高效液相色谱法测定氢溴酸山莨菪碱注射液的含量和有关物质

曹振民,王超众,刘磊,贾首时,王萌萌

(1.齐齐哈尔医学院附属第二医院药剂科,齐齐哈尔 161006;2.黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心,齐齐哈尔 161006;3.黑龙江省齐齐哈尔市第一医院药剂科,齐齐哈尔 161005;4.黑龙江省齐齐哈尔市第一医院中西医结合科,齐齐哈尔 161005)

高效液相色谱法测定氢溴酸山莨菪碱注射液的含量和有关物质

曹振民1,王超众2,刘磊3,贾首时2,王萌萌4

(1.齐齐哈尔医学院附属第二医院药剂科,齐齐哈尔 161006;2.黑龙江省齐齐哈尔市食品药品检验检测中心,齐齐哈尔 161006;3.黑龙江省齐齐哈尔市第一医院药剂科,齐齐哈尔 161005;4.黑龙江省齐齐哈尔市第一医院中西医结合科,齐齐哈尔 161005)

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定氢溴酸山莨菪碱注射液的含量和有关物质。方法采用ZORBAX Eclipse XDB-C8色谱柱(4.6mm×150 mm,5μm),以0.1%庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)-乙腈(65∶35)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为210 nm。结果氢溴酸山莨菪碱在5～200μg·mL-1范围内线性关系良好,回归方程:A=31.59C+5.930,r=0.999 8(n=6),平均回收率为100.16%(RSD=1.08%)。供试品溶液在24 h内的稳定性良好(RSD=0.6%),定量限为50 ng。结论该方法简便、准确、重复性好,适用于氢溴酸山莨菪碱注射液的质量控制。

山莨菪碱注射液,氢溴酸;色谱法,高效液相;含量测定;有关物质;质量控制

氢溴酸山莨菪碱为莨菪生物碱类M胆碱受体拮抗药,临床用于抢救感染性、中毒性休克,治疗血栓、各种神经痛以及平滑肌痉挛等。《中华人民共和国药典》2010年版二部中,氢溴酸山莨菪碱注射液未收载有关物质检查方法,含量测定项采用的方法为紫外-可见分光光度法[1]。另有文献报道采用电感耦合等离子体-原子发射光谱法[2]、一阶导数分光光度法[3]和线性滴定微机计算法[4]测定氢溴酸山莨菪碱的含量,笔者未检索到测定其有关物质的文献报道。为了更好地控制产品质量,笔者采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法测定氢溴酸山莨菪碱注射液的含量和有关物质,该方法简便可行,为控制其制剂的质量提供科学方法,也可以作为《中华人民共和国药典》再版时参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪(包括四元泵,紫外检测器,柱温箱,自动进样器,工作站);岛津UV2550紫外-可见分光光度计;Sartorius BP211D型十万分之一天平;KQ-1000型超声波清洗器;SHB-IIIA型循环水式多用真空泵。

1.2 试药 氢溴酸山莨菪碱对照品(批号:100051-201105)购自中国食品药品检定研究院;氢溴酸山莨菪碱注射液(1 m L∶10 mg)为吉林某企业提供(批号: 20110601,20110602,20110701);氢溴酸(含量40%,分析纯,批号:20120801),购自上海谱振生物科技有限公司;HPLC流动相所用乙腈为色谱纯(Dikma Pure);水为屈臣氏纯化水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:ZORBAX Eclipse XDB-C8色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.1%庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)-乙腈(65∶35);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:210 nm;柱温:30℃;进样量:20μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液 精密称取氢溴酸山莨菪碱对照品适量,用水溶解并稀释成每毫升中约含1 mg的溶液,摇匀,即得。

2.2.2 对照品溶液 精密称取氢溴酸山莨菪碱对照品适量,用水溶解并稀释成每毫升中约含0.02 mg的溶液,摇匀,滤过,即得。

2.2.3 供试品溶液 取氢溴酸山莨菪碱注射液10支,混匀,精密量取适量,加水稀释成每毫升中约含0. 02 mg的溶液,摇匀,滤过,即得。

2.2.4 有关物质检查溶液 取氢溴酸山莨菪碱注射液10支,混匀,精密量取适量,加水稀释成每毫升中约含0.2 mg的溶液,摇匀,滤过,作为供试品溶液。精密量取1 m L,置100 mL量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。

2.2.5 阴性空白溶液 按处方比例制成不含氢溴酸山莨菪碱的阴性样品,并按含量供试品溶液的制备方法制得阴性空白溶液。

2.2.6 氢溴酸溶液 精密称取氢溴酸适量,加水溶解并稀释成每毫升中含0.04 mg的溶液,摇匀,滤过,即得。

2.3 有关物质检测

2.3.1 专属性实验 取氢溴酸山莨菪碱注射液1 mL,分别加入1 moL·L-1盐酸溶液、1 moL·L-1氢氧化钠溶液、3%过氧化氢溶液各1 mL,室温放置1 h后中和;另取2份样品分别置85℃烘箱中2 h、254 nm紫外灯下照射1 d。分别加水定容至50 m L,取20μL注入液相色谱仪。结果表明,本品经酸破坏后,主峰面积略有减小,产生降解峰一个;经碱破坏后,主峰几乎完全消失,产生降解产物峰3个;经氧化破坏后,主峰未见减小,产1个很大的杂质峰;本品对光和热稳定。见图1。

2.3.2 有关物质检测方法 照“2.1”项色谱条件,取对照溶液20μL注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分峰的峰高约为满量程的20%;再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍,供试品溶液的色谱图中如有杂质峰,除溶剂峰附近的溴离子峰外,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。

2.3.3 有关物质检测结果 取氢溴酸山莨菪碱注射液3批,照“2.3.2”项下方法测定有关物质,结果见表1。

2.4 含量测定方法

2.4.1 线性关系考察 精密量取“2.2.1”项下的对照品贮备液0.5,1,2,5,10,20 mL,分别置100 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。进样分析,记录色谱图,以浓度(C,μg·mL-1)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标做线性回归,得回归方程:A=31.59C+5.930,r=0.999 8(n=6),线性范围为5～200μg·m L-1。

2.4.2 精密度实验 取“2.2.2”项下的对照品溶液,重复进样6次,其峰面积的RSD为0.31%,结果表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性实验 取同批号(批号1)的样品6份,按“2.2.3”项下方法制备6份供试品溶液,依法进样分析,测得平均含量为99.4%,RSD为1.1%,结果表明该方法重复性良好。

2.4.4 稳定性实验 取同一份供试品溶液,分别在0,2,6,10,16,24 h进样分析,记录色谱图。峰面积的RSD为0.6%,结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.5 检测限和定量限实验 在选定的色谱条件下,按信噪比为3和10作为检测限和定量限,测得氢溴酸山莨菪碱的检测限为15 ng,定量限为50 ng。

图1 不同降解条件下氢溴酸山莨菪碱的HPLC色谱图

2.4.6 回收率实验 取已经测得含量的样品(批号1),精密量取1 mL,分别置9个50 mL量瓶中,分别精密加入“2.2.1”项下的对照品贮备液(1 mg·mL-1)8,10,12 m L,加水稀释至刻度,摇匀。精密量取5 m L,置50 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。得相当于加样80%,100%,120%的溶液。精密量取上述溶液各20μL注入液相色谱仪,记录色谱图。结果平均回收率为100.16%,RSD=1.08%(n=9),见表2。

表1 3批样品有关物质检测结果 %

表2 山莨菪碱回收率实验结果

2.4.7 样品测定 取3批氢溴酸山莨菪碱注射液,按“2.2”项下方法配制对照品溶液、含量供试品溶液、阴性供试品溶液和氢溴酸溶液,按“2.1”项下色谱条件进样分析,记录色谱图,并按外标法计算含量,并将该结果与用“《中华人民共和国药典》2010年版二部氢溴酸山莨菪碱注射液含量测定”项下的方法(UV法)测得的结果比较,结果见表3。

3 讨论

由于HPLC法测定氢溴酸山莨菪碱的含量笔者未见报道,因此色谱条件的选择比较困难。实验中曾尝试过C18、C8色谱柱,磷酸盐缓冲液、甲酸、离子对色谱等色谱条件搭配,结果表明在应用C8色谱柱,0.1%庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈(65∶35)为流动相时得到的峰型最佳,且峰面积重复性最好。实验中还曾对0.1 mg·mL-1的氢溴酸山莨菪碱溶液进行紫外扫描。结果表明该物质在256 nm处有最大吸收, 210 nm处有较强的末端吸收。在两个波长处主峰均可以得到较好的峰型和重复性,但是256 nm处时杂质响应值偏低,因此最终采用210 nm作为检测波长。

表3 紫外法和HPLC法检测氢溴酸山莨菪碱注射液含量测定结果 %

《中华人民共和国药典》2010年版二部中未收录氢溴酸山莨菪碱有关物质的检查,本研究建立HPLC法测定有关物质的方法,是对该制剂质量标准的一个补充。本研究还与《中华人民共和国药典》收载含量测定方法(UV法)进行比较,结果表明两种方法差异无统计学意义,但本方法专属性更强,准确度及精密度更好,操作简单,且相对环保,能够对氢溴酸山莨菪碱注射液的质量控制提供充分的实验数据。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:556-557.

[2] 王伟,孙为德.电感耦合等离子体-原子发射光谱法间接测定氢溴酸山莨菪碱注射液[J].中国医药工业杂志, 2003,34(4):183-184.

[3] 李德明,范义凤,王华.一阶导数分光光度法测定氢溴酸山莨菪碱凝胶中氢溴酸山莨菪碱的含量[J].中国交通医学杂志,2005,19(1):83-87.

[4] 曹共民,高庆一,尹光华,等.线性滴定微机计算法测定氢溴酸山莨菪碱含量的初步研究[J].华西药学杂志,1989, 4(1):37-39.

DOI 10.3870/yydb.2014.06.030

R971.9;R927.2

A

1004-0781(2014)06-0797-03

2013-08-21

2013-11-08

曹振民(1972-),男,黑龙江齐齐哈尔人,副主任药师,硕士,从事临床药学工作。电话:(0)13206615731,E-mail:caozhenmin@163.com。

王超众(1983-),男,黑龙江齐齐哈尔人,主管药师,硕士,主要从事药物分析工作。电话:(0)15845206412, E-mail:wangchaozhongkcn@163.com。