鸡病毒性关节炎活疫苗对SPF鸡攻毒保护实验研究

王友等

摘 要：本研究分别测定了两种病毒性关节炎活疫苗ZJS株和S1133株的TCID50。其中ZJS疫苗株的TCID50为104.5TCID50/羽份，S1133疫苗株的TCID50为103.5TCID50/羽份。通过进一步的攻毒保护实验，证实ZJS疫苗株对SPF鸡的临床保护力明显优于S1133疫苗株。

关键词：病毒性关节炎；活疫苗；临床保护力

Abstract： The TCID50 of Viral arthritis live vaccine ZJS strain and S1133 strain were determined in this research. The result displayed ZJS strain is 104.5TCID50/dose， and S1133 strain is 103.5TCID50/dose. The further SPF chicken protection experiment indicated that ZJS vaccine strain is much better than S1133strain in the clinical protection of SPF chicken.

Key Words：viral arthritis； live vaccine； protection

病毒性关节炎是一种可以由不同血清型和致病型呼肠弧病毒引起导致重大经济损失的疾病。该病主要侵害肉鸡，也可见于商品蛋鸡和火鸡。该病主要表现为患病鸡轻度呼吸道疾病、肝脏坏死及腱和滑膜的炎症。选择对鸡致病的呼肠弧病毒人工接种火鸡可以产生与病毒性关节炎一致的病变。

本病可以使用致弱活疫苗和灭活全病毒疫苗接种来控制典型的鸡呼肠弧病毒感染。母源抗体的保护对于该病的防控具有重要意义，种鸡接种活苗和灭活疫苗后产生抗体可以防止后代发生接触传染和经卵垂直传播。

Vander Heide等利用禽呼肠弧病毒S1133株开发了第一代商品化的活疫苗，虽然父母代种鸡都在免疫该毒株，但是仍有很多免疫失败的现象发生。一株新鉴定的呼肠弧病毒毒株，命名为ZJS株，该毒株具有良好的免疫原性和稳定性，能够在鸡胚成纤维细胞上稳定传代，该毒株通过致弱后，可制作成活疫苗。本实验通过对SPF鸡攻毒保护实验，比较了两种病毒性关节炎活疫苗的临床保护效果，结果显示ZJS株疫苗临床保护效果明显优于传统的S1133株疫苗。

1材料

1.1疫苗和种毒

鸡病毒性关节炎活疫苗-ZJS株由瑞普（保定）生物药业有限公司生产；鸡病毒性关节炎活疫苗S1133株由国外某药业公司生产；攻毒用种毒为S1133野毒株，由中国兽药监察所提供。

1.2实验动物

SPF鸡胚购自北京梅里亚维通实验动物有限公司，7日龄SPF雏鸡由瑞普（保定）公司疫苗研发实验室孵化。

1.3实验试剂

细胞培养液，胰酶，胎牛血清，细胞培养板，肉鸡1#料等，其他试剂均为国内分析纯产品。

1.4实验仪器

CO2细胞培养箱，剪刀，镊子，离心机，涡旋仪，注射器，SPF鸡负压隔离器等。

2方法

2.1 ZJS疫苗和S1133疫苗TCID50的测定

2.1.1 按照常规方法制备鸡胚成纤维细胞（参考王友 尤永君等《一种优化的鸡胚成纤维细胞制备方法及细胞生长曲线测定》）。

2.1.2取1瓶ZJS冻干苗（1 000dose）用200 mL疫苗稀释液稀释后。取0.2 mL做病毒原液，从0.2 mL原液中取20 μL加到180 μL稀释液中充分混匀；从此稀释液中取20 μL加到180 μL稀释液中充分混匀；依次倍比稀释至10-10。取1块铺满单层次代CEF细胞的96孔板。前4排接种ZJS株，后4排接种S1133株。每种病毒作11个梯度，每孔加20μL病毒稀释液，每个稀释度重复4个孔，第12孔做阴性对照只加20 μL不含病毒的稀释液。于37℃，5% CO2培养箱培养5～7 d，每天观察细胞病变记录并拍照，按照Reed-Munech方法计算病毒的TCID50。测定方法同上。

2.2实验动物分组

1日龄健康REO抗体检测阴性的SPF鸡随机分成4组。A组为ZJS免疫组；B组为S1133免疫组；C组为不免疫只攻毒对照；D组为不免疫不攻毒对照。A组、B组和C组每组14只鸡，D组6只鸡

2.3免疫实验

饲养至7日龄的SPF鸡，A组每羽颈皮下接种1dose ZJS株疫苗，B组每羽颈皮下接种1dose S1133株疫苗，C组和D组每羽颈皮下注射0.2 mL疫苗稀释液。免疫后每日观察鸡群采食和精神状态。

2.4攻毒实验

免疫后21 d，A组、B组和C组所有鸡均经左侧足垫以104.0EID50的剂量（按照标准操作规程剂量）注射攻毒，D组左侧足垫注射0.2 mL无菌稀释液。攻毒后每天观察鸡群采食状况，精神状态以及足部和腿部关节变化情况，并记录。

3结果

3.1 ZJS株与S113株疫苗TCID50测定结果

结果测得ZJS株疫苗为104.38 TCID50/羽份，S1133株疫苗为103.5 TCID50/羽份。

3.2 SPF鸡群生长状况（见图1～3）

3.3攻毒后鸡群发病情况统计

攻毒对照组的鸡群在攻毒后2 d开始发病，可以见到明显的左侧足垫肿胀，趾关节肿胀。攻毒后第7天，A组有1只左侧足垫出现非常轻微的肿胀；B组有2只出现轻微肿胀，另外有3只出现趾部破损；C组14只鸡全部都出现左侧趾部肿胀，并且其中有9只肿胀严重的出现趾部破损；D组不免疫不攻毒对照组一直正常（见图4～13）。

从图中临床症状可以看出ZJS株和S1133株均能对呼肠弧病毒强毒产生保护。S1133组虽然也出现足部肿胀和皮肤破损病例，但是发病情况明显轻于攻毒组，说明S1133疫苗可以对病关强毒产生一定的抵抗；ZJS株仅造成一例轻微肿胀也没有皮肤破损病例出现，可见ZJS疫苗株对强毒的保护力明显高于S1133疫苗株。

4讨论

呼肠弧病毒感染鸡特别是肉鸡导致病毒性关节炎、腱鞘炎，鸡群常因跛行和总体生产性能低下，包括增重减少、饲料转化率降低、淘汰率高（有时废弃率高达20%～40%）、屠宰率下降、死亡增加，种鸡产蛋下降、受精率降低及垂直传鼻病毒等降低了鸡的经济价值，造成严重经济损失。种鸡在育雏和育成期接种活苗和灭活疫苗是控制本病的经典方法。

在开发用于雏鸡免疫，预防病毒性关节炎的活疫苗时，需要建立效检用强毒株，用于评价雏鸡预防用病毒性关节炎活疫苗的效力可行性。本实验通过经典的临床攻毒保护实验，证实了新毒株ZJS制备的活疫苗在安全性和保护力上均优于传统的S1133疫苗毒株。ZJS疫苗具有更好地保护效果，在规模化鸡场防控病毒性关节炎的程序中将发挥极大地作用，具有广阔的市场前景。

（编辑：何芳）