连麦通淋颗粒中连翘苷的含量测定

宋 岚，邝 明，陈 菊

（1.泸州医学院附属中医院，四川 泸州646000；2.四川省泸州市食品药品检验所，四川 泸州646000）

连麦通淋颗粒由瞿麦、萹蓄、连翘、地黄、栀子、牡丹皮、川木通、车前子、蒲公英、白茅根等10味药组方，具有清热解毒、利湿通淋等作用，用于下焦湿热所致急慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎等泌尿系统感染。原标准仅对栀子的有效成分栀子苷、连翘的有效成分连翘苷进行了薄层鉴别。连翘苷为主药连翘的主要有效成分，故以连翘苷作为测定指标，建立了测定连麦通淋颗粒中主要有效成分连翘苷含量的高效液相色谱法，以期为进一步完善该制剂的质量控制标准提供依据。

1 仪器与试药

2695型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；2489型紫外/可见光检测器；XS205DU型电子天平（梅特勒－托利多公司）；MJ－600型超声波清洗仪（无锡市美洁超声设备有限公司）。连翘苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110821－200711，供含量测定用，含量为98.9%）；连麦通淋颗粒（泸州医学院附属中医院，批号为20120628，20120629，20120727，20121018，20121211）；甲醇为色谱纯(经0.45μm滤膜过滤)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－水（20:80）；检测波长：277nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按连翘苷峰计算应不低于3000。在此条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取连翘苷对照品12mg，置200mL容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含30μg的对照品溶液。取本品10袋，研细，取约2.0g，精密称定，置锥形瓶中，用甲醇加热回流2次，每次25mL，每次30min，滤过，残渣及滤器用甲醇15mL分次洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加稀乙醇10mL使溶解，加在中性氧化铝柱（100～200目，3g，内径为1cm）上，用稀乙醇70mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用50%甲醇溶解，转移至25mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方取缺连翘的阴性样品2.0g，按上述供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取2.2项下3种溶液各10μL，按拟订色谱条件进样，记录色谱图，见图1。可见，在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液色谱具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液色谱则无此峰，说明样品中其他成分对连翘苷的测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密量取对照品贮备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，分别置10mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀。分别吸取上述溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值。以进样量（X，μg）为横坐标、峰面积积分值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程Y＝6659X＋1406.6，r＝0.9997（n＝5）。结果表明，连翘苷进样量在6～36μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，连续进样5次。结果连翘苷峰面积的RSD为0.3%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液（批号为20121211），分别于0，1，3，6，10h时各进样10μL，测定连翘苷峰面积。结果的RSD为0.4%（n＝5），表明供试品溶液在配制后10h内基本稳定。

重复性试验：取同一批（批号为20121211）样品，依法平行制备6份供试品溶液，依法测定。结果连翘苷的平均含量为8.00mg/g，RSD为1.0%（n＝6），表明方法重复性较好。

加样回收试验：取已知含量的同一批（批号为20121211）样品（含连翘苷8.05mg/g）6份，分别精密加入对照品贮备液适量，依法制备所需溶液，并按拟订条件进行测定。结果见表1。

2.4 样品含量测定

按拟订的含量测定方法测定5批样品，以外标法计算样品中连翘苷的含量。结果批号为20120628，20120629，20120727，20121018，20121211的样品含量分别为3.857，3.621，3.158，3.255，3.567mg/g。

表1 连翘苷加样回收试验结果（n＝6）

3 讨论

供试品溶液的制备时，比较了加热回流法[2]、超声提取法、甲醇加热回流过中性氧化铝柱用稀乙醇洗脱法[3]，结果显示以甲醇加热回流过中性氧化铝柱用稀乙醇洗脱法效果最理想。对流动相的组成及比例进行了反复试验，结果显示以乙腈－水（20:80）为流动相[4]，分离效果较好。本方法操作简便，结果准确，重现性好，可用于连麦通淋颗粒的质量控制。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中国人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：159－160.

[2]何春玲，丘明明.HPLC法测定病毒清口服液中连翘苷的含量[J].中国药房，2012，23（15）：1413－1414.

[3]孔 涛，张月芹.高效液相色谱法测定芩兰口服液中连翘苷的含量[J].中国药业，2012，21（22）：52－53.

[4]雷建林，李艳桃，聂会生，等.HPLC法测定不同产地连翘药材中连翘苷的含量[J].中华中医药学刊，2012，30（1）：202－204.