高致病性禽流感灭活疫苗免疫抗体消长规律研究

韩庆安等

高致病性禽流感是由高致病性禽流感病毒引起的对养禽业危害极其严重的一类动物疫病。该病的暴发流行，不仅沉重打击养禽业的发展，而且对人类的生命安全也造成了极大的危害，已经引起了全世界各国的密切关注。目前，我国对H5亚型高致病性禽流感实行强制免疫政策，但随着疫苗免疫的多年开展，H5亚型禽流感病毒也在不断发生着变异。为了有效保护禽群不受禽流感病毒的侵害，禽流感国家参考实验室适时推出新的重组禽流感H5亚型疫苗。2011年底，河北省引进重组禽流感H5N1（Re-4株+Re-6株）二价疫苗，为了摸清其免疫原性，从而制定出更加合理的免疫程序推荐给广大的养禽户，我们于2012年初开展了该疫苗免疫抗体消长规律研究，现将结果汇报如下，供大家参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗和检测试剂

重组禽流感H5N1（Re-4株+Re-6株）二价疫苗，H5亚型禽流感Re-4株、Re-6株HI标准抗原以及相应的标准阳性血清，均由哈尔滨维科生物技术开发公司生产。

1.1.2 实验动物

保定徐水某规模蛋鸡场，1日龄海兰褐雏鸡2000只。

1.2 方法

1.2.1 试验设计

定期检测母源抗体，当母源抗体降至4lg2以下，群体抗体合格率低于国家规定的70%时进行首次免疫，免疫剂量为0.3 mL/羽，颈部皮下注射；首免后，根据免疫抗体监测结果，确定二免日龄，免疫剂量为0.5 mL/羽，胸部肌肉注射。定期采集血样，每次采30份，分离血清进行抗体检测。

1.2.2 检测方法

按照国标《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936-2003）中血凝和血凝抑制试验（HA-HI）进行。

2 结果

2.1 母源抗体监测结果

表1结果显示，鸡母源抗体可持续2周左右。雏鸡到10日龄时，其群体抗体合格率已经接近70%，根据抗体下降速度进行推算，鸡群首免日龄定在12日龄。

2.2 首免后免疫抗体监测结果

检测结果表明，首免后直到37日龄，H5N1（Re-6株）抗体始终不高，群体免疫合格率一直低于70%；H5N1（Re-4株）抗体平均值和群体合格率虽然始终符合国家规定的要求，但37日龄时，其抗体离散度达到63.35%，抗体值极其不整齐，故将鸡群二免日龄定在40日龄。结果见表2。

2.3 二免后免疫抗体监测结果

表3和表4结果表明，到130日龄，鸡群其免疫抗体值依然很高，免疫保护率较好。但考虑到抗体离散度值及鸡群开产后再进行疫苗免疫影响产蛋，建议鸡场在120～130日龄时进行第三次免疫。开产前鸡群禽流感抗体消长情况见图1。

3 小结与讨论

由于H5N1（Re-6株）是新开发的重组禽流感疫苗株，故未进行母源抗体检测。正因为其是新疫苗，鸡群机体对其免疫识别较差，故在整个试验期，其免疫抗体值始终低于Re-4株的抗体值。

监测结果表明，新饲养的鸡群经过二次免疫后，到开产前（130日龄），其免疫抗体值依然维持在较高水平，但考虑到鸡群开产后再进行疫苗免疫影响产蛋，建议鸡场在120～130日龄时进行第三次免疫。

抗体离散度值是反映抗体整齐度的指标。离散度值越高，抗体越不整齐，反之越整齐。在评价某一阶段鸡群禽流感免疫效果时，单纯凭借群体免疫合格率来分析是片面和不准确的，只有将抗体离散度值和群体免疫合格率二者结合起来综合分析，其评价的结果才能比较准确。通常，当抗体离散度值超过60%时，即使群体免疫合格率符合国家规定的要求，鸡群也必须立即进行疫苗免疫，才能确保其得到有效保护。

本次试验只对开产前鸡群禽流感免疫抗体消长情况进行了研究，至于鸡群开产后疫苗免疫保护期如何，我们又单独进行了试验研究。2012年5-12月份，我们对当年河北省中标的9个厂家生产3种不同类型14个批次禽流感疫苗在产蛋后鸡群中进行免疫效果的比对试验，结果其免疫保护期为4～6个月。

自2004年H5亚型高致病性禽流感在我国爆发流行以来，我国对其实行强制免疫政策。但随着疫苗免疫的逐年开展，禽流感病毒也在不断发生着变异。对此，国家也不断推出新型毒株疫苗来应对。截至2011年底，国家陆续推出了禽流感H5N1（N28株）灭活疫苗、重组禽流感H5N1（Re-1株）灭活疫苗、重组禽流感H5N1（Re-4株）灭活疫苗、重组禽流感H5N1（Re-5株）灭活疫苗、重组禽流感H5N1（Re-6株）灭活疫苗、重组禽流感H5N1（Re-4株+Re-5株）二价灭活疫苗、重组禽流感H5N1（Re-4株+Re-6株）二价灭活疫苗以及相应的禽流感H5+H9二联灭活苗。每种疫苗在河北投入使用前或使用初期，我们均对其免疫效果进行评价，试验结果表明，其在鸡群的首免和二免时间相差不大，免疫保护期也基本一致。虽然H9禽流感对雏鸡的致病力不强，但对青年鸡的危害较大，并且严重影响蛋鸡的产蛋率，故我们也对其免疫效果进行了多次评价。经过多年的试验数据积累，考虑到地方高致病性禽流感病毒主导流行株，结合鸡场的定位及经济效益，我们分别对蛋（肉）种鸡场和商品蛋鸡场制定了参考免疫程序。

蛋（肉）种鸡：7～14日龄注射禽流感H5N1灭活疫苗，35～42日龄注射禽流感H5N1灭活疫苗和H9灭活疫苗，75～80日龄时注射禽流感H9灭活苗，120～130日龄注射禽流感H5N1和H9灭活疫苗，以后每隔4～6个月注射一次禽流感H5N1和H9灭活疫苗。

商品蛋鸡：7～14日龄注射禽流感H5N1灭活疫苗，35～42日龄注射禽流感H5N1灭活疫苗，75～80日龄时注射禽流感H5+H9二联灭活疫，120～130日龄注射禽流感H5N1和H5～H9灭活疫苗，以后每隔4～6个月注射一次禽流感H5N1灭活疫苗。（编辑：郭远）