多效唑处理对麦冬有效成分的影响
2014-04-29占妮陶诗顺
占妮 陶诗顺
摘要[目的]研究多效唑处理对麦冬有效成分的影响。[方法]以四川绵阳涪麦冬为材料,在9月上旬至11月上旬进行多效唑处理,测定麦冬块根中总黄酮、总皂苷、多糖和水溶性浸出物等含量,分析多效唑处理对麦冬有效成分的影响。[结果]多效唑处理麦冬块根的总黄酮和总皂苷含量不同程度的低于对照(不进行多效唑处理),部分多效唑处理与对照差异极其明显。大部分多效唑处理麦冬块根的多糖和水溶性浸出物的含量也较对照有明显降低。不同时期和不同用量多效唑处理的影响程度存在一定的差异。[结论]多效唑处理对麦冬块根的几种主要成分有明显影响。
关键词多效唑;麦冬(RADIX OPHIOPOGONIS);总黄酮;总皂苷;多糖;水溶性浸出物
中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611(2014)01-00052-02
作者简介占妮(1988-),女,湖北武汉人,硕士研究生,研究方向:药用植物药物分析,Email:zhanni19880703@126.com。*通讯作者,教授,Email:741874685@qq.com。
收稿日期20131203 麦冬(RADIX OPHIOPOGONIS)为百合科(Liliaceae)植物麦冬[Ophiopogon japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.]的干燥块根,具有养阴生津和润肺清心的功效,主治肺燥干咳、虚劳咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、内热消渴和肠燥便秘等症[1]。麦冬主要有效成分为皂苷、多糖、黄酮和水溶性浸出物等[7]。四川绵阳涪江流域是涪麦冬重要产地。为了提高麦冬产量,药农普遍施用多效唑。多效唑(MET)可以有效地控制麦冬纵向生长、促进横向生长,提高其块根产量的作用。笔者已通过试验研究证实了施用多效唑对麦冬具有明显增产效果(另文报道)。但多效唑在提高麦冬产量的同时,是否会引起麦冬有效成分的变化和影响其药用价值,这也是一个十分重要的问题。因此,笔者研究多效唑处理对麦冬块根主要有效成分的影响,以期为麦冬的进一步开发利用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 研究对象。直立型麦冬,采摘于三台县涪麦冬主产区,经鉴定为麦冬[Ophiopogon japonicus (Thunb.) Ker-Gawl.]。
1.1.2 主要仪器。U-3900紫外-可见分光光度计,购自日立公司;电子分析天平,购自梅特勒-托利多公司。
1.1.3 主要试剂。无水葡萄糖,购自中国上海曹杨第二试剂厂;蒽酮,购自中国医药集团上海化学试剂公司;硫酸,购自新科电化学试剂厂;旋转蒸发仪,购自上海荣生仪器公司;15%多效唑可湿性粉剂和橙皮苷对照品,购自中国药品生物制品检定所;鲁斯可皂苷元对照品、麦冬多糖及其他试剂均为分析纯,实验室配置。
1.2方法
1.2.1 试验设计。试验在西南科技大学校内科研地进行。于2012年3月20日在同一地块选择长势一致的麦冬植株,挖出洗净,剪去地下部分,再选择大小一致的单个分枝作为扦插苗。按与大面积生产相同的方法整地、施底肥和扦插。试验小区长145 cm,宽60 cm,每小区扦4行,每行10穴,行距20 cm,每穴3株,行头设保护行2行,小区间隔40 cm,折每平方米栽植35穴,共105株。
设8种多效唑处理:包括①不施多效唑(以CK表示);②9月上旬处理1次,③10月上旬处理1次,④11月上旬处理1次,⑤9月上旬处理1次+10月上旬处理1次,⑥9月上旬处理1次+11月上旬处理1次,⑦10月上旬处理1次+11月上旬处理1次,⑧9月上旬处理1次+10月上旬处理1次+11月上旬处理1次。每次处理多效唑用量均为1.5 g/m2,以浓度0.1%的药液均匀喷施于植株上,未施用多效唑的小区均用与多效唑处理小区用水量相等的清水喷雾。试验小区随机排列,重复3次。次年4月进行采摘块根,70 ℃烘干后粉碎,过2号筛,保存备用。
1.2.2 线性关系的考察。麦冬总黄酮的标准曲线参照余伯阳等的方法[8]建立,提取液及测定参照谢明华等的方法进行[7]。
1.2.3 麦冬多糖的含量测定[5]。参照文献的方法进行测定。
1.2.4 麦冬总皂苷的含量测定。用《中国药典》2010年版麦冬鉴定方法测定[2]。
1.2.5 水溶性浸出物的含量测定。用冷浸法测定[2]。
2结果与分析
2.1麦冬总黄酮的含量测定
2.1.1 橙皮苷线性关系的考察。以对照品浓度为横坐标(x),吸光度为纵坐标(y)进行线性回归,计算得线性回归方程为y=0.038 3x+0.002 2,R2=0.999 8。试验结果表明,在5~25 μg/ml范围内,橙皮苷浓度与吸光度的线性关系良好,符合Beer定律。
2.1.2 样品中总黄酮含量测定。根据橙皮苷标准曲线的回归方程,计算麦冬块根中总黄酮的含量。结果表明,8个处理中,麦冬块根中总黄酮的含量大小顺序依次是①>③>⑥>④>⑧>②>⑤>⑦;含量分别为2.467、2.135、1.621、1.580、1.498、1.445、1.254和1.129 mg/g。在7个多效唑处理中,除处理②与对照组较为接近外,其余均极显著低于对照组(P<0.01)。
2.2麦冬多糖的含量测定
2.2.1 葡萄糖线性关系的考察。以对照品浓度为横坐标(x),吸光度为纵坐标(y)进行线性回归,计算得线性回归方程为y=25.919 0x+0.584 5(R=0.998 9)。试验结果表明,在2.56~25.60 mg/L范围内,葡萄糖浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2.2.2 精密度试验。从同一样品中取出相同量溶液6份,测定麦冬多糖的含量,结果为(24.89±0.18)%。
2.2.3 回收率试验。精密称取已知麦冬多糖含量的样品(A)4份,加入葡萄糖对照品溶液,加水溶解并定容至100 ml。取溶液适量,按标准曲线方法操作,于626 nm波长处测定吸收值。代入工作曲线方程,计算出平均回收率为104.31%,RSD为7.14%,表明该方法准确可靠,可用于麦冬中多糖的含量测定(表1)。
2.2.4 多糖的含量测定。精密称取麦冬多糖精制品20.0 mg,加水溶解并定容至100 ml作为供试品。取溶液适量,按标准曲线方法操作,于626 nm波长处测定吸收值。代入工作曲线方程计算供试品中麦冬多糖的含量。结果表明,麦冬块根多糖含量以处理③的最高(29.5%),对照组次之(24.7%),处理②(24.5%)与对照组甚为接近;其余处理的含量大小依次为⑦>⑧>⑥>⑤>④,多糖含量依次为22.8%、22.1%、17.1%、15.2%和11.7%。
2.3麦冬总皂苷的测定
2.3.1 总皂苷的线性关系考察。精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0 ml分别置具塞试管中,于水浴中挥干溶剂,精密加入高氯酸10 ml,摇匀,置温水中保温10 min,取出,冰水冷却10 min,以相应试剂为空白,在397 nm处测定吸光度,计算得线性回归方程为Y=0.001 X+0.008,R=0.999 1。
2.3.2 精密度试验。取同一份供试品A(即刚提取的皂苷粗品)溶液,按线性关系考察的方法操作,重复测定6次,测得RSD为0.29%,表明精密度良好。
2.3.3 回收率试验。精密称取已知总皂苷含量的麦冬药材1.000 g,各6份,分别精密加入一定量的鲁斯可皂苷元对照品,按“2.3.1”下方法操作测定,计算得平均回收率为99.40%,RSD为2.10%,表明该方法准确可靠,可用于麦冬中总皂苷的含量测定。
2.3.4 皂苷的含量测定。精密量取供试品溶液2.0 ml置10 ml具塞试管中,照麦冬在《中国药典》的含量方法,自“于水浴中挥干溶剂”起,测定吸光度,代入标准曲线并计算供试品的总皂苷含量。结果表明,麦冬块根中总皂苷的含量以处理①最高,其余各处理组的含量大小依次为③>⑤>②>⑦>⑧>⑥>④;8个处理中皂苷含量大小依次为0.459%、0.433%、0.412%、0.403%、0.398%、0.397%、0.343%和0.331%。
2.4水溶性浸出物的测定 根据《中国药典》的冷浸法算出麦冬水溶性浸出物的含量。除另有规定外,以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。水溶性浸出物的含量以处理⑧为最高,处理⑤次之,其余处理大小依次是①>②>④>③>⑥>⑦;8个处理中水溶性浸出物的含量大小依次为0.829%、0.813%、0.752%、0.739%、0.716%、0.704%、0.689%和0.687%。
3结论与讨论
中草药有效成分受其生长地域、生态环境、品种、植物生长调节物质等因素的影响而表现出一定的差异。试验结果表明,与对照(不施用多效唑)相比,多效唑处理对麦冬块根几种有效成分含量有较为明显的影响。总起来看,多效唑处理麦冬块根的黄酮和总皂苷含量不同程度的低于对照,部分多效唑处理与对照差异明显。大部分多效唑处理麦冬块根的多糖和水溶性浸出物的含量也较对照有明显降低。不同时期和不同用量多效唑处理间麦冬块根主要成分也存在一定的差异,但其规律性不甚明显。因此,可以初步认为,多效唑处理对麦冬块根品种可能会产生不利的影响,这在麦冬生产上是一个不容忽视的问题。
参考文献
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