炮制对山茱萸有效成分的影响研究

宋 嬿毛春芹朱俊杰周 渊许金国池玉梅陆兔林*

（1 上海华宇药业有限公司，上海 200237；2 南京中医药大学，江苏 南京 210023）

炮制对山茱萸有效成分的影响研究

宋 嬿1毛春芹2朱俊杰1周 渊2许金国2池玉梅2陆兔林2*

（1 上海华宇药业有限公司，上海 200237；2 南京中医药大学，江苏 南京 210023）

目的 测定和分析山茱萸及其不同炮制品中马钱苷、莫诺苷、5-羟甲基糠醛、没食子酸、多糖、总黄酮、水溶性皂苷和有机酸的含量，评价炮制对山茱萸效应物质的影响。方法 采用高效液相色谱法测定山茱萸不同饮片中马钱苷、莫诺苷、5-羟甲基糠醛和没食子酸的含量，采用比色法测定山茱萸不同饮片中多糖、总黄酮和水溶性皂苷的含量，采用酸碱滴定法测定山茱萸不同饮片中有机酸的含量。结果 山茱萸经炮制后所测成分的含量都有不同程度的变化，除莫诺苷外，高压蒸制品所测成分的含量均略高于常压蒸制品，但均无显著性差异。结论 高压蒸制工艺优于常压蒸制工艺，测定结果可为制定山茱萸最佳炮制工艺提供科学的依据。

山茱萸；炮制；多组分分析；效应物质；马钱苷；色谱法

山茱萸为山茱萸科植物山茱萸（cornus officinalis）的干燥成熟果肉，酸涩、微温、归肝、肾经，具有补益肝肾和收涩固脱的功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等症[1]。现有文献报道[2-4]，山茱萸主要含有马钱苷、没食子酸、熊果酸、齐墩果酸、多糖等成分，具有降低血糖、增强免疫、抗炎等药理作用。

山茱萸临床及制剂使用多用其炮制品，其传统炮制方法繁多，有酒制、蒸制、醋制、盐制等[5]，近代炮制方法主要有清蒸和酒蒸，其中酒蒸被药典收载。山茱萸生用敛阴止汗力强，酒制后增强补肾涩精和固精缩尿功效，酒制后借酒力温通，助药势，降低其酸性，滋补作用更强[6]。但是目前山茱萸的炮制还大多采用传统的常压蒸制工艺，生产效率低、蒸制时间长、资源浪费大、炮制参数不易控制，导致制得的饮片质量难以控制。而高压蒸制方法使用先进设备，使炮制参数得到控制，资源利用率升高，生产效率提高。但不同炮制方法对山茱萸中化学成分的影响缺乏系统的研究，鲜有文献报道。本研究首次对山茱萸生品、常压蒸制品和高压蒸制品中的马钱苷、莫诺苷、5-羟甲基糠醛、没食子酸、多糖、总黄酮、水溶性皂苷和有机酸的含量进行系统的比较分析，确定山茱萸最佳炮制方法，为制定山茱萸最佳炮制工艺标准和进一步研究其药效物质提供科学的依据。

1 资料与方法

1.1 药品与试剂

马钱苷（批号：111640-200502），莫诺苷（批号：110786-200403），5-羟甲基糠醛（批号：110753-200212），芦丁（批号：100080-200306），熊果酸（批号：110742-200516），没食子酸（批号：110831-200302），均购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，葡萄糖（惠兴生化试剂有限公司）。乙腈、甲醇为色谱纯，其余所有试剂均为分析纯。山茱萸饮片购自安徽丰原铜陵中药饮片有限公司，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc）的干燥成熟果肉。

1.2 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱系统（安捷伦科技有限公司），配有四元梯度泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、UV检测器，CP225D微量天平（德国Sartorius），热压灭菌柜（日本三洋电机公司），KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），电子天平（Mettler Toledo AG285），数显恒温水浴锅HH-4（国华电器有限公司），FW100型高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司），1810-B型石英自动双重纯水蒸馏器（江苏金城国胜实验仪器厂）。

1.3 色谱条件

马钱苷及莫诺苷、5-羟甲基糠醛、没食子酸含量测定色谱柱为Kromasil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相分别为乙腈-水（15∶85，V/V）、乙腈-水（5∶95，V/V）、甲醇-0.1%磷酸（8∶92，V/V），检测波长分别为240、240、271 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃。

图1 山茱萸饮片中马钱苷和莫诺苷的含量测定色谱图（A：对照品；B：供试品-1.马钱苷，2.莫诺苷）

图3 山茱萸饮片中没食子酸的含量测定色谱图（A：对照品；B：供试品）

图3 山茱萸饮片中没食子酸的含量测定色谱图（A：对照品；B：供试品）

1.4 山茱萸饮片的制备

取净山茱萸饮片100 g，加入黄酒拌匀（黄酒用量为20%），密闭，闷润1 h，置蒸锅中蒸制6 h，取出，60 ℃干燥，即得山茱萸常压蒸制品。取净山茱萸饮片100 g，加入黄酒拌匀（黄酒用量为20%），密闭，闷润1 h，置热压灭菌柜105 ℃蒸制1.5 h，取出，60 ℃干燥，即得高压蒸制品。

1.5 溶液的配制

1.5.1 马钱苷、莫诺苷对照品溶液的制备：精密称定马钱苷、莫诺苷对照品适量，加80%甲醇分别制成单一对照品储备液；另精密吸取单一对照品储备液适量，用80%甲醇稀释成每1 mL含马钱苷60.22 μg和莫诺苷71.85 μg的混合对照品储备液，备用。供试品溶液的制备：取山茱萸常压蒸制饮片，粉碎，过三号筛，精密称取粉末0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，称重，超声提取（功率250 W，频率20 kHz）25 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，15 600×g离心10 min，即得。

1.5.2 5-羟甲基糠醛对照品溶液的制备：精密称定5-羟甲基糠醛对照品适量，加80%甲醇制成每1 mL含5-羟甲基糠醛34.80 μg的对照品储备液，备用。供试品溶液的制备：同“溶液的配制”项下“1.5.1”中的“供试品溶液的制备”。

1.5.3 没食子酸含量测定溶液的配制。①对照品溶液的制备：精密称定没食子酸对照品适量，加80%甲醇制成每1 mL含没食子酸126.8 μg的对照品储备液，备用。②供试品溶液的制备：同“溶液的配制”项下“1.5.1”中的“供试品溶液的制备”。

1.5.4 多糖含量测定溶液的配制：①对照品溶液的制备：精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖适量，加水制成每1 mL含葡萄糖0.192 mg的对照品储备液，备用。②供试品溶液的制备：取山茱萸常压蒸制饮片，粉碎，过三号筛，精密称取粉末5.0 g，加10倍量95%的乙醇回流2 h脱脂，过滤，药渣用20倍量水回流提取2次，每次1.5 h，过滤，合并滤液，浓缩，加95%乙醇至浓缩液含醇量达到80%，冷置24 h，过滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，取出沉淀加水溶解并定容至250 mL，再精密吸取该溶液1.0 mL，于刻度试管中，精密加5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀后再精密加浓硫酸8.0 mL，混匀，沸水浴中加热30 min，迅速取出冰水浴冷却10 min，取出至室温，即得。

1.5.5 总黄酮含量测定溶液的配制：①对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，用60%乙醇制成每1 mL含芦丁0.220 mg的对照品储备液。②供试品溶液的制备：取山茱萸常压蒸制饮片，粉碎，过60目筛，精密称取粉末1.0 g，加60%乙醇20 mL，90 ℃恒温振荡2 h，1980×g离心15 min，上清液置于50 mL量瓶中，用少量60%乙醇洗涤残渣，洗液与上清液合并用60%乙醇定容至刻度。再精密吸取1.0 mL，精密加入5% NaNO21.0 mL，摇匀，5 min后精密加入10% Al（NO3）31.0 mL，摇匀，6 min后精密加入4% NaOH 5.0 mL，摇匀，即得。

1.5.6 水溶性皂苷含量测定溶液的配制：①对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品适量，用70%乙醇制成每1 mL含熊果酸0.161 mg的对照品储备液。②供试品溶液的制备：取山茱萸常压蒸制饮片，粉碎，过60目筛，精密称取粉末2.0 g，加100 mL 70%乙醇，回流提取1 h，滤过，75 ℃水浴控温，过滤，回收至无醇味，加3～4倍量的蒸馏水，冷置24 h，离心，取上清夜，浓缩、定容至25 mL，作为供试品溶液，再精密吸取1.0 mL，水浴挥干溶剂，精密加入5%香草醛-冰醋酸0.5 mL和高氯酸0.8 mL，65 ℃水浴加热20 min，取出置冰水浴中冷却后，加冰醋酸5 mL，摇匀，即得。

1.5.7 总有机酸含量测定溶液的配制：①1%酚酞指示剂的制备：称取酚酞1 g，无水乙醇溶解制成1%酚酞指示剂，4 ℃保存，备用。0.1 mol/L的NaOH标准液的制备：称取NaOH 4 g，用蒸馏水溶解制成1 L，并用邻苯二甲酸氢钾标定，确定其准确浓度为0.1004 mol/L，4 ℃保存，备用。②供试品溶液的制备：取山茱萸常压蒸制饮片，粉碎，过60目筛，称取粉末10 g，加100 mL无二氧化碳蒸馏水混匀，75 ℃水浴提取30 min，过滤，滤液用无二氧化碳蒸馏水定容至250 mL量瓶中，取200 mL溶液加10%活性碳，70 ℃水浴加热脱色20 min，过滤，滤液定容至200 mL，即得。

2 结 果

2.1 系统适应性实验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果在相应的色谱条件下，马钱苷及莫诺苷、5-羟甲基糠醛、没食子酸与其他成分均能达到基线分离，其保留时间分别为6.8、8.7、9.2和9.2 min，分离度均＞1.5，理论板数均不低于5 000。色谱图见图1～图3。

2.2 山茱萸中马钱苷、莫诺苷含量测定

①线性关系考察：分别精密吸取混合对照品储备液1、2、4、6、8、10 mL，置10 mL量瓶中，用80%甲醇稀释定容至刻度，分别进样10 μL，测定马钱苷和莫诺苷的峰面积值。以峰面积值为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标进行线性回归。结果表明马钱苷和莫诺苷在各自的线性范围（分别为6.022～60.22和7.185～71.85 μg/mL）内线性关系良好，回归方程分别为y=26.947 1x-2.810 4和y=12.2479x+6.060 0，r分别为0.999 7和0.999 9。②精密度实验：取马钱苷和莫诺苷质量浓度分别为36.13和43.11 μg/mL的混合对照品溶液，连续进样5次，测定马钱苷和莫诺苷的峰面积，二者峰面积的RSD值分别为0.40%和0.32%。表明仪器精密度良好。③重复性实验：取同一饮片粉末，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，平行实验5份，测定马钱苷和莫诺苷的峰面积并计算含量。马钱苷和莫诺苷的平均百分含量（RSD）为0.53%（1.46%）和1.06%（2.69%），表明方法重复性良好。④稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定马钱苷和莫诺苷的峰面积，二者不同时间峰面积的RSD分别为1.38%和1.74%，表明供试品溶液在24 h内稳定。⑤准确度试验：分别精密称取马钱苷和莫诺苷对照品适量，用80%甲醇配制成每1 mL含马钱苷0.262 mg和莫诺苷0.520 mg的混合对照品溶液，备用。另精密称取饮片粉末0.05 g，共9份，分别按样品中马钱苷含量的80%、100%和120%加入混合对照品溶液0.8、1.0和1.2 mL，各3份，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，测定二者峰面积并计算含量，根据测得量和加入量计算加样回收率。结果显示马钱苷和莫诺苷的平均加样回收率（RSD）分别为100.26%（1.17%）和100.33%（1.24%）。⑥样品测定：取山茱萸三种饮片，粉碎，过三号筛，精密称取各粉末1.0 g，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，按上述色谱条件，测定各样品中马钱苷和莫诺苷的含量。结果见表1。

表1 山茱萸饮片中被测成分的测定结果（n=3，%）

2.3 山茱萸中5-羟甲基糠醛含量测定

①线性关系考察：分别精密吸取对照品储备液1、2、4、6、8、10 mL于10 mL量瓶中，用80%甲醇稀释定容至刻度。分别进样10 μL，测定5-羟甲基糠醛的峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标进行线性回归。结果表明5-羟甲基糠醛在3.480～34.80 μg/mL范围内线性良好，回归方程为y=207.2732x + 10.3948，r=0.999 8。②精密度实验：取5-羟甲基糠醛质量浓度为13.92 μg/mL对照品溶液，连续进样5次，测定5-羟甲基糠醛的峰面积并计算RSD，其RSD值为0.85%，表明仪器精密度良好。③重复性实验：取同一饮片粉末，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，平行实验5份，测定5-羟甲基糠醛的峰面积并计算含量。5-羟甲基糠醛的平均百分含量（RSD）为0.36%（1.32%），表明方法重复性良好。④稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定5-羟甲基糠醛的峰面积，其不同时间峰面积的RSD为1.67%，表明供试品溶液在24 h内稳定。⑤准确度实验：精密称取5-羟甲基糠醛对照品适量，用80%甲醇配制成每1 mL含5-羟甲基糠醛0.178 mg的对照品溶液，备用。另精密称取饮片粉末0.05 g，共9份，按样品中5-羟甲基糠醛含量的80%、100%和120%加入对照品溶液0.8、1.0和1.2 mL，各3份，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，测定峰面积并计算含量，根据测得量和加入量计算加样回收率。结果显示5-羟甲基糠醛的平均加样回收率（RSD）为99.99%（0.73%）。⑥样品测定：取山茱萸三种饮片，粉碎，过三号筛，精密称取各粉末1.0 g，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，按上述色谱条件，测定各样品中5-羟甲基糠醛的含量。结果见表1。

2.4 山茱萸中没食子酸含量测定

①线性关系考察：分别精密吸取对照品储备液0.05、1、2、4、8、10 mL于10 mL量瓶中，用80%甲醇稀释定容至刻度。分别进样10 μL，测定没食子酸的峰面积。以峰面积为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标进行线性回归。结果表明没食子酸在6.340～126.8 μg/mL范围内线性良好，回归方程为y=42.491 5x+ 14.599 8，r=0.999 9。②精密度实验：取没食子酸浓度为50.72 μg/mL的对照品溶液，连续进样5次，测定没食子酸的峰面积并计算RSD，其RSD值为0.75%，表明仪器精密度良好。③重复性实验：取同一饮片粉末，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，平行实验5份，测定没食子酸的峰面积并计算含量。没食子酸的平均百分含量（RSD）为1.32%（0.43%），表明方法重复性良好。④稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定没食子酸的峰面积，其不同时间峰面积的RSD为0.60%，表明供试品溶液在24 h内稳定。⑤准确度实验：精密称取没食子酸对照品适量，用80%甲醇配制成每1 mL含没食子酸0.656 mg的对照品溶液，备用。另精密称取饮片粉末0.05 g，共9份，按样品中没食子酸含量的80%、100%和120%加入对照品溶液0.8、1.0和1.2 mL，各3份，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，测定峰面积并计算含量，根据测得量和加入量计算加样回收率。结果显示没食子酸的平均加样回收率（RSD）为100.02%（0.80%）。⑥样品测定：取山茱萸三种饮片，粉碎，过三号筛，精密称取各粉末1.0 g，按“溶液的配制”项下“1.5.1”制备成供试品溶液，按上述色谱条件，测定各样品中没食子酸的含量。结果见表1。

2.5 山茱萸中多糖含量测定

①线性关系考察：分别精密吸取对照品储备液3、4、5、6、7、8 mL于10 mL量瓶中，用水稀释定容至刻度。精密吸取1.0 mL对照品溶液，于刻度试管中，精密加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀后再精密加入浓硫酸8.0 mL，混匀，沸水浴中加热30 min，迅速取出冰水浴冷却10 min，取出至室温，在480 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标进行线性回归。结果表明葡萄糖在0.058～0.154 mg/mL范围内线性良好，回归方程为y=4.124 8x+0.0198，r=0.9975。②精密度实验：取葡萄糖浓度为0.096 mg/mL的对照品溶液，连续测定5次，测定葡萄糖的吸光度并计算RSD，其RSD值为0.17%，表明仪器精密度良好。③重复性实验：取同一饮片粉末，按“溶液的配制”项下“1.5.4”制备成供试品溶液，平行实验5份，测定供试品溶液的吸光度并计算多糖含量。多糖的平均百分含量（RSD）为4.69%（1.40%），表明方法重复性良好。④稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定供试品溶液的吸光度，其不同时间吸光度的RSD为1.08%，表明供试品溶液在24 h内稳定。⑤准确度实验：精密称取葡萄糖对照品适量，用水配制成每1 mL含葡萄糖117.5 mg的对照品溶液，备用。另精密称取饮片粉末2.5 g，共9份，按样品中多糖含量的80%、100%和120%加入对照品溶液0.8、1.0和1.2 mL，各3份，按“溶液的配制”项下“1.5.4”制备成供试品溶液，测定吸光度并计算含量，根据测得量和加入量计算加样回收率。结果显示多糖的平均加样回收率（RSD）为99.72%（0.34%）。⑥样品测定：取山茱萸三种饮片，粉碎，过三号筛，精密称取各粉末5.0 g，按“溶液的配制”项下“1.5.4”制备成供试品溶液，在480 nm波长处测定吸光度，计算各样品中多糖的含量。结果见表1。

2.6 山茱萸中总黄酮含量测定

①线性关系考察：分别精密吸取对照品储备液3、4、5、6、7、8 mL于10 mL量瓶中，用60%乙醇稀释定容至刻度。精密吸取1.0 mL对照品溶液，于刻度试管中，精密加入5% NaNO21.0 mL，摇匀，5 min后精密加入10% Al（NO3）31.0 mL，摇匀，6 min后精密加入4% NaOH 5.0 mL，摇匀，于500 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标进行线性回归。结果表明芦丁在0.066～0.176 mg/mL范围内线性良好，回归方程为y=4.114 3x-0.0602，r=0.997 7。②精密度实验：取芦丁浓度为0.132 mg/mL的对照品溶液，连续测定5次，测定芦丁的吸光度并计算RSD，其RSD值为0.42%，表明仪器精密度良好。③重复性试验：取同一饮片粉末，按“溶液的配制”项下“1.5.5”制备成供试品溶液，平行试验5份，测定供试品溶液的吸光度并计算总黄酮的含量。总黄酮的平均百分含量（RSD）为5.56%（1.08%），表明方法重复性良好。④稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定供试品溶液的吸光度，其不同时间吸光度的RSD为1.50%，表明供试品溶液在24 h内稳定。⑤准确度实验：精密称取芦丁对照品适量，用60%乙醇配制成每1 mL含葡萄糖27.63 mg的对照品溶液，备用。另精密称取饮片粉末0.5 g，共9份，按样品中多糖含量的80%、100%和120%加入对照品溶液0.8、1.0和1.2 mL，各3份，按“溶液的配制”项下“1.5.5”制备成供试品溶液，测定吸光度并计算含量，根据测得量和加入量计算加样回收率。结果显示多糖的平均加样回收率（RSD）为100.13%（1.29%）。⑥样品测定：取山茱萸三种饮片，粉碎，过三号筛，精密称取各粉末1.0 g，按“溶液的配制”项下1.5.5制备成供试品溶液，在500 nm波长处测定吸光度，计算各样品中总黄酮的含量。结果见表1。

2.7 山茱萸中水溶性皂苷含量测定

①线性关系考察：分别精密吸取对照品储备液0.4、0.8、1.0、1.2、1.6、1.8 mL，水浴挥干溶剂，精密加入5%香草醛-冰醋酸0.5 mL和高氯酸0.8 mL，65 ℃水浴加热20 min，取出置冰水浴中冷却后，加冰醋酸5 mL，摇匀，于580 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，对照品浓度为横坐标进行线性回归。结果表明芦丁在0.064～0.290 mg/mL范围内线性良好，回归方程为y=2.3214x+0.0613，r=0.9987。②精密度实验：取熊果酸浓度为0.132 mg/mL的对照品溶液，连续测定5次，测定熊果酸的吸光度并计算RSD，其RSD值为0.44%，表明仪器精密度良好。③重复性实验：取同一饮片粉末，按“溶液的配制”项下1.5.6制备成供试品溶液，平行实验5份，测定供试品溶液的吸光度并计算水溶性皂苷的含量。水溶性皂苷的平均百分含量（RSD）为1.26%（1.99%），表明方法重复性良好。④稳定性实验：取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h测定供试品溶液的吸光度，其不同时间吸光度的RSD为1.19%，表明供试品溶液在24 h内稳定。⑤准确度实验：精密称取熊果酸对照品适量，用70%乙醇配制成每1 mL含熊果酸12.53 mg的对照品溶液，备用。另精密称取饮片粉末0.5 g，共9份，按样品中水溶性皂苷含量的80%、100%和120%加入对照品溶液0.8、1.0和1.2 mL，各3份，按“溶液的配制”项下1.5.6制备成供试品溶液，测定吸光度并计算含量，根据测得量和加入量计算加样回收率。结果显示水溶性皂苷的平均加样回收率（RSD）为100.43%（1.41%）。⑥样品测定：取山茱萸三种饮片，粉碎，过三号筛，精密称取各粉末1.0 g，按“溶液的配制”项下6制备成供试品溶液，在580 nm波长处测定吸光度，计算各样品中水溶性皂苷的含量。结果见表1。

2.8 山茱萸中总有机酸含量测定

取山茱萸三种饮片，粉碎，过60目筛，各3份，按“溶液的配制”项下1.5.7制备成供试品溶液，每份再精密吸取25 mL，置150 mL锥形瓶中，加1%酚酞指示剂2滴，用0.1 mol/L的NaOH标准液滴定，滴至微红且30 s不褪色，记录NaOH标准液的用量。依据下面的公式计算山茱萸总有机酸含量。结果见表1。总有机酸含量%=c×V×K/（m ×25/250）×100%（V：氢氧化钠标准液体积，c：氢氧化钠标准液浓度，m：样品质量，K：换算成主要酸的系数）。

3 讨 论

山茱萸属于补益药物，临床及制剂多用其炮制品。山茱萸中以马钱苷和莫诺苷为代表的水溶性苷类，主要与其免疫调节的作用相关[7,8]；山茱萸生品和制品多糖均能明显提高免疫低下小鼠的非特异性免疫功能、体液免疫功能和细胞免疫功能[9]；山茱萸中以没食子酸为代表的有机酸多具有免疫调节和抗肝损伤作用等[10]。本实验研究发现山茱萸经蒸制后产生一新成分5-羟甲基糠醛，其对CCl4肝损伤模型及血管内皮细胞具有良好的保护作用[11]，其他一些补益药蒸制后也会产生了5-羟甲基糠醛[12,13]，因此推测5-羟甲基糠醛是补益类药物经炮制后的一个共性成分，在饮片的质量控制中建立该成分的含量测定，可以为研究山茱萸炮制机制提供新思路，而其产生的因素有待于进一步研究。故研究山茱萸中主要效应物质在炮制过程中的变化，对山茱萸的炮制工艺、质量控制及药理药效研究有积极作用。

根据文献，本研究比较了不同浓度甲醇（60%、80%、100%）三种溶剂对马钱苷、莫诺苷、5-羟甲基糠醛和没食子酸的提取效率，结果显示不同溶剂提取效率为80%甲醇＞甲醇＞60%甲醇，故以80%甲醇作为提取溶剂；考察了超声提取法和回流提取法，结果显示超声提取效率和回流提取效率差别不大，但超声提取更简便易行；同时考察了超声时间（15、25、35 min）对提取效率的影响，结果显示超声提取时间25与35 min明显高于15 min，然25与35 min之间没有差别。所以本实验选择以80%甲醇为提取溶剂，超声提取25 min对被测成分进行提取。

在研究过程中，考察了多个色谱条件，希望在同一色谱条件下，能够同时对四种物质进行含量测定，然而实验中发现，所有考察的色谱条件，部分成分的分离度不够，相互干扰测定，或者山茱萸中其他成分对其有干扰，故本研究选择了3个不同色谱条件进行含量测定，所选色谱条件均达到了含量测定的要求。

实验结果表明，山茱萸经炮制后其中主要几类有效成分含量都有不同程度的变化，并且除莫诺苷，高压蒸制品所测成分的含量均略高于常压蒸制品，但无显著性差异，说明从化学成分方面分析，山茱萸高压蒸制工艺是科学可行的，而且高压蒸制过程中蒸制参数可以控制，生产效率能够得到很大的提高。本实验研究可以为制定山茱萸最佳炮制工艺提供科学的依据，确保酒蒸山茱萸的质量和临床应用的安全，同时为其及炮制品的药效研究提供物质基础。炮制前后山茱萸中其他成分含量的变化，尚待进一步实验研究。

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[13] 杨云,许闽,冯云霞.黄精不同炮制品中5-羟甲基糠醛的含量测定[J].中药材,2008,31(1):17.

Influence of Processed on Active Substances in Cornus Officinalis Evaluated by Multi-components Analysis

SONG Yan1, MAO Chun-qin2, ZHU Jun-jie1, ZHE Yun2, XU Jin-guo1,CHI Yu-mi2, LU Tu-lin2
(1 Shanghai Huayu Pharmaceutical Company Limited, Shanghai 200237, China; 2 Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China)

Objective To determine and analyze the contents of loginan, morroniside, 5-hydroxymethyl furfural, gallic acid, polysaccharide, flavonooids, water-soluble saponins and organic acid in cornus officinalis and its different processed products to evaluate the influence of processed on active substances in cornus officinalis. Methods The contents of loginan, morroniside, 5-Hydroxymethyl furfural and gallic acid in different processed products of cornus officinalis were determined by HPLC. The contents of polysaccharide, flavonooids, water-soluble saponins in different processed products of cornus officinalis were determined by colorimetry. The contents of organic acid in different processed products of cornus officinalis were determined by acid-base titration. Results There were different changes of the components in cornus officinalis processed by different methods. The contents of the determined components in high-pressure products of Cornus officinalis were slightly higher than them in atmospheric-pressure products of cornus officinalis except morroniside, but there were not significant difference. Conculusion The high-pressure process is better than the atmospheric-pressure process. The results can provide a scientific basis for the best processing technology of cornus officinalis.

Cornus officinalis; Processing; Multi-components analysis; Effector substance; Loginan; Chromatography

R286

B

1671-8194（2014）20-0023-04

*通讯作者