东莞地区G6PD缺乏症的分子流行病学研究

李文瑞，叶敏南，彭 琪，龙健灵，何月敬，程庆秋，曾小媚，陆小梅＊

（1.东莞市儿科研究所，广东东莞523320；2.广东医学院附属石龙博爱医院检验科，广东东莞523320）

东莞地区G6PD缺乏症的分子流行病学研究

李文瑞1，叶敏南2，彭 琪1，龙健灵1，何月敬1，程庆秋1，曾小媚1，陆小梅1＊

（1.东莞市儿科研究所，广东东莞523320；2.广东医学院附属石龙博爱医院检验科，广东东莞523320）

目的 了解东莞地区人群G6PD缺乏的流行特征，为本地区提供G6PD缺乏症基因突变、基因型及表型资料，完善本地区基因突变谱，并为制订本地区G6PD缺乏症的预防计划提供有价值的参考。方法 收集2010年1月至2012年12月在我院进行体检的男性外周血样本，采用G6PD／6PGD比值法进行筛查，记录其G6PD／6PGD比值法检测结果，G6PD／6PGD＜l.5确诊为G6PD缺乏，阳性样本采用PCR－RDB进行基因诊断，同时随机抽取50例阴性样本作为对照组进行基因诊断。计算疾病检出率、基因突变、基因型频率和基因构成比。结果 3885例样本中共检出302例表型阳性的G6PD缺乏症患者，检出10种基因突变和1种多态性位点，鉴定出12种基因型，另有3例样品未发现PCR－RDB检测的17种突变类型。50例阴性样本进行基因诊断均为阴性。东莞市男性人群G6PD缺乏表型阳性的群体检出率是7.77%，17种常见突变基因携带率是7.70%，各种突变类型的构成比依次为G1376T（32.8%）、G1388A（34.1%）、A95G（12.4%）、G871A（3.7%）、G392T（3.7%）、C1024T（3.3%）。结论 本研究阐述了东莞地区G6PD缺乏的人群发生率和详细的基因突变谱和突变频率，研究资料为在该地区制订有效可行的G6PD缺乏预防计划提供有价值的参考。

G6PD缺乏；G6PD／6PG比值法；基因类型；分子流行病学

（Chin J Lab Diagn，2014，18：1168）

遗传性葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（glucose－6－phosphate dehydrogenase，G6PD）缺乏症是世界范围内最常见的一种遗传性人类酶缺乏病，俗称蚕豆病。G6PD缺乏症属于X连锁不完全显性遗传，缺陷者在人群中分布很广，全世界约有4亿人受累［1－4］。G6PD缺乏症在中国大陆有明显的地域分布，呈南高北低的分布特点，主要分布在长江以南各省，以广东、海南、广西、云南、贵州、四川等省为高［5］。据报道广东地区人群G6PD缺乏发生率为3.1%－16.1%。随着对G6PD分子结构的不断阐明和研究的不断深入，用WHO标准化方法鉴定的G6PD生化变异型达400余种，基因突变型达到140余种，在中国人群中相继发现了17个突变位点，20种突变基因型（表1）［6］。由于G6PD缺乏症临床表现差异很大，表型诊断常常会漏诊部分轻型患者，特别是女性杂合子，错误诊断和用药可导致延误病情甚至造成严重后果［7］。而在明确诊断情况下，可以通过避免接触氧化剂等方法预防发病，尽早防治重症的出现。因此通过大规模人群分子流行病学调查了解本地区的分子流行病学资料及其基因构成情况，对于G6PD缺乏症的防治具有重要意义。

表1 中国人群的17种突变位点20种G6PD基因突变型及突变率

本研究通过对2011年1月－2013年12月期间在我院参加体检的男性人群，进行G6PD表型和基因型筛查，以期阐明人群中G6PD缺乏症的基因频率、突变类型及其分布的流行病学资料，为在该地区制订有效可行的人群G6PD缺乏症预防计划奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2010年1月－2012年12月在我院进行体检的所有男性的外周血样本，共计3885例，年龄为1岁－50岁（平均年龄29.8±3.2岁），调查对象为东莞市户籍人口，临床资料包括性别、年龄、籍贯、临床血液学指标、红细胞渗透脆性。以G6PD／6PGD＜l.5确诊为G6PD缺乏。

1.2 实验方法

1.2.1 抽样样本估计 根据广东地区以往G6PD缺乏症的分子流行病学调查结果，G6PD缺乏症发生频率大约在4.2%［8］，本研究共收集男性体检样本3885例，符合抽样调查时所需样本大小的要求。由于G6PD基因位于X染色体上，男性为X单体半合子，可以代表人群基因携带率和突变频率。

1.2.2 比值法检测G6PD酶活 采用广州米基科技贸易发展有限公司生产的改良葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PD）定量比值法试剂盒对血液样本进行G6PD酶活性进行检测。严格按照试剂说明书进行操作。记录其G6PD／6PGD比值法检测结果，G6PD／6PGD＜l.5确诊为G6PD缺乏，阳性样本采用PCR－RDB进行基因诊断。

1.2.3 PCR－RDB法检测G6PD基因型 采用我们课题组建立的PCR－RDB检测体系对血液样本进行基因型诊断。该检测体系是建立在PCR的基础上，将PCR产物与固定在尼龙膜上的检测探针发生特异性的杂交反应，再通过生物素－链霉亲合素－过氧化物酶－双氧水－四甲基联苯胺的一系列显色反应，最终通过肉眼就可直接判读结果。可同时检测样本中存在的17种基因突变型，该方法检测特异性高，操作简便，与金标准测序法比对符合率为100%。

1.2.4 分子诊断策略 我们设计了基于表型、PCR－RDB的G6PD缺乏症分子诊断策略，如下所示：

2 结果

3885例样品中共检出302例表型阳性的G6PD缺乏症患者，检出10种基因突变和1种多态性位点，鉴定出12种基因型，另有3例样品未发现PCRRDB检测的17种突变类型。东莞市男性人群G6DP缺乏表型阳性的群体检出率是7.77%，17种突变基因携带率是7.70%，常见六种突变类型的构成比依次为G1376T（32.8%）、G1388A（34.1%）、A95G（12.4%）、G871A（3.7%）、G392T（3.7%）、C1024T（3.3%）。基因型频率、基因突变频率及其构成比情况见表2。

表2 东莞地区299例G6PD基因型频率及构成比

3 讨论

在发达国家，大约有1／3的儿科就诊患者是由于遗传疾病，而且遗传病导致儿童死亡率高［9］。尽管人类基因组计划和相关的进展为一些重型的遗传疾病的治疗提供了可能，但目前的方法还是预防。获得人群中致病基因的携带率以及当地人群群体发生率是进行诊断防治的前提和基础。本研究结果显示东莞市G6PD缺乏表型阳性的男性群体检出率是7.77%，基因检出率是99.0%，常见6种突变类型的构成比依次为G1376T（32.8%）、G1388A（34.1%）、A95G（12.4%）、G871A（3.7%）、G392T（3.7%）、C1024T（3.3%），与国内报道基本一致［10］。本次研究检出中国地区少见突变T517C一例、C592T、C1360T各两例，这些突变在中国地区较少报道［11］，说明东莞地区作为中国南方城市具有中国人群G6PD基因突变普遍代表性，又有本地区的异质性。本文在3885条染色体中共检出10种突变基因和l种多态性位点，全部为置换型突变。在大样本调查基础上，表型阳性的样本被确诊的情况下，未检出这17种常见突变的样本仅3例，占1.0%（3／302），提示在G6DP的分子流行病学调查中，应用PCR－RDB基因分析所获得的分子流行病学的资料较为可信和全面。对这3例样本进行全部编码外显子的测序，将可能发现一些稀有突变和新突变，完善该地区的疾病突变谱，该工作正在进行之中。本文获得的东莞市人群中的G6PD基因突变、基因频率和构成比的资料可为制订该地区G6DP缺乏症的预防计划提供有价值的参考。东莞市人口近822万，按16／1000的人口出生率计算，根据本文的调查结果，理论上每年出生的G6PD缺乏症患者约131520人，而男婴和部分女婴将出现临床症状，考虑到广东更大的人口基数，该地区有很大的由于G6PD缺乏患儿出生造成的人口质量压力，这是值得重视的人口出生缺陷课题。我国南方地区已经将G6PD筛查作为新生儿筛查的常规项目，将对于疾病的预防和诊治提供极大帮助。本研究结果显示东莞地区人群G6PD缺乏发病率高达7.77%，若能采取婚检和新生儿筛查可有效的早期诊断并预防发病，并对高风险夫妇提供相应的遗传咨询，对于疾病的防治具有重要意义。

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Molecular Epidemiological Analysis of G6PD Deficiency in Dongguan Area

LI Wen－rui，YE Min－nan2，PENG Qi1，et al.
（1.Dongguan Institute of Pediatrics，Dongguan523320，China；2.Department of Laboratory，Affiliated Shilong Boai Hospital of Guangdong Medical College，Dongguan523320，China）

Objective To explore the epidemiological characteristics of population with G6PD deficiency in Dongguan area，and provide data of G6PD deficiency gene mutations，genotype and phenotype information of local area，perfect the gene mutation spectrum in this region，and provide valuable reference for formulate G6DP deficiency prevention programs.Methods The peripheral blood samples of male who took physical examination in our hospital from January 2010to December 2012were collected.We measured their G6PD activity，recorded the testing results of G6PD／6PGD ratio，take G6PD／6PGD＜l.5as G6PD deficiency，then positive one was detected the mutations by reverse dot blot（RDB）assay.Calculate its disease detection，gene mutation，gene frequency and constituent ratio.Results 302out of 3885cases were phenotype positive，there are 10gene mutations，1polymorphism loci and 12genotypes，other 3cases were normal with the 17types of mutations.The positive rate of G6PD deficiency phenotypic in Dongguan male was 7.77%，the proportion of 17common mutations was 7.70%，the proportion of most common types of mutations were G1376T（32.8%）、G1388A（34.1%）、A95G（12.4%）、G871A（3.7%）、G392T（3.7%）、C1024T（3.3%）.Conclusion Our study analyzed the incidence rate，gene mutation frequency of G6DP deficiency in Dongguan area，and provide valuable reference for making G6PD deficiency prevention programs.

G6PD deficiency；G6PD／6PG ratio；genotype；molecular epidemiology

Q78

A

2013－08－14）

1007－4287（2014）07－1168－04

东莞市科技计划医疗卫生类科研重点项目（NO.2011105102017）

＊通讯作者