薄层扫描法测定栀子中栀子苷的含量

彭金年 程庚金生 张付远 李丹丹

摘要[目的]建立利用薄层扫描法测定栀子中栀子苷含量的方法。[方法]样品经超声提取，采用硅胶G高效薄层板条带点样，以氯仿-乙酸乙酯-无水甲醇（3∶2∶1，V/V/V）为展开剂上行展开，在240 nm波长进行扫描检测。[结果]在0.240～0.640 μg/ml范围内，栀子苷浓度与峰面积呈良好线性关系，相关系数r=0.999 54，平均回收率为100.45%，RSD为1.69%。[结论]该方法简便、准确、重复性好，可用于赣南野生黄栀子中栀子苷的含量测定。

关键词薄层扫描法；栀子（FRUCTUS GARDENIAE）；栀子苷

中图分类号S567.2文献标识码A文章编号0517-6611（2014）01-00061-02

作者简介彭金年（1976- ），女，湖北洪湖人，副教授，博士，从事中药成分与活性研究，Email：pengjinnian2007@126.com。

收稿日期20131210栀子（FRUCTUS GARDENIAE）为茜草科（Rubiaceae）植物栀子（Gardenia jasminoides Ellis）的干燥成熟果实[1]，具有泻火除烦、清热利尿和凉血解毒作用，主治热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热出衄、目赤肿痛、火毒疮伤和外治扭挫伤痛等[2]。栀子中主含栀子苷（Geniposide）[3]，具有利胆和降压作用。栀子在许多中成药配伍中均有应用，如黄连解毒汤、龙胆泻肝丸、复方栀子冲剂、清淋冲剂、栀子金花丸、牛黄上清软胶囊、三子散、金花消痤胶囊、石淋止痛剂、六味木香胶囊和小儿退热软膏等[4-6]。

在栀子及含栀子制剂分析中，常以栀子苷进行质量控制和含量测定。近些年来，国内外对栀子中栀子苷含测的研究颇多[7-8]，但有关采用高效薄层色谱法测定栀子中栀子苷含量的研究鲜有报道。笔者采用高效薄层色谱单波长扫描法，建立一种操作方便、快捷，结果准确，稳定性好栀子中栀子苷含量测定的新方法，以期为栀子中栀子苷的质量控制和含量测定提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象。栀子，于2012年11月中旬采摘于赣南医学院黄金校区，经赣南医学院中药教研室老师鉴定为茜草科植物黄栀子果实（赣南野生黄栀子）。

1.1.2主要仪器。AB135S型电子分析天平，购自瑞士梅特勒-托利多集团；DZF605真空干燥箱，购自上海一恒科学仪器有限公司；数控超声波清洗机，购自上海声彦超声波仪器有限公司；WS701远红外快速干燥器，购自上海景凯科学仪器有限公司；ADS4C自动点样仪、ADC2C自动展开仪和Scanner3薄层扫描仪，购自瑞士CAMAG。

1.1.3主要试剂。栀子苷对照品，购自北京世纪赛科生物技术有限公司，生产批号为MUST12041808；硅胶G高薄层板（10 cm×10 cm），由青岛海洋化工厂分厂生产；氯仿，乙酸乙酯和甲醇等试剂均为分析纯，市售。

1.2方法

1.2.1对照品溶液制备。精密称取栀子苷2.00 mg，置于25 ml容量瓶中，用无水甲醇定容至刻度，作为对照品溶液。

1.2.2供试品溶液制备。取试验材料，研碎成粉末，远红外干燥至恒重，精密称取干燥、粉碎的栀子粉末0.502 4 g，置具塞锥形瓶中，50 ml加入无水甲醇，超声提取40 min，滤过，取滤液定容至100 ml，作为供试品溶液。

1.2.3薄层层析及薄层扫描条件。硅胶G高效薄层板（10 cm×10 cm），试验前置电热干燥箱中110 ℃活化40 min，在干燥环境中放冷，备用。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇（3∶2∶1，V/V/V）为展开剂上行展开70 mm；波长扫描240 nm；狭缝宽度为6.0 mm×0.3 mm。

1.2.4方法学考察。（1）线性关系的考察。用卡玛全自动点样仪精密吸取上述制备好的对照品溶液（0.08 mg/ml）于同一硅胶G高效薄层板上条带点样，点样量分别为3、4、5、6、7和8 μl，以栀子苷峰面积为纵坐标（Y），栀子苷浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算线性回归方程。（2）稳定性试验。准确吸取对照品溶液4 μl，自动点样与展开，对同一硅胶G高效薄层板的同一斑点每隔60 min扫描一次，计算峰面积值的RSD。（3）同板精密度试验。精密吸取对照品溶液2 μl，在同一硅胶G高效薄层板上平行点样5次，按色谱条件及扫描条件对样品进行测定，计算各斑点峰面积的RSD。（4）加样回收率试验。取5份已知栀子苷含量的栀子提取液400 μl，各加入栀子苷对照品溶液400 μl，混合均匀。分别精密吸取上述混合液2 μl，点于同一硅胶G高效薄层板上，按色谱条件及扫描条件对样品进行测定，计算平均回收率和RSD。

1.2.5样品的含量测定。精密吸取供试品溶液4 μl，在同一硅胶G高效薄层板上平行点样4次，按色谱条件及扫描条件对样品进行测定，根据回归方程计算样品中栀子苷的量，再根据稀释倍数及样品质量换算出样品中栀子苷的百分含量，计算栀子苷平均含量。

2结果与分析

2.1方法学考察（1）线性关系的考察。计算得线性回归方程为Y=216.700+7.728X，r=0.999 54。试验结果表明，在0.240～0.640 μg/ml范围内，栀子苷浓度与峰面积呈良好的线性关系。（2）稳定性试验。计算得峰面积值的RSD为0.74%，表明5 h内稳定性良好。（3）同板精密度试验。计算得各斑点峰面积的RSD为0.91%，表明精密度良好。（4）加样回收率试验。计算得平均回收率为100.45%，RSD为1.69%（n=4），表明该方法简便、准确、重复性好，可用于赣南野生黄栀子中栀子苷的含量测定。

2.2样品的含量测定根据回归方程计算样品中栀子苷的量，再根据稀释倍数及样品质量换算出样品中栀子苷的百分含量，计算得栀子苷平均含量为1.564 0%，RSD为2.62%。

3结论与讨论

（1）试验所用供试品的处理方法操作简单、效率高，样品薄层扫描测定条件适宜，栀子苷分离良好，杂质对测定无干扰。检测方法误差小、精度高，可用于栀子中栀子苷的含量测定。

（2）展开剂是影响试验结果准确性的一个重要因素。试验选择了多种展开剂对供试品与标准品进行展开，包括乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶1，V/V/V/V）、氯仿-乙酸乙酯-无水甲醇（3∶2∶1，V/V/V）和石油醚-乙酸乙酯-甲酸（35∶10∶0.5，V/V/V），结果表明第2种展开剂的展开效果最好，斑点清晰、Rf值适宜。所以试验采用氯仿-乙酸乙酯-甲醇（3∶2∶1，V/V/V）为展开剂。

（3）扫描波长的选择。试验对栀子苷标准品进行了光谱扫描，测得栀子苷在240和238 nm处都有最大吸收，进而在238、240 nm波长处分别对栀子供试品进行扫描，发现在240 nm处基线平整、没有小峰、不拖尾，所以选择波长为240 nmwe栀子苷的测定波长。

参考文献

[1] 郑占虎，董泽宏，余靖，等. 中成药现代研究与应用[M]. 北京：学苑出版社，1999：3166.

[2] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：231.

[3] 陈德昌，鲁静，王宝琴. 中药化学对照品工作手册[K]. 北京：中国医药科技出版社，2000：117.

[4] 付红蕾，梁华正，廖夫生. 栀子中京尼平苷的研究现状和应用前景[J]. 时珍国医国药，2005，68（1）：54-56.

[5] 刘怡，陈磊，张留记. 不同产地栀子皮和栀子仁中有效成分的含量比较[J]. 中药新药与临床药理，2012，23（1）：81.

[6] 王谦，唐畅，姚健，等. 各栀子主产区栀子中栀子苷含量的比较研究[J]. 泸州医学院学报，2009，32（2）：133-135.

[7] 李桂兰，巴雅尔，苟雅书. 薄层扫描法测定沙日-毛都-8中栀子甙的含量[J]. 中国民族医药杂志，2002，8（2）：39.

[8] 于淑华，李景清，吴志英，等. 薄层扫描法测定三子散（蒙古族验方）中栀子苷的含量[J]. 药物分析杂志，1996，16（4）：267.