一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定

鞠守勇 曹志林 李金山

摘要

[目的]筛选并鉴定纳豆芽胞杆菌。[方法]筛选芽胞杆菌，显微镜观察其菌落形态，生理生化鉴定，测定其生长曲线及产纳豆激酶的酶活力。[结果]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023。该菌最高酶活力可以达263.38 IU/ml。[结论] 筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023，为下一步开发成具有溶栓功能的食品或药品奠定基础。

关键词 纳豆激酶；芽胞杆菌；分离

中图分类号 S182 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）13-03784-03

Abstract [Objective] The research aimed to isolate and identify a Bacillus strain producing Nattokinase. [Method] Isolated Bacillus strain， observed its colony morphology， measured its growth curve and enzyme activity of Nattokinase produced by the strain [Result] Isolation and identification of a Bacillus strain produced Nattokinase， named ZD023. Its highest enzyme activity was 263.38 IU/ml. [Conclusion] Isolation and identification of a Bacillus natto ZD023 could provide the foundation for the development of functional food or drugs with thrombolytic acitivity.

Key words Nattokinase； Bacillus； Isolation

血栓疾病是一类严重危害人类健康和生命的疾病，包括心血栓、脑血栓、肺栓塞和末梢动静脉血栓等常见疾病[1]。随着我国人们生活水平的提高，膳食中高脂肪、高蛋白被过量摄取，血栓性疾病已超过癌症和糖尿病成为第一大健康杀手，每年约有350万人死于心血管病，占总死亡原因的41%[1]。因此，研究开发治疗血栓性疾病的药物一直是医学上的热点。

1987年须见洋行[2]博士首先发现了溶解血栓的生物武器——纳豆激酶（Nattokinase，NK）。它是由纳豆芽胞杆菌（Bacillus natto）产生的一种具有纤溶活性的中性丝氨酸蛋白酶。它可用于治疗和预防血栓病，通过口服直接溶解血栓，被认为是一种非常有前途的溶血栓和抗血栓药物。由于纳豆激酶的优点，近年围绕纳豆激酶生产菌株筛选的工作方兴未艾。该研究从湖北武汉市土壤中筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023，研究了菌落形态，进行生理生化鉴定及16S rRNA基因比对，采用纤维蛋白平板法测定了其产纳豆激酶的酶活力，为下一步开发成具有溶栓功能的食品或者药品奠定基础。

对该菌株进行菌落形态、细胞形态观察。通过生理生化分析及16S rRNA基因分析，初步认定该菌为纳豆芽胞杆菌；同时，测定了30 ℃ LB液体培养基中生长曲线以及发酵时间与产纳豆激酶的关系，该菌最高酶活力可以达263.38 IU/ml。这为下一步研究其液体发酵产纳豆激酶进行溶栓药物的研究且开发具有自主知识产权的生物溶栓药物奠定基础。

参考文献

[1]心血管防治研究中心.中国心血管病报告[M].北京：中国大百科全书出版社，2013：8.

[2] SUMI H，HAMADA H，TSUSHIMA H，et al.A novel fibrinolytic enzyme （nattokinase） in the vegetable cheese Natto； a typical and popular soybean food in the Japanese diet[J].Experientia，1987，43（10）：1110-1111.

[3] 赵斌，何绍江.微生物学实验[M].北京：科学出版社，2002.

[4] 李妍.产纳豆激酶细菌的筛选及酶学性质的研究[D].泰安：山东农业大学，2012.

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[7] 奚晓琦，王加启，卜登攀，等.纳豆芽胞杆菌的分离鉴定及纳豆激酶高产菌株的筛选[J].东北农业大学学报，2009（11）：75-81.

[8] 王萍，杜连祥，路福平，等.溶栓纳豆芽胞杆菌的筛选鉴定及产纳豆激酶条件的研究[J].食品与发酵工业，2006（2）：74-77.