微柱凝胶技术在血小板交叉配型中的临床应用

郭建生 姚叶林 何英爱

1.广东省东莞市中心血站，广东东莞 523930；2.广东省东莞市石龙人民医院检验科，广东东莞 523326

微柱凝胶技术在血小板交叉配型中的临床应用

郭建生1姚叶林2何英爱2

1.广东省东莞市中心血站，广东东莞 523930；2.广东省东莞市石龙人民医院检验科，广东东莞 523326

目的 探讨微柱凝胶技术在血小板交叉配型中的临床应用价值。 方法 采用微柱凝胶免疫分析技术对8例免疫性血小板输注无效的患者进行交叉配型，选择结果为“相合”的血小板进行血小板治疗，计算分析血小板计数增高指数（CCI），CCI>4.5×109/L说明血小板输注有效。选择8例输注无效进行配型的作为实验组，另选择8例输注无效未配型的作为对照组，比较两组的血小板输注结果。 结果 实验组患者CCI均>4.5×109/L，输注有效，对照组患者CCI均<4.5×109/L，差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 微柱凝胶免疫分析技术可以避免或减轻由免疫原因引起的输注无效，此方法简单快速，结果准确可靠，值得推广。

微柱凝胶免疫分析技术；血小板输注无效；血小板交叉配型

机采血小板的应用在本市普及率已达100%，各种恶性血液病患者或临床上需长期输注血小板的患者在输注过程中经常遇到输注无效的情况，主要原因是由于机体免疫产生了同种抗体，产生的同种抗体中主要有HLA抗体（占80%）[1]、血小板特异性抗体（HPA抗体）、ABH抗体等，其中血小板的抗原结构复杂，免疫产生血小板抗体的概率很高，尤其是反复大量输注血小板的患者约50%以上产生血小板同种抗体，相当于红细胞同种抗体产生频率的几十倍[2]。因此选择一种合适的方法寻找合适的献血者，以避免患者免疫产生同种抗体后出现输注无效的情况，这既可解决HLA抗体引起的输注无效，也可解决HPA及ABH等同种抗体引起的输注无效，是临床输血尤其是血小板输注无效中急需解决的问题。本研究选择8例各种原因引起血小板减少的患者，采用微柱凝胶免疫分析技术进行血小板交叉配合，治疗效果较好。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2013年2 ～11月由本市几家医院上送的患者血液标本8例，均为长期反复住院患者，年龄5～77岁，男性5例，女性3例。其中再生障碍性贫血2例，急性非淋巴细胞白血病1例，血小板减少性紫癜5例，多次输注未经配型的机采血小板，血小板抗体检测为阳性，并排除非免疫因素（感染、发热等）。血型为O型3例，A型2例，B型2例，AB型1例。选择此8例输注无效的进行配型者作为实验组，再选择同期8例未配型者作为对照组。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器 SORVALL Biofuge pico离心机，BYL型血型血清学多用离心机（BYF-I型，长春博研科学仪器有限公司），免疫微柱孵育器。

1.2.2 试剂 试剂盒包含微柱凝胶抗人球蛋白试剂卡，指示红细胞等，由吉林省长春博迅生物技术责任有限公司提供，在有效期内使用。

1.3 配型输注方法

各选择同血型5袋库存机采血小板（1治疗量/袋），应用微柱凝胶免疫分析技术交叉配型，O型红细胞加上抗人IgG致敏，作致敏红细胞用，该致敏红细胞与患者血浆各50 μl，放37℃孵育10 min，再将被检血小板按顺序加入微柱凝胶管中，离心1000 r/min，1 min后观察检测结果。结果判读与微柱凝胶红细胞抗原抗体反应相同。致敏红细胞沉于微柱凝胶管底部的判为阴性，在凝胶管上面为强阳性，悬浮在凝胶中的为弱阳性。选择配型结果为阴性的血小板进行输注。

1.4 血小板输注疗效观察

在患者输注血小板前进行血小板计数，在输注血小板后24 h再进行血小板计数，计算记录输注后24 h血小板计数增高指数（CCI），用于评估患者血小板输注的疗效（24 h CCI>4.5×109/L则血小板输注有效[3]）。

1.5 统计学分析

应用SPSS 13.0软件进行统计学分析，采用Fisher检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 交叉配型结果

8例患者分别与同血型的5袋机采血小板进行交叉配合试验，“+”为交叉配合结果阳性，“-”为交叉配合结果阴性。除患者5外，其余7位患者用5袋同型机采血小板进行配型，至少有1袋机采血小板配合成功。患者5重新选择两袋同型血小板交叉配合后结果均为相合（表1）。

表1 交叉配型结果

2.2 患者输注交叉配合血小板后24 h的结果

8例患者血小板交叉配合后进行输注的效果见表2。

表2 患者输注交叉配合血小板后24 h的结果

2.3 配型与未经配型血小板输注结果的比较

实验组在输注后CCI均>4.5×109/L，对照组CCI均＜4.5×109/L，两组差异有统计学意义（P<0.01）。

3 讨论

血小板输注的有效性一直是倍受关注的研究课题，这些年来尤其是免疫性因素（同种免疫）所引起的血小板输注无效更加是研究的焦点。因为国家一直推行成分输血，血小板的输注越来越被广泛应用。在临床上，联合化疗的患者、骨髓移植的患者等都需要输注血小板，导致血小板输注无效的情况经常发生，这就不仅达不到治疗的效果，甚至还耽误病情。从另一角度分析，现各大城市血液供应普遍紧张，而机采血小板的供应更加紧缺，长期以来各医院患者是血站采集一袋输一袋；现随着本市临床血小板供应的相对充裕（本市2013年血小板采集增长率达55.4%），为免疫性血小板输注无效患者进行输注前的交叉配型提供了可能。

影响血小板输注疗效的原因有很多，概括起来主要见于两大类[4]：一类为非免疫因素，包括发热、感染、脾大、活动性出血等；另一类为免疫性因素（同种免疫），包括HLA抗体（占80%）[1]、血小板特异性抗体（HPA抗体）、ABH抗体等。姚叶林等[5-6]研究报道血小板抗体的检出率达19%～60%。如果进行血小板的交叉配型试验，选择“适合性血小板输注”，可以很大程度地提高血小板输注疗效，减少宝贵血液资源的浪费。

本研究选择8例患者已经出现了血小板输注无效，经过血小板交叉配型输注后CCI均>4.5×109/L，与未经配型的输注组比较，差异有统计学意义（P<0.01），说明微柱凝胶免疫分析技术用于血小板配型，可以避免或减少因免疫原因导致的血小板输注无效。方檀等[7]的报道采用SEPSA法对10例血小板输注无效的患者进行血小板配型，陈玫等[8]报道采用SEPSA法对12例血小板输注无效的患者进行血小板配型，结果显示10例患者CCI均>4.5×109/L，与本研究结果一致。因此建议已经出现了免疫性血小板输注无效的患者，尽可能地进行血小板配型后再行输注。

当前用于血小板交叉配型的血清学技术只提到了两种方法（SEPSA和MPHA）[9]，该两种方法实验过程复杂，所需时间较长。微柱凝胶免疫分析技术已广泛用于交叉配血、血型正反鉴定、ABO抗体鉴定、不规则抗体筛选等，但用于血小板交叉配型则少见报道。本研究应用微柱凝胶免疫分析技术进行血小板交叉配型，可以同时检测HLA、HPA及ABH抗体，达到理想的实验结果，所需要的实验时间也较短，约在1 h内就可以完成实验，方法简单快速，结果准确可靠，值得有条件的单位推广应用。同时东莞市中心血站要有足够的机采血小板库存量以供进行血小板交叉配型使用，这就要呼吁更多的市民积极投入到成分献血的行列中，为广大患者无私奉献！

[1]陈小伍，于新发，田兆嵩.输血治疗学[M].北京：科学出版社，2012：155.

[2]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社，1998：178-182.

[3]李敬兰，曹金霓.血小板输注无效的原因与防治[J].中国输血杂志，1994，7（4）：217.

[4]李济生，赵冉.血小板输注无效的原因及预防[J].实用医技杂志，2004，11（5）：589.

[5]姚叶林，郭建生，何英爱.微柱凝胶免疫分析技术检测血小板抗体的应用[J].检验医学与临床，2013，10（增刊1）：83-84.

[6]史恩祥，范海丽，王苗武，等.卡式微柱凝胶法检测血小板抗体的应用[J].临床输血与检验，2007，9（1）：70-71.

[7]方檀，杨岩，王初.血小板配型处理免疫性血小板输注无效10例观察[J].吉林医学，2005，26（12）：1338.

[8]陈玫，胡荣花，方建.免疫性血小板输注无效12例处理[J].中国输血杂志，2004，17（1）：55.

[9]血站技术操作规程[Z].卫医政发[2012].

Clinical application of microbubes gel technology in platelet cross match

GUO Jian-sheng1YAO Ye-lin2HE Ying-ai2
1.Dongguan Center Blood Station,Guangdong Province,Dongguan 523930,China;2.Departement of Clinical Laboratory, Shilong People′s Hospital of Dongguan City in Guangdong Province,Dongguan 523326,China

ObjectiveTo explore the clinical application value of microbubes gel technology in platelet cross match.MethodsMicrobubes gel immunoassay technology was used to make cross match for 8 patients who were platelet transfusion refractoriness because of immunity,then platelet therapy was applied to those"matched"platelets,the platelet corrected count increment(CCI)was caculated and analysed,and if the CCI was higher than 4.5×109/L,the platelet transfusion was valid.Eight cases of transfusion performed with type were selected as the experimental group,and the other eight cases of transfusion performed without type were chosen as control group,the platelet transfusion result was compared.ResultsCCI of experimental group was higher than 4.5×109/L,of control group was lower than 4.5×109/L,there was significant difference between two groups(P＜0.01).ConclusionMicrobubes gel immunoassay technology can avoid or reduce transfusion refractoriness causes by the immune,this method is simple and fast,and the results are accurate and relible.It is worth to promoting.

Microbubes gel immunoassay technology;Platelet Transfusion Refractoriness;Platelet cross match

R457.1

A

1674-4721（2014）03（c）-0024-03

2014-02-13本文编辑：郭静娟）

广东省东莞市医疗卫生科技计划一般项目立项（201210515026021）