更年乐水丸的质量标准研究

2014-05-18周红敏李亚萍张明昊

中国医药指南 2014年21期

关键词：淫羊女贞子藿苷

周红敏李亚萍张明昊*

（1 郑州市第六人民医院，河南郑州 450061；2 郑州市中医院，河南郑州450007；3 河南中医学院基础医学院，河南郑州450046）

更年乐水丸的质量标准研究

周红敏1李亚萍2张明昊3*

（1 郑州市第六人民医院，河南郑州 450061；2 郑州市中医院，河南郑州450007；3 河南中医学院基础医学院，河南郑州450046）

目的建立更年乐水丸的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对女贞子、淫羊藿进行鉴别，应用高效液相色谱法测定淫羊藿中的淫羊藿苷含量。结果TLC鉴别女贞子、淫羊藿方法简便易行，斑点清晰，专属性强；高效液相色谱法测定淫羊藿苷含量，平均回收率为94.17%，RSD为2.2%（n=6）。结论该方法合理，简便，结果准确，可用于更年乐水丸的质量控制。

更年乐水丸；淫羊藿苷；薄层色谱法；高效液相色谱法

更年乐水丸是河南中医学院自主研制的用于治疗妇女更年期综合征的中药制剂，由淫羊藿、巴戟天、肉苁蓉、女贞子、枸杞子、白芍、香附子、石菖蒲、合欢皮等11味中药加工而成，具有养心养肾、调补冲任的功能[1]，可提高机体免疫力，总体调节神经-内分泌-免疫网络系统，能够全面改善围绝经期女性出现的夜寐不安、心悸、耳鸣、烘热汗出、烦躁易怒、腰背酸痛等症状。为了初步建立更年乐水丸的质量标准，本文对该方中淫羊藿、女贞子等2味中药进行了薄层定性鉴别研究，并以淫羊藿苷为指标成分进行了含量测定研究。

1 仪器与试药

DIONEX高效液相色谱仪购自美国；依利特C18色谱柱购自大连依利特分析仪器有限公司。淫羊藿苷对照品：中国药品生物制品检定所；批号：110737-200414。齐墩果酸对照品：购自中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，其他为分析纯。

2 实验内容

2.1 薄层鉴别[2]

2.1.1 淫羊藿的鉴别

取淫羊藿10 g，加乙醇50 mL，超声10 min，残渣加10 mL蒸馏水使之溶解，乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，残渣加乙醇至5 mL，溶解后作为供试品溶液。另取本品加甲醇制成对照品溶液（0.5 mg/mL）。以上三种溶液各3 μL，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶1∶1∶1）为展开剂，在365 nm波长的紫外灯下检视。供试品色谱显暗红色斑点。阴性无干扰，见图1。

2.1.2 女贞子的鉴别

取本品10 g，加乙醚30 mL，超声提取20 min，滤过，加乙醇稀释至2 mL，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取齐墩果酸加乙醇制成对照品（1 mg/mL）。以薄层色谱法为依据进行试验，吸取以上3种溶液，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）为展开剂，喷以10%硫酸乙醇溶液，110 ℃加热至斑点显现清晰。在供试品色谱图对照品相应的位置上出现颜色相同的斑点。阴性则无斑点显现，见图2。

2.2 淫羊藿苷的含量测定[3]

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

填充剂选择十八烷基键合硅胶，甲醇-水（55∶45）为流动相，检测波长设定为270 nm。理论塔板数：淫羊藿苷不低于1500，流速0.8 mL/min；柱温30 ℃。

图1 淫羊藿的薄层图谱

图2 女贞子薄层色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷4.9 mg，加甲醇溶解、稀释，制成0.49 mg/mL的标准储备液。

2.2.3 制备供试品溶液

精密称取本品2 g，置索氏提取器中，加60 mL三氯甲烷脱脂后，残渣加60 mL甲醇提取4 h，挥干甲醇，残渣加乙醇定容至10 mL。作为供试品溶液。

2.2.4 线性关系

精密吸取0.2、0.5、1、2、3 mL标准储备液注入5 mL量瓶中，以甲醇稀释，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪进行测定。进样量（mg）设为横坐标，峰面积设为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=37.3X-1.4586（R2=0.9999），见图3。

图3 高效液相色谱

2.2.5 精密度试验

精密吸取淫羊藿苷对照品溶液（0.098 mg/mL）10 μL，使用液相色谱仪进行测定。进行重复测定5次后，峰面积均值为34.91314，RSD=1.06%（n=5），说明有良好的精密度。

2.2.6 稳定性试验

取本品2 g，按供试品溶液制备和测定项下进行操作。分别在0、2、4、8、12、24 h进样，峰面积均值为62.1958，RSD＝1.30%（n=6），24 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验

取本品2 g，共6份，进行重复性试验。峰面积均值为62.9209，RSD＝4.2%（n=6），结果表明，重复性良好。

表1 加样回收率结果（n=6）

2.2.8 加样回收率试验

精密称取淫羊藿苷对照品10 mg加甲醇，使之溶解，作为标准储备液。精密量取6份已知含量的水丸1 g，置索氏提取器中。三氯甲烷脱脂后，精密吸取标准储备储备液0.4 mL，分置上述索氏提取器中，加甲醇适量，提取4 h，滤液挥干，残渣加10 mL蒸馏水使溶解，乙酸乙酯萃取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加乙醇溶解，定容至5 mL，作为供试品溶液。测定其含量，回收率为94.17%，RSD为2.2%（n=6）。见表1，说明本法有良好的回收率。

2.2.9 测定法

精密吸取10 μL对照品溶液与10 μL样品溶液，加入液相色谱仪，测定。

2.2.10 样品含量测定

见表2。

本品每克含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）计，不得少于0.4 mg。

3 讨论

祖国医学认为，女子一生中生殖、生长、发育、衰老的全过程与肾有着密切的联系，故有“女子以肾为先天”之说。围绝经期女性历经、带、胎、产，屡耗气血，主要累及心、肝、脾、肾，出现多脏腑功能紊乱，机体阴平阳秘的局面被破坏，从而变生诸症。目前西医常采用激素替代疗法治疗围绝经期综合征，但其有禁忌证和不良反应且潜在致癌。而中医药治疗本病具有疗效显著、不良反应小等优点，在治疗围绝经期综合征方面具有重要意义[4]。实验所用制剂更年乐水丸是依据多年临床经验组方，经现代工艺加工而成，其中淫羊藿、巴戟天、肉苁蓉等3味补肾阳之药为君药；女贞子、枸杞子等2味补肝肾阴之药为臣药，能有效改善围绝经期女性的各种症状。相关研究表明[5，6]，淫羊藿可使心脑血管血流量增加，促进造血功能，而淫羊藿苷是淫羊藿的有效成分之一，故选择淫羊藿苷作为控制本品质量的指标成分，从而能更好地控制产品质量。本文提供了更年乐水丸定性和定量的测定方法，为全面控制产品质量提供了依据。