前列腺癌组织BSP表达与骨转移的相关性探讨

余书勇，朱其聪，毛高才，吕 扬，王亚辉，杨 琳

（中国人民解放军第187医院肿瘤中心1、病理科2、检验科3，海南 海口 571159）

前列腺癌组织BSP表达与骨转移的相关性探讨

余书勇1，朱其聪1，毛高才2，吕 扬3，王亚辉1，杨 琳1

（中国人民解放军第187医院肿瘤中心1、病理科2、检验科3，海南 海口 571159）

目的探讨前列腺癌(PCa)组织中骨唾液酸蛋白(BSP)的表达与骨转移的关系。方法收集2006年1月1日至2013年6月30日间我院收治的PCa患者68例，以良性前列腺增生（BPH）患者22例作为对照组，采用免疫组织化学SP法检测PCa或前列腺增生组织BSP表达，并结合肿瘤的病理学行为和临床随访资料进行分析。结果PCa组织的BSP表达阳性率为76.47%，显著高于BPH组织的13.64%，差异有统计学意义(P＜0.001)。PCa组织的BSP表达与肿瘤病理分期(χ2=9.338，P=0.009)、远处转移(χ2=6.38，P=0.012)密切相关，而与患者年龄(χ2= 0.593，P=0.441)、病理分级(χ2=0.057，P=0.972)、淋巴结转移(χ2=0.126，P=0.722)均无相关。52例BSP表达阳性的PCa患者术前血清总前列腺特异性抗原(tPSA)含量为(69.06±25.52)µg/L，16例BSP阴性患者血清tPSA含量为(38.00±21.64)µg/L，两者差异有统计学意义(F=19.355，P＜0.001)。BSP表达阳性的PCa患者骨转移发生率(71.15%，37/52)高于BSP阴性患者(25.0%，4/16)(χ2=10.887，P=0.001)。结论前列腺癌BSP表达与其骨转移密切相关，其有可能作为预测PCa骨转移的标志物。

PCa；骨唾液酸蛋白；骨转移；免疫组织化学

前列腺癌(Prostate cancer，PCa)在疾病发展过程中有65%～75%的患者将发生骨转移，但有约80%的骨转移患者因无临床表现而影响了早期诊断。目前诊断PCa骨转移主要是根据影像学检查，缺乏有效的骨转移生化标志物。近年来，骨唾液酸蛋白(Bone sialoprotein，BSP)作为新的骨代谢标志物在骨转移癌早期诊断中得到广泛研究。本研究旨在探讨BSP在PCa中的表达与骨转移的关系，以期对高危人群予以预防性治疗，防治骨转移的发生，从而降低PCa骨转移的发生率，提高患者的生活质量。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2006年1月1日至2013年6月30日间我院前列腺根治手术摘除或者经尿道前列腺电切术切除，经病理检查证实为PCa的蜡块标本68例。患者均为初治者，术前未经内分泌治疗或放疗，年龄46～81岁，中位年龄65岁。病理分级采用2005年国际泌尿病理协会修订的Gleason分级系统，其中分化良好癌16例，中等分化癌40例，分化不良癌12例。病理分期按国际TNM(AJCC，2002年)分期标准，其中pT2 37例，pT3 21例，pT4 10例。选取我院同期手术切除的良性前列腺增生(Benign prostatic yperplasia，BPH)组织蜡块标本22例作为对照，患者年龄47～75岁，中位年龄64岁。68例PCa患者术后随访6个月～6年，有淋巴结转移45例，远处转移47例；其中骨转移41例，无骨转移27例。

1.2 主要仪器与试剂 主要试剂：兔抗人单克隆BSP抗体(浓缩液)购自英国Abcam公司，即用型SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司，浓缩型DAB显色试剂盒(20X)购自福州迈新生物技术开发有限公司。主要仪器：OlympysCX31光学显微镜，日本Olympys公司产品。

1.3 方法

1.3.1 BSP检测实验步骤 采用SP二步法进行BSP的免疫组织化学染色。石蜡切片常规脱蜡至水，3%H2O2室温孵育20 min，以消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗5 min×2次，放入盛有枸橼酸盐缓冲液(即抗原修复液)的抗原修复盒中，微波炉内进行抗原修复20 min，冷却至室温。PBS冲洗5 min×2次。滴加兔抗人单克隆BSP抗体(一抗)，工作浓度：l: 300，4℃过夜；次日PBS冲洗，5 min×3次；滴加即用型酶标羊抗兔IgG聚合物(二抗)，37℃孵育25 min；PBS冲洗，5 min×3次。DAB显色剂(工作液)显色。自来水充分冲洗，复染，封片。对照染色：以已知BSP的阳性切片作为对照，以0.0l mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为每次染色的阴性对照。

1.3.2 血清总前列腺特异性抗原(tPSA)测定 清晨空腹采集外周血，分离血清置-20℃保存待测。采用电化学发光法检测PCa患者术前血清tPSA的含量。tPSA试剂盒购自德国Roche Diagnostic GmbH公司，按说明书进行操作。

1.4 研究方法 采用实验法来探讨前列腺癌BSP表达及其与骨转移的相关性。

1.5 结果判定 每张切片观察5个高倍视野，BSP表达阳性细胞染色为胞浆明显棕黄或棕褐色，阳性细胞数≤25%为阴性；25%～80%为弱阳性(+)；≥80%为强阳性(++)。

1.6 统计学方法 采用SPSS10.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。计量资料以均数±标准差()表示，采用方差分析(One-Way ANOVA)进行多组间比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BSP在PCa与BPH组织中的表达情况 68例PCa石蜡标本切片后，常规SP法免疫组织化学染色发现52例(76.47%)标本均有+～++的阳性染色，染色部位主要位于癌细胞胞浆，大多数为均质性(见图1)，也有少数为颗粒状(见图2)，而周边正常腺组织无或低表达BSP(见图3)。22例BPH患者标本中有3例(13.64%)呈低表达BSP，其余均无表达BSP。BSP表达率在PCa与BPH间比较差异有统计学意义(χ2= 27.614，P＜0.001)。

图3 BSP染色呈阴性（SP×400）

2.2 PCa组织中BSP的表达及其与年龄、病理分级、病理分期、转移、血清tPSA的关系 68例PCa组织中，BSP表达率与年龄、病理分级、有无淋巴结转移无关(P＞0.05)；而与病理分期、远处转移有关(P＜ 0.05)，见表1。52例BSP阳性表达的PCa患者术前血清tPSA含量为(69.06±25.52)µg/L，16例BSP阴性患者血清tPSA含量为(38.00±21.64)µg/L，两者差异有统计学意义(F=19.355，P＜0.001)。

表1 BSP在PCa组织中的表达及其与临床有关参数的相关性（例）

2.3 BSP表达与骨转移的关系 52例BSP表达阳性的PCa患者骨转移发生率为71.15%，16例BSP阴性患者骨转移发生率为25.0%，两者差异有统计学意义(χ2=10.887，P=0.001)。

3 讨论

PCa是最易发生骨转移的恶性肿瘤之一，死于PCa的患者中85%～100%合并骨转移。据统计局限性无转移的PCa患者90%生存期可超过10年，而发生骨转移后生存期平均不超过3年。故探寻肿瘤骨转移的生物标记物，对骨转移进行早期诊断、早期治疗是目前研究的方向。PSA已被广泛应用于PCa的早期筛查[1]，每年普查1次血清PSA和直肠指检，使PCa患者的转移率下降了75%，同时也提高了隐匿性PCa的发现率[2]，尽管这种简便的PCa筛查方法有其不可替代的优越性，也存在很多不足，需要辨证考虑其临床实际意义。临床上若能结合其他标志物检测，对PCa诊疗更具有指导意义。目前，国内外研究较多的其他标志物中，BSP最可能成为一种骨转移的标志物。

BSP是细胞外基质中的一种酸性糖蛋白，主要由成骨细胞、破骨细胞及软骨细胞合成，其分布相对局限，主要在矿化组织特异性表达[3]，在胎盘滋养层细胞、血小板和多种骨转移瘤中也能检测到BSP的表达。正常人群血清BSP浓度为2～24 ng/ml[4]。BSP是通过与整合素家族中受体识别，介导细胞粘附和细胞迁移作用[5-6]。整合素是BSP的主要受体，是一类细胞膜表面的糖蛋白受体家族分子。BSP也是一种重要的细胞因子，在介导细胞扩散、移动，与基质间的粘附、骨组织矿化与重建、免疫调节、信号转导等过程中发挥重要作用[7-8]。

自1994年Bellahcène等[9]首次阐述了BSP在人乳腺癌转移组织中表达以来，许多临床及试验研究均证实，BSP与肿瘤的发生及侵袭转移密切相关[10]，其在乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、多发性骨髓瘤、黑色素瘤等肿瘤组织中高表达，而且在乳腺癌或PCa的骨转移肿瘤中BSP表达显著高于其他内脏转移肿瘤[11]。BSP在骨转移中起着重要作用，其可调节破骨细胞粘附能力，激活破骨细胞功能，促进肿瘤细胞向骨组织侵袭、迁移、粘附和增殖。血清BSP含量可反映破骨细胞活性和骨吸收过程。国内何建军等[12]研究发现PCa骨转移患者外周血清中BSP含量明显高于无骨转移者，通过测定血清BSP含量用来诊断骨转移的特异度和灵敏度分为72.8%和71.12%；邓立春等[13]也报道BSP诊断骨转移的特异性和敏感度分别为71.4%和84.20%。国外Jain等[14]研究102例PCa患者在晚期阶段血清BSP浓度显著增高。因此，BSP被认为是一种可用于评价骨转移的早期、独立的标志物，而且，在众多的骨转移标志物中，BSP是最有希望成为靶向治疗的骨转移标志物。

本研究发现大多数PCa高表达BSP，其阳性率为76.47%，且BSP表达与PCa病理分期、术前tPSA、周围淋巴结的转移、远处转移显著相关，而与患者年龄、病理类型均无相关。BSP表达阳性PCa患者，术后骨转移发生率显著增高，这与国内外研究结果一致。

综上所述，BSP在PCa中高表达，其在PCa的发生、发展、临床进展和浸润转移的病理过程中起着重要作用，尤其与骨转移密切相关，有助于PCa的诊断、恶性程度的评估，并能为临床医生判断患者预后提供重要的线索，可作为预测PCa骨转移的标志物，但其价值尚待扩大样本量进行更进一步的探索。

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Association between the BSP expression and bone metastasis in prostate cancer tissue.

YU Shu-yong1,ZHU Qi-cong1,MAO Gao-cai2,LV Yang3,WANG Ya-hui1,YANG Lin1.Department of Oncology1,Department of Pathology2, Department of Clinical Laboratory3,the 187thHospital of Chinese PLA,Haikou 571159,Hainan,CHINA

ObjectiveTo explore the association between the expression of bone sialoprotein(BSP)and bone metastasis in prostate cancer tissue.MethodsSixty-eight patients with prostate cancer(PCa)between January 1,2006 and June 30,2013 in our hospital were selected as the experimental group,and 22 cases of patients with benign prostatic hyperplasia(BPH)as the control group.Immunohistochemical SP method was used to detect the BSP expression of PCa or BPH tissues.Analysis was conducted by combining information of pathological behavior and clinical follow-up survey.ResultsThe expressing rate of BSP in prostate cancer tissues(76.47%)was higher than that in BPH tissues(13.64%),and the difference was statistically significant(P＜0.001).The BSP expression in prostate cancer tissues was closely related to the tumor pathological stage(χ2=9.338,P=0.009),distant metastasis(χ2=6.38, P=0.012),while no association was found between BSP expression and age(χ2=0.593,µ=0.441),pathological grade(χ2= 0.057,P=0.972)and lymph node metastasis(χ2=0.126,P=0.722).Before surgery,the serum tPSA concentration of 52 BSP positive cases was higher than that of 16 BSP negative cases,and the difference was statistically significant [(69.06±25.52)µg/L vs(38.00±21.64)µg/L,F=19.355,P＜0.001].The bone metastases rate of BSP positive was significantly higher than that of BSP negative[(71.15%,37/52)vs(25.0%,4/16),(χ2=10.887,P=0.001)].ConclusionThe expression of BSP is closely related to bone metastasis in prostatic cancer.It might be a potential indicator for the prediction of bone metastasis in prostate cancer.

Prostate cancer;Bone sialoprotein(BSP);Bone metastasis;Immunohistochemistry

R737.25

A

1003—6350（2014）23—3461—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.23.1353

2014-05-15)

海南省卫生基金资助项目（编号：琼卫2011-98号）

朱其聪。E-mail：zhuqicong1234@163.com