桔梗总皂苷含量测定方法研究

王 键，陈 婧

(公安边防部队总医院 药剂科，广东 深圳 518023)



桔梗总皂苷含量测定方法研究

王 键，陈 婧

(公安边防部队总医院 药剂科，广东 深圳 518023)

目的：建立以香草醛-硫酸比色法测定桔梗中总皂苷含量的方法，为中药桔梗的药材质量鉴定提供方法借鉴。方法：将桔梗进行处理之后采取抽滤的方式提取抽提物，运用大孔树脂分离纯化，采取香草醛-硫酸比色法测定桔梗中总皂苷的含量。结果：比色法所得到的线性方程为A=0.00334C+0.063，r=0.9989。对于来源不同的桔梗所测得的总皂苷的含量比率在2.04%～2.35%之间。结论：该方法测定桔梗中总皂苷含量稳定性好，操作简单，可以作为桔梗药材质量控制的评价指标。

桔梗；总皂苷；含量测定

桔梗(RadixPlatycodonis)为桔梗科(Caripanulaceae)植物桔梗的干燥根，属于一种药食同源的用途广泛的植物[1]。在中医上，其性味平、辛、苦，归肺经，有排脓、利咽、祛痰、宣肺等功效，多用于治疗疮疡脓成不溃、肺痈叶脓、音哑、咽痛、胸闷不畅、咳嗽痰多等症状。桔梗中的主要药用成分为皂苷类物质，同时皂苷物质也是《中国药典》中规定的对于桔梗质量进行鉴定的主要指标之一[2]。目前，对于桔梗皂苷研究的文献显示，已经从桔梗中分离出来的皂苷类物质达40多种，比较常见的有桔梗皂苷A、桔梗皂苷B、桔梗皂苷D、桔梗皂苷D2、桔梗皂苷D3、桔梗皂苷E等物质[3]。在药典中对桔梗皂苷的测定采取的是重量法，该方法会因桔梗中多糖含量的存在而造成一定的误差，且操作较为复杂[4]，本文采取桔梗皂苷D作为对照品，以香草醛-硫酸比色法测定桔梗中总皂苷含量，以检测桔梗中的总皂苷含量，现将结果报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

JJ-BC系列电子分析天平(美国双杰公司)；UV2550紫外分光光度计(日本岛津)；数字显示恒温水浴锅(广东环凯)；R-1050旋转蒸发仪(长城科工贸)；大孔树脂色谱柱(长30cm，内径3cm)；桔梗皂苷D标准品(上海紫一试剂厂)；AB-8大孔吸附树脂(南开大学)；其余试剂均为分析纯(国药集团)。

1.2 材料

本次试验中所选用的桔梗样品一共有10个，分别来自于不同的药材市场，并经过专业的中药药剂师鉴定为纯正桔梗药材。采取英文字母A～J进行标记，以上药材均采取相同的处理方式，对其清洗干净之后置于60℃恒温烘箱中干燥至恒重，中药粉碎机粉碎，干燥密封保存于有标记的封口袋中，备用。

2 方法与结果

2.1 标准溶液制备

将标准品桔梗皂苷D干燥至恒重，电子天平准确称取3.5mg样品并用70%甲醇进行溶解，转入10mL的容量瓶中，并用70%甲醇溶液添加至容量瓶刻度线处，定容备用。

2.2 供试样品制备

准确称取待测定的桔梗样品1.0g，放入索氏提取器中，采取70%甲醇作为提取液，浸泡30min之后，再加热回流提取4次，每次2h，补充70%甲醇至提取之前重量，减压抽滤，合并滤液，采取旋转蒸发的方式浓缩至10mL左右的提取物，将该提取物上AB-8大孔树脂色谱柱进行分离纯化，重量比例1∶20，反复上样，采取200mL的去离子水作为洗脱液，之后再用400mL60%的乙醇作为洗脱液。水洗脱液丢弃，收集60%乙醇洗脱液，旋转蒸发至干，加入70%甲醇10mL作为溶解剂溶解，转移至10mL容量瓶中定容备用。

2.3 测定波长选择

选择50μL供试样品和80μL标准样品放置于试管中，干燥蒸干之后，准确加入5mL 60%硫酸溶液和0.5mL10%香草醛溶液，均匀混合，摇匀备用。60℃下水浴15min，然后冰水浴3min，配一支空白管作为空白对照，选取波长范围为472nm作为检测波长[5]，空白对照没有干扰。

2.4 标准曲线

精密量取桔梗皂苷D标准样品40μL、80μL、120μL、160μL、200μL,分别蒸干之后，加5mL 60%硫酸溶液和0.5mL10%香草醛溶液，均匀混合，摇匀备用。60℃下水浴15min，然后冰水浴3min，选取472nm作为检测波长。以标准品的浓度C作为横坐标，吸光度值A作为纵坐标，得到回归方程：A=0.00334C+0.063，r=0.9989，表明线性关系良好。样品回收率为97.37%，RSD为1.52%(n=6)。

2.5 含量测定

准确称取10种待测定的桔梗样品，采取与标准样品相

同的方式制备供试样品，并采取相同的方式测定其吸光度值，结果显示，对于来源不同的桔梗所得到的总皂苷含量比率在2.04%～2.35%之间。详见表1。

表1 不同来源的桔梗测定总皂苷含量

3 讨论

药典中对桔梗皂苷的测定采取的是重量法，该方法会因桔梗中多糖含量的存在而造成一定的误差，且操作较为复杂。本文采取桔梗皂苷D作为对照品以检测桔梗中的总皂苷含量，结果显示采取比色法所得到的线性方程为A=0.00334C+0.063，相关系数为r=0.9989。对于来源不同的桔梗所得到的总皂苷含量比率在2.04%～2.35%之间。该方法测定桔梗中总皂苷含量稳定性好，操作简单，可以作为桔梗药材质量控制的评价指标，为桔梗药材质量控制的进一步研究奠定了基础。

[1] 李喜凤,薛秋萍,董诚明.桔梗中总皂苷的含量测定[J].中医药学刊,2006，24(12).

[2] 石俊英,董其亭,巩丽丽,等.不同产地桔梗中总皂苷成分与质量的相关性研究[J].山东中医药大学学报,2006,30(3):247-250.

[3] 魏建和,黄璐琦,陈士林,等.桔梗柱头、花粉活力及自交亲和性研究[J].中国中药杂志,2006，31(5).

[4] 何美莲,程小卫,陈家宽,等.桔梗皂苷类成分及其质量分析[J].中药新药与临床药理,2005，16(6).

[5] 魏尚洲.桔梗资源的综合开发利用[J].陕西科技大学学报：自然科学版,2005，23(5).

(责任编辑：魏 晓)

2014-04-23

王键，男，广东省公安边防部队总医院主管药师，研究方向为药剂学。

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1673-2197(2014)15-0030-02