H PLC测定神农镇痛膏中血竭素的含量

汤小燕 陈越 李炯

（1广东恒诚制药有限公司，广东湛江 524022；2湛江市第二人民医院，524003；3广东湛江吉民药业股份有限公司，524001）

H PLC测定神农镇痛膏中血竭素的含量

汤小燕1陈越2李炯3

（1广东恒诚制药有限公司，广东湛江 524022；2湛江市第二人民医院，524003；3广东湛江吉民药业股份有限公司，524001）

目的：建立神农镇痛膏中血竭素的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液（40∶60）；检测波长440 nm。结果：血竭素进样量在0.10～0.50 μg之间呈良好的线性关系（r＝0.9997），平均回收率为97.32%，RSD=1.6%。结论：测定方法简便、准确，重复性好，阴性对照无干扰，可用于该产品的质量控制。

神农镇痛膏；血竭素；高效液相色谱法；含量测定

神农镇痛膏为国家中药保护品种，收载于《卫生部药品标准（中药成方制剂第十一册）》[1]，处方由25味药物组成，其中血竭为方中主要药材。血竭为棕榈科植物麒麟竭果实渗出的树脂，具有活血定痛，化瘀止血，生肌敛疮的功效[2]。其主要有效成分为血竭素，为了确保产品质量，本文对神农镇痛膏中血竭素的含量测定方法进行了研究。

1 仪器与试药

惠普HP1100高效液相色谱工作站（安捷伦科技有限公司）；B320S-T超声波清洗器（必能信超声[上海]有限公司）；AG135电子天平（梅特勒-托利多仪器[上海]有限公司）。

供试品为广东湛江吉民药业股份有限公司实验室留样及近期产品；血竭素高氯酸盐对照品（原中国药品生物制品检定所，批号1111-9302）。乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液（40∶60）；检测波长440 nm；柱温30℃；进样量20 μL；按血竭素峰计算，理论板数应大于2 000。

2.2 试验溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取血竭素高氯酸盐对照品10 mg（血竭素=血竭素高氯酸盐重/ 1.377），置50 mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2 mL，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1 mL含血竭素约11.6 μg）。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品2片（9.5 cm× 11 cm），除去衬膜，膏面抹上少量滑石粉，剪碎，置250 mL锥形瓶中，加甲醇40 mL，浸泡12 h，超声提取20 min，倾取提取液，药渣再加甲醇30 mL，同法提取3次，合并提取液，滤过，滤液置水浴上蒸至近干，放冷，加3%磷酸甲醇溶液适量，分数次研磨使溶解，与不溶物一起定量转移至10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，超声处理5分钟，再离心（4 000 r/min）5分钟，取上清液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备按处方比例制成不含血竭的阴性样品，再按供试品溶液制备的方法制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定。结果显示阴性对照溶液在血竭素保留时间处未出现吸收峰，表明在实验条件下，其他药材成分对测定结果无影响，专属性强。（见图1）

2.4 线性关系

图1 血竭专属性试验结果

精密量取血竭素高氯酸盐对照品溶液（含血竭素50.14 μg/mL）1，2，3，4，5 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为5.01、10.03、15.04、20.06、25.07 μg/mL的梯度溶液。分别精密吸取20 μL，注入液相色谱仪中测定，以血竭素对照品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为

r=0.9997。结果表明，血竭素进样量在0.10～0.50 μg之间与其峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度

2.5.1 重复性试验取同一批样品（111202）6份，按拟定方法测定，结果样品中血竭素的含量（μg/100 cm2）分别为63.14，63.40，64.55，64.75，65.24，65.70，RSD为1.57%（n=6），说明重复性良好。

2.5.2 中间精密度试验取同一批供试品6份，分别由3人，在不同的时间，用同一台设备，按拟定方法测定。结果供试品中血竭素的峰面积分别为364.29，359.32，365.27，361.36，372.81，367.42，RSD= 1.3%（n=6），说明中间精密度良好。

2.6 加样回收率试验

取同一批已知含量（含量43.688 5 μg/100 cm2）的供试品6份，每份取样量为供试品取量（210 cm2）的50%（即105 cm2），以当前取样含量（46.3979 μg）的1∶1，分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液（血竭素11.596 1 μg/mL）4.0 mL，按2.2.2项下的方法制备溶液，精密吸取供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，计算血竭素的回收率。结果平均回收率为97.32%，RSD=1.6%（见表1）。

表1 加样回收试验结果

2.7 稳定性试验

取同一批供试品溶液，按拟定的测定方法分别在0，30，60，90，120 min进样测定一次，结果测得血竭素的峰面积为368.01，359.36，359.63，348.07，345.30，在60 min内峰面积基本稳定，90 min时峰面积开始明显下降，120 min时峰面积下降了6%，表明供试品溶液在1h内测定基本稳定。

2.8 样品含量测定

取样品3批，分别按拟定的含量测定方法测定，结果见表2。

3 讨论

3.1橡胶膏剂的中药产品，含量测定是以每片（面积）为计量单位，因剂型特点及工艺设备的局限，每片的含膏量差异较大，设置含量测定有助于产品质量的进一步控制。本课题选择血竭为含量测定的研究对象，曾比较了甲醇、乙醇回流法，甲醇、乙醇超声法和大孔树脂柱吸附法，结果以甲醇超声法提取效果最好。

表2 样品中血竭素测定结果（n=2）

3.2稳定性试验表明，血竭素经分离后不稳定，溶液放置颜色会逐渐加深。因此，供试品溶液制备后应置棕色量瓶中，并尽快测定，否则会导致含量偏低，一般应在1h内测定。

3.3本实验研究表明，采用HPLC对血竭进行定量分析，结果准确可靠，重现性好，不受其他药材成分干扰。本研究所建立的含量测定方法可更有效地控制神农镇痛膏的质量。

[1]国家药典委员会.卫生部药品标准（中药成方制剂第十册）[S].北京：人民卫生出版社，1996：130.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：133.

Content Determination of Dracorhodin in Shennong Analgesic Plaster by HPLC

Tang Xiaoyan1，Chen Yue2，Li Jiong3（1 Guangdong Hengcheng Pharmaceutical Co.Ltd.，Guangdong Zhanjiang 524022，China；2 The Second People’s Hospital of Zhanjiang City，524003；3 Jimin Pharmaceutical Co.Ltd.of Guangdong Zhanjiang，524001）

Objective：To establish a method for the content determination of dracorhodin in shennong analgesic plaster.Methods:Using high performance liquid chromatography（HPLC）and pharmaceutical C18column（150×4.6 mm，5 μm），a mobile phase was acetonitrile-0.05mol/L sodium dihydrogen phosphate（40∶60）and the detection wavelength was at 440nm.Results:The results of dracorhodin in 0.10～0.50 μg showed a good linear relationship（r=0.9997）and the average recovery was 97.32%，RSD=1.6%.Conclusion:The method is simple，accurate and reproducible，without interference of negative control，and can be used for the quality control of shennong analgesic plaster.

Shennong Analgesic Plaster；Dracorhodin；HPLC；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.04.004

2013-07-11）

汤小燕，女，工程师。研究方向：药物制剂工艺与药品质量标准。通讯作者E-mail：txy1968@163.com