:663-669.

R737.31

B

1671-8194（2014）22-0205-02