免疫比浊法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白方法的方法学比较

徐活成黄惠芳赖玉琴

（1 广州市中西医结合医院检验科，广东 广州 510800；2 广州市花都区妇幼保健院（胡忠医院）检验科，广东 广州 510800）

免疫比浊法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白方法的方法学比较

徐活成1黄惠芳2赖玉琴2

（1 广州市中西医结合医院检验科，广东 广州 510800；2 广州市花都区妇幼保健院（胡忠医院）检验科，广东 广州 510800）

目的探讨免疫比浊法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白（HbAlc）结果的差异并评价其偏倚。方法选取我院2013年5月至2013年9月收集的120例常规标本，采用免疫比浊法和高效液相色谱法对标本进行HbAlc检测，评价两种检测结果的相关性及偏倚。结果HbAlc浓度在0～14.0%范围内，免疫比浊法和高效液相色谱法均有良好的重复性，数据统计分析，t值分别为0.332、0.281、0.554，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论通过方法学评价，免疫比浊法和高效液相色谱法测定HbAlc精密度符合临床要求，结果具有可比性，均适合临床的治疗监测。

糖化血红蛋白；免疫比浊法；高效液相色谱法；精密度

糖尿病是一种慢性疾病，近年来此病在很多国家和地区的患者呈逐年递增的趋势，糖化血红蛋白是糖类与血红蛋白经非酶促反应结合而成，其合成是缓慢和不可逆的[1]。糖化血红蛋白（HbAlc）是诊断糖尿病和监测糖尿病治疗效果的重要指标，其可反映患者3个月内的血糖水平，对于评估当前血糖浓度有重要意义。目前HbAlc的监测方法有：离子交换高效液相色谱法、离子交换层析法、免疫抑制比浊法等。高效液相色谱法是国际标准化检测方法，临床实验结果表明，免疫比浊法和高效液相色谱法对患者标本检测的基本性能可满足患者的监测要求[2]，为研究两种检测方法的差异程度，特进行以下研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

标本来源于门诊血糖糖尿病患者和内分泌科住院患者全血标本120份，均采用EDTA-K2抗凝。患者年龄在26～78岁，平均（48.5±4.3）岁。

1.2 方法

仪器采用东芝120全自动生化仪，仪器定期校准，每日用各仪器制定或提供的高、低值指控品进行质量控制。采用NCCLS-EP5进行精密度评价，选择有医学决定水平的异常和正常浓度样品，校准后隔1 h对样本测定一次，连续测定10次，每种方法可得到20个数据，计算标准差、均值作为批内精密度。严格按照说明书，肝素锂标本取10μL＋1000 μL溶血素处理，免疫比浊法和高效液相色谱法检测HbAlc结果，计算HbAlc结果。有关数据进行统计分析。

1.3 数据处理

使用SPSS19.0软件包对本次实验数据进行处理，以95%为可信区间，计算结果显示P＜0.05时，表示样本差异明显且有统计学意义。诊断准确率为计数资料，组间比较方法为χ2检验。

2 结 果

两种方法测试的HbAlc结果，低高浓度均值比较，见表1。

表1 两种方法测试的HbAlc结果，低高浓度均值比较

HbAlc浓度在0～14.0%范围内，免疫比浊法和高效液相色谱法均有良好的重复性，数据统计分析，t值分别为0.332、0.281、0.554，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨 论

大量研究表明，长期监测、控制血糖能减少糖尿病相关并发症的发生，HbAlc是糖尿病患者血糖控制指标，可作为血糖代谢情况的手段，对早期发现糖尿病、指导糖尿病治疗有积极意义。HbAlc在糖尿病的筛查中有早期提示的价值，可作为轻症[3]、隐形糖尿病的早期诊断，在治疗过程中，是评价血糖控制好坏的重要标准，血糖控制效果欠佳时，浓度可升高，此外HbAlc可评估糖尿病慢性并发症的发生与发展，其检测越来越受到重视[4]。HbAlc是血液中与葡萄糖结合的部分血红蛋白，血压中葡萄糖浓度升高时，HbAlc含量也会升高。HbAlc是检测120 d内平均血糖水平，与空腹及胰岛素使用无关。

目前HbAlc的检测方法包括高效液相色谱法、电泳法、微柱法、亲和层析法等，随着技术不断进步[5]，先进仪器不断进入检验领域，免疫比浊法和高效液相色谱法成为临床最常用的方法。

美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）推荐高效液相色谱法是检测HbAlc的金标准，在本组资料中, HbAlc浓度在0～14%范围时，两种检测方法都有良好的重复性[6]，两组数据没有显著性差异，精密度均符合临床要求，结果具有可比性，适合临床用于糖尿病治疗监测。

随着自动生化分析仪的普及，免疫比浊法已经广泛应用于基层医院，但试剂的选择，溶血剂和血细胞的比例，加入时间等都影响检测结果的准确性[7]，单克隆抗体不可识别的希夫碱，因Hb变异体的普遍存在对免疫比浊法的重复性及准确性造成巨大挑战，为了提高其准确性和可重复性，免疫比浊法在操作上力求标准化，在工作人员、试剂选择、血细胞比例等方面做到标准化。高效液相色谱法使HbAlc的准确性及可重复性得到很大提高，免疫比浊法应与高效液相色谱法进行校正或设立参考区间[8]，对检测方法进行比较，临床医师在分析结果时也要了解方法学造成的检测差异，这对病情的诊断、控制都有重要作用。

两种检测方法在操作环节严格控制下，检测结果均有较好的吻合性。通过方法学评价，免疫比浊法和高效液相色谱法测定HbAlc精密度符合临床要求，结果具有可比性，均适合临床的治疗监测。

[1] 周丹秋,王东明,冯仁丰.免疫抑制比浊法测定HbAlc的可靠性评价[J].临床检验杂志,2012,21(5):291.

[2] 托马斯,朱汉民,沈霞,等.糖化血红蛋白[J].临床实验诊断学,2011, 5(1):112-113.

[3] 姚雪琴.空腹血糖和糖化血红蛋白的相关性分析[J].检验医学与临床,2012,3(6):280.

[4] Weber M,Harem C.Role of Prtype natriuretic peptide(BNP)and HbAlc in clinical routine[J].Heart,2009,92(6):843-849.

[5] De Lemos JA,Morrow DA,Bentley JH,et a1.The prog-nostic Value of B-type natriuretic peptide in patients withacute coronary syndromes[J]. N Engl J Med,2011,345(14):1014-1021.

[6] 郭世春,吴蕊,黄昭喧,等.糖尿病医院感染患者糖化血红蛋白的监测意义[J].中国感染控制杂志,2012,5(2):148-149.

[7] Inoue T,Sakuma M ,Yaguchi I,et a1.Early recanalizationand plasma brain natriuretic peptide as an indicator of leftventricular function after acute myocardial infarction[J].Am Heart J,2012,143(5):790-796.

[8] 纪立农.用糖化血红蛋白诊断糖尿病[J].中国糖尿病杂志,2010,17 (8):561-562.

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1671-8194（2014）24-0072-02