p H示差法测定不同种类蓝果忍冬总花色苷含量

王艺菲，辛秀兰，陈亮，霍俊伟，*

（1.东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030；2.北京电子科技职业学院，北京100029；3.北京化工大学化工资源有效利用国家重点实验室，北京100029）

蓝果忍冬 （Lonicera caerulea L.）俗称山茄子、黑瞎子果、羊奶子等，在植物学分类上属于忍冬科（Caprifoliaceae）、忍冬属（Lonicera Linn.），主要分布在北半球的寒带浆果带，北美和北欧各国以及我国东北和新疆。我国东北大小兴安岭和长白山蕴含着丰富的蓝果忍冬野生资源[1]。蓝果忍冬是一种新开发的，具有北方特色的小浆果树种，果实富含糖类、有机酸、矿物质、维生素和多种微量元素，口感酸甜，略有苦味，可鲜食，也可加工成饮料、果酱、果糕和果酒，具有很高的保健价值。茎叶和果实可提取天然紫红色素，是天然食品添加剂的重要来源，可入药。因其名贵、稀有、风味独特、污染少，且有滋补和药用功效，故而成为理想的天然保健营养食品，被世界粮农组织定为世界稀有珍贵野生浆果[2]。蓝靛果忍冬含有丰富的花青素、维生素等物质，营养成分和营养价值和越橘很相似，但对土壤等栽培条件的要求却不象越橘那么特殊，因此，某种程度上可以替代越橘进行栽培[3]。

花色苷不仅是一种天然食用色素，而且具有缓解视疲劳、增强记忆力、抗菌抗氧化作用，还可以改善血液循环、预防心血管疾病、抗癌防癌[4-7]。目前我国尚缺乏蓝果忍冬优良品种，特别是国内珍贵的野生资源没有得到合理的开发利用。据中国植物志记载，在我国野生蓝果忍冬主要有两个种类，即分布在东北地区的蓝靛果忍冬（Lonicera edulis），在新疆分布的阿尔泰忍冬（Lonicera altaica）。本文利用pH示差法，对这两种野生蓝果忍冬的总花色苷含量进行测定和评价，以其为今后选育蓝果忍冬优良品种提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

蓝果忍冬冷冻果；盐酸、乙醇、氯化钾、乙酸钠均为分析纯：北京化工厂；雷磁PHS-3C-S型精密pH计：上海雷磁仪器厂；model C9860A超声波清洗器：天津市科贝尔光电技术有限责任公司；7DZ5-WS多管架自动平衡离心机：湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；7600-1紫外可见分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 蓝果忍冬样品的选取

2012年6月份在东北农业大学园艺试验站蓝果忍冬种质资源圃中，选取了20株果实形态良好的蓝果忍冬野生株系，其中10株为来自吉林长白山地区的蓝靛果忍冬，10株来自新疆阿尔泰地区的阿尔泰忍冬。将每个植株进行命名，采自吉林长白山地区的蓝果忍冬依次命名为 C1，C2，C3，C4，C5，C6，C7，C8，C9，C10；采自新疆阿尔泰地区的蓝果忍冬依次命名为A1，A2，A3，A4，A5，A6，A7，A8，A9，A10。将果实放入-20 ℃冰柜中冷冻保存。

1.2.2 蓝果忍冬花色苷的提取

取蓝果忍冬冷冻果3g，研磨，加入30mL60%乙醇（含有0.1%HCl），超声 30min，温度20℃，4000r/min 离心15 min，残渣再另加30 mL提取溶剂，重复操作2次，洗提滤渣至无色，合并3次上清液，定容至100 mL。

1.2.3 缓冲液的配制

pH为1的缓冲液（准确称取1.86 g的KCl，与980 mL蒸馏水混合，用HCl校正pH至1.0，移至1 L容量瓶中，用蒸馏水定容）。

pH为4.5的缓冲液（准确称取54.43 g CH3COONa，与960 mL水混合，用HCl校正pH至4.5，移至1 L容量瓶中，用蒸馏水定容）。

1.2.4 经验公式的选取

花色苷含量（mg/100 g）=（A/εL）×MW×DF×V/Wt×100

式中：A为吸光度；ε为矢车菊-3-葡萄糖苷消光系数，26 900；L为比色皿光程，1 cm；MW为矢车菊-3-葡萄糖苷分子量，449.2；DF为稀释因子；V为最终体积，mL；Wt为产品重量，mg；

2 结果与分析

2.1 最大吸收波长的确定

将提取液经过pH为1.0和pH为4.5缓冲液稀释，在400 nm～800 nm波长范围内进行可见光扫描，扫描结果见图1，确定蓝果忍冬花色苷最大吸收波长为510 nm。

图1 蓝果忍冬花色苷光谱扫描曲线Fig.1 Spectral scanning curve of anthocyanin in blue honeysuckle

2.2 平衡时间的确定

表1 蓝果忍冬花色苷吸光值Table 1 Blue honeysuckle anthocyanin absorption value

由表1，在pH为1.0的缓冲液中，花色苷的吸光值随时间的延长而逐渐增加，在60 min时基本达到稳定；在pH为4.5的缓冲液中，花色苷的吸光值随时间的延长而减小，在40 min时基本达到稳定。因此，综合考虑，平衡时间确定为60 min。

2.3 总花色苷含量的测定

取2.5 mL提取液，分别用pH为1.0和pH为4.5的缓冲液定容至25 mL。待达到平衡时间后，在最大吸收波长下测定吸光值，计算花色苷含量。吉林长白山地区的10株野生蓝靛果忍冬的总花色苷含量见表2，图2。

表2 吉林长白山地区蓝靛果忍冬总花色苷含量Table 2 Total anthocyanin content of L.caerulea var edulis in Changbai Mountain area

图2 吉林长白山地区蓝靛果忍冬总花色苷含量Fig.2 Total anthocyanin content of L.caerulea var edulis in Changbai Mountain area

由表2和图2中可以看出，采自吉林长白山地区的10株野生蓝靛果忍冬中，总花色苷含量最低的为C2：284.72 mg/100 g，含量最高的为C10：657.10 mg/100 g。10个野生品种的总花色苷含量平均值为411.30mg/100 g，标准差为116.77，其中有四个野生品种C3、C6、C9、C10的总花色苷含量高于平均值。

新疆阿尔泰地区的10株野生阿尔泰忍冬的总花色苷含量见表3，图3。

表3 阿尔泰忍冬总花色苷含量Table 3 Total anthocyanin content of L.caerulea var altaiea

图3 阿尔泰忍冬总花色苷含量Fig.3 Total anthocyanin content of L.caerulea var altaiea

由表3和图3，采自新疆阿尔泰地区的10株野生阿尔泰忍冬中，总花色苷含量最低的为A2：238.24mg/100g，含量最高的为A10：540.49 mg/100 g。10个株系的总花色苷的平均值为403.28 mg/100 g，标准差为99.83，其中，有 6 个株系 A3、A5、A6、A8、A9、A10 的总花色苷含量超过平均值。

通过两地野生蓝果忍冬总花色苷含量平均值的对比，可以看出，采自吉林长白山地区的野生蓝果忍冬品种的总花色苷含量更高，但采自新疆阿尔泰地区的野生蓝果忍冬品种的标准差更小。

3 讨论与小结

蓝果忍冬是我国独具特色的小浆果树种，市场前景良好，但目前我国由于没有优良品种而不能进行人工栽培，很大程度上限制了蓝果忍冬的良性发展，珍贵的野生资源未能达到合理的开发。

本文从吉林长白山、新疆阿尔泰地区分别选择了两个不同种类的蓝果忍冬野生株系，测得的总花色苷含量有明显的差异。采自吉林长白山地区的蓝靛果忍冬总花色苷含量平均值为411.30 mg/100 g，其中，最低值为C2：284.72 mg/100 g，而C10的总花色苷含量最高，达到657.10 mg/100 g；采自新疆阿尔泰地区的阿尔泰忍冬总花色苷的平均值为403.28 mg/100 g，其中，最低值为A2：238.24 mg/100 g，而A10的总花色苷含量最高，达到540.49mg/100g。据参考文献显示，红树莓中总花色苷含量为105mg/100g[10]；野生桑葚总花色苷含量为154.27mg/100g[11]；野生的越橘品种中，笃斯越橘为343.67mg/100g，而红豆越橘仅为147.76mg/100g[12]。可见在几种野生小浆果的总花色苷含量对比中，蓝果忍冬的总花色苷含量非常高，甚至比越橘的花色苷含量还要高。本实验表明我国野生蓝果忍冬的花色苷含量具有丰富的遗传多样性，为今后合理选择亲本进行高花色苷品种选育工作提供了理论依据，对于蓝果忍冬资源的开发利用和保护也具有重要的意义。

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