高效液相色谱法测定盐酸阿考替胺片的含量

葛莉莉，丁洪亮

宜兴市人民医院，江苏宜兴 214200

高效液相色谱法测定盐酸阿考替胺片的含量

葛莉莉，丁洪亮*

宜兴市人民医院，江苏宜兴 214200

目的：建立盐酸阿考替胺片含量测定的高效液相色谱方法。方法：采用岛津C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；以甲醇-磷酸盐缓冲液（60∶40）为流动相；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：280 nm。结果：盐酸阿考替胺的线性范围为20～200 μg·mL-1，r=0.9999，平均回收率为99.8%，RSD为0.67%（n=9）。结论：该方法简便灵敏、结果准确，适用于盐酸阿考替胺片的质量控制。

盐酸阿考替胺片；HPLC法；含量测定

盐酸阿考替胺[1]（acotiamide，商品名Acofide）是全球首个功能性消化不良（FD）治疗药，临床用于餐后饱胀、上腹胀痛、早期腹胀等功能性消化不良疾病的治疗，2013年6月在日本率先上市。有关该药的含量测定方法国内未见报道，本研究采用高效液相色谱法测定盐酸阿考替胺片（结构式见图1）含量，旨在为药物的质量控制提供有效的检测方法。

图1 盐酸阿考替安结构式

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津20AT高效液相色谱仪（SPD-20A紫外检测器，LCsolution工作站）；岛津UV-1800紫外可见分光光度计；赛多利斯BT125D电子天平。

1.2 试药

盐酸阿考替胺对照品（批号：20131101，纯度：99.8%）,盐酸阿考替胺片（批号：20140101、20140102、20140103，规格100mg），均为南京天翔医药科技有限公司提供；盐酸阿考替胺片（批号：D135，规格：100 mg）为Astellas制药与Zeria药业生产。

甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Shimadzu C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-磷酸盐缓冲液（10 mmol·L-1磷酸二氢钠溶液，用磷酸调节pH值至3.0）（60∶40）；检测波长：280 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量10 μL。

2.2 方法

取本品10片，称定，研细，混合均匀，精密称取细粉适量（相当于盐酸阿考替胺10 mg），置100 mL量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取其10 μL注入色谱仪，记录色谱图。另取盐酸阿考替胺对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释成浓度为每毫升含0.1 mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算含量，见图2。

图2 盐酸阿考替胺片HPLC色谱图

2.3 辅料干扰试验

按照处方比例称取辅料适量，置100 mL量瓶中，加流动相至刻度，振摇，滤过，取续滤液10 μL注入色谱仪，记录色谱图。结果表明空白辅料不干扰盐酸阿考替胺含量测定。

2.4 线性范围考察

精密称取盐酸阿考替胺对照品20 mg，加流动相溶解,稀释成每毫升含0.2 mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液1、2、4、6、8、10 mL，分别置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，在上述“色谱条件”下测定，分别精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以盐酸阿考替胺峰面积（A）与浓度（C）进行线性回归，得回归方程：A= 20583C-9113（r=0．9999）。结果表明，本品在20～200 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。

2.5 进样精密度试验

精密量取盐酸阿考替胺对照品储备液5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，重复进样6次，结果以盐酸阿考替胺峰面积计，RSD为0．23%。

2.6 重复性试验

取20140101批样品，配制6份供试品溶液，分别测定盐酸阿考替胺的含量，平均标示量为99．6%，RSD为0．61%。

2.7 回收率试验

取盐酸阿考替胺对照品适量，精密称定，并按处方比例分别加入适量的辅料，用流动相分别制成低、中、高3种浓度（含主成分分别为标示量的80%、100%、120%）各3份，照“样品测定”项下的方法测定并计算回收率。平均回收率为99．8%，RSD为0．63%。

2.8 稳定性试验

取20140101批样品，配制供试品溶液，在室温下分别放置0、2、4、6、8 h测定峰面积，结果RSD为0．45%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.9 样品测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入色谱仪测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果见表1。

表1 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取本品加流动相制成每毫升约含20 μg的溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描，绘制紫外吸收光谱图，表明本品在280 nm处有最大吸收，因此选择280 nm为样品的检测波长，见图3。

图3 盐酸阿考替胺紫外吸收图谱

3.2 流动相的选择

选用甲醇-水、乙睛-水等体系，但效果均不理想，参考国外文献[2-3]，对流动相进行筛选，最终选择甲醇-磷酸盐缓冲液（10 mmol·L-1磷酸二氢钠溶液，用磷酸调节pH值至3．0）（60∶40）为流动相；该条件下，盐酸阿考替胺峰形、柱效和分离度均良好。

[1] 陈琳萍．首个功能性消化不良治疗药阿考替胺的研究进展[J]．上海医药，2014，35（3）：55-7．

[2] Yoshii K,Hirayama M,Nakamura T,et al．Mechanism fordistributionofacotiamide,anovel gastroprokinetic agent for the treatment of functional dyspepsia,in rat stomach[J]．J Pharm Sci,2011,100(11): 4965-73．

[3] Kawachi M,Matsunaga Y,Tanaka T,et al．Acotiamide hydrochloride(Z-338)enhances gastric motility and emptying by inhibiting acetylcholinesterase activity in rats[J]．Eur J Pharmacol,666(2011):218-25．

Determination of the Content of Acofide Tablets by HPLC

GE Li-li,DING Hong-liang*
Yixing People's Hospital,Jiangsu Yixing 214200,Jiangsu,China

Objective：To establish an HPLC method for the determination of Acofide tablets．Methods：A Shimadzu C18column(150 mm×4．6 mm,5 μm)was selected．The mobile phase consisted of methanolphosphate buffered solution(60∶40)．The flow rate was 1．0 mL·min-1and the detection wavelength was 280 nm．Results：The calibration curve was linear in the range of 20～2000 μg·mL-1(r=0．9999)．The average recovery was 99．8%,RSD=0．67%(n=9)．Conclusion：The method is accurate and reliable,and can be used for quality control of Acofide tablets．．

Acotiamide Tablets;HPLC;Content Determination

R927.2

A

1673-7806（2014）06-514-02

葛莉莉，女，主管药师 Tel:0510-87921293

*通讯作者 丁洪亮，男，主任药师 Tel:0510-87921020

2014-08-07

2014-08-22