止嗽青果丸中黄芩苷含量的HPLC法测定

张秀丽 王玉红

【摘 要】目的：制定止嗽青果丸质量控制方法。方法：色谱柱为KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-0.2%磷酸（50：50），流量为1.0m l·min-1；检测波长280nm；柱温为28℃。结果：黄芩苷进样量在0.04044～0.8088μg （r=0.9999）范围内呈现良好的线性关系，平均回收率99.14%，RSD=0.24%（n=6）；结论：该方法准确，重复性好，可用于止嗽青果丸的质量控制方法。

【关健词】HPLC法；止嗽青果丸；黄芩苷

【中图分类号】R286 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-2042-01

Simultaneous Determination of Baicalin in Zhishuoqingguo pills by HPLC

Zhang Xiuli， Wang Yuhong

（Chaoyang Institute for Food and Drug Control，Chaoyang，122000）

【Abstract】Objective：To establish an HPLC method for the determinadtion of Baicalin in Zhishuoqingguo pills.Method：A Kromasil C18（4.6mm×250mm，5μm） column was used with methanol-0.2%phosphoric acid（50：50），The flow rate was 1.0ml·min-1 ， The detection wavelength was set 280nm，and the column temparature was 28℃；Rusult：Baicalin showed good linearity in the range of Baicalin was0.04044～0.8088μg （r=0.9999），The average recovery rates were 99.14%， RSD=0.24%（n=6）；Conclusion：The method is accurate with a good reproducibility ，and suitable for quality control of Zhishuoqingguo pills。

【Key words】HPLC；Zhishuoqingguo pills；Baicalin

止嗽青果丸收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十册[1]，本品为丸剂，主要成分为西青果 麻黄 苦杏仁、黄芩、石膏等14味药，用于由风寒引起的咳嗽痰盛，胸闷气满，气短作喘，口干舌燥等症。具有宣肺化痰，止咳定喘等作用。由于原标准久未更新，无法控制药品质量，故笔者建立了用高效液相色谱法[2-7]测定黄芩苷的含量的方法。

1仪器与试药

岛津LC-2010A型高效液相色谱仪（包括LC-2010型紫外检测器， LC solution色谱工作站），岛津UV-2550紫外分光光度儀，黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110715-200815）；止嗽青果丸（批号：130311， 130312， 130511）甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

2实验方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱为KromasilC18（4.6mm×250mm；5μm）；流动相为甲醇-0.2%磷酸（50：50）；流量1.0mL·min-1；柱温为28℃；检测波长280nm；，进样量为10μl；理论板数按黄芩苷计算不低于4000。

2.2对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品经五氧化二磷减压干燥18小时，精密称取10.11mg置50 ml容量瓶中，加70%乙醇30ml超声使溶解，再加70%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 ml至10 ml容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含黄芩苷20.22μg的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备 取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约0.4g，精称，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液50ml，称定重量，超声处理（260HZ，30W）30分钟，放至室温，再称定重量，用70%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液经0.45μm微孔滤膜滤过即得供试品溶液。

2.4阴性对照溶液的制备 取缺黄芩的阴性对照样品，按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.5方法专属性实验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl，按“2.1”色谱条件注入液相色谱仪，依照“2.1”色谱条件进行测定。结果黄芩苷峰形对称，其它杂质无干扰，见图1。

2.6线性关系考察 分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液（20.22μg ·g-1）1μl，5μl， 10μl，15μl，20μl，注入液相色谱仪。按照“2.1”色谱条件进行测定测定峰面积，以对照品进样量（X）对峰面积积分值（Y）进行线性回归处理，得黄芩苷回归方程为Y=3342208X-15731，r=0.9999。黄芩苷在0.04044～0.8088μg范围内呈良好的线性关系。

2.7精密度试验 精密吸取浓度为20.22μg ·g-1的黄芩苷对照品溶液，连续进样6次，每次10μl，测定黄芩苷平均峰面积为1342484，RSD为0.21%，表明该方法精密度良好。

2.8重复性试验 取批号为130311的供试品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定。黄芩苷的平均含量为4.3938mg·ml-1，RSD为0.73%。表明该方法有良好的重复性。

2.9稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，12，24h进样10μl，按供试液项下测定黄芩苷，统计结果表明，黄芩苷峰面积的RSD为0.32%。表明样品在24h内是稳定的。

2.10加样回收率试验 称取已知含量的供试品（批号：130311，黄芩苷含量4.3938mg·g-1）6份，每份0.2g ，精密称定，分别加入对照品0.8800 mg，按“2.3”项制备，进行含量测定，计算回收率。结果平均回收率为99.14%，RSD为0.24%。结果表明，本法具有良好的加样回收率。见表1。

2.11样品测定 取三批样品，分别制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积分值，按外标法计算样品中黄芩苷的含量，结果见表2。

3讨论

3.1检测波长的选择：取2.2项下的对照品溶液，以相应的溶剂为空白，在200～ 400nm范围内进行光谱扫描，结果显示黄芩苷在210 nm与280 nm有最大吸收，由于在210 nm有末端吸收，所以选280nm为黄芩苷的测定波长.

3.2提取溶剂的选择；在提取样品主成分时分别采用50%乙醇、70%乙醇与乙醇作为溶剂，对三种溶剂的提取率进行比较，结果表明用70%乙醇作为溶剂提取率最高。

3.3 提取方式的選择：，采用70%的乙醇对样品进行浸渍过夜提取法、加热回流提取与超声提取法进行了对比，结果显示超声法提取法提取率明显高于浸渍法与加热回流提取法，而且节省时间，故采用超声法进行提取。

3.4色谱柱的选择：分别考察KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱与SunFireTM C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱对主成分的分离情况，结果表明KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱对黄芩苷的分离效果优于SunFireTM C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，故选用KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱。

3.5流动相的选择：参照中国药典黄芩药材黄芩苷含量测定方法，流动相采用甲醇-水-磷酸（47：53：0.2），结果黄芩苷色谱峰与相邻色谱峰未达到基线分离。由于止嗽青果丸中成分复杂，笔者参考多方文献，经多次试验，选用流动相甲醇-0.2%磷酸溶液（50：50）进行分离，峰形好，黄芩苷色谱峰与相邻色谱峰分离度大于1.5，理论板数很高。

参考文献

[1] 卫生部药品品标准[S]，中药成方制剂第十册，1995：27

[2] 中国药典[S]，一部，2010：282

[3] 李文仕，甘妮.RP-HPLC测定乙肝解毒胶囊中黄芩苷的含量.药物分析杂志，2008，28（2）：306

[4] 谢东，路玫.反相高效液相法同时测定双黄消炎片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量.药物分析杂志， 2008，28（5）782

[5] 田成旺，张铁军.HPLC法测定丹芩颗粒中黄芩苷和丹酚酸B的含量.药物分析杂志，2008，28（10）1738

[6] 邵风，辛黄排毒颗粒中黄芩苷含量的测定.内蒙古中医药，2013，14：48

[7] 赵淑侠，HPLC法测定咳喘宁胶囊中黄芩苷的含量.黑龙江医药，2013，3：364