复方大青叶注射液膜过滤技术工艺研究
2014-04-26苏海波滕先珍戴育云
苏海波,滕先珍,赵 丽,戴育云
(1.湖南永辉医药有限公司，湖南 长沙410116；2.山东华信制药集团股份有限公司，山东 菏泽 274009；3.湖州奥泰膜科技有限公司，浙江 湖州 313000)
复方大青叶注射液膜过滤技术工艺研究
苏海波1,滕先珍1,赵 丽2,戴育云3
(1.湖南永辉医药有限公司，湖南 长沙410116；2.山东华信制药集团股份有限公司，山东 菏泽 274009；3.湖州奥泰膜科技有限公司，浙江 湖州 313000)
目的：优选复方大青叶注射液的制备工艺。方法：通过运用水提取，用无机陶瓷膜常温过滤，最后纳滤的工艺技术。结果：采用水提取药液，离心，10万分子量陶瓷膜粗滤，再用1万分子量精滤，最后用纳滤膜常温浓缩到工艺需要的配制量，调pH值，精滤，灌封，灭菌既得。结论：新工艺充分考虑经济性、可操作性，达到了提高含量及澄明度的目的，保证注射液的稳定性，适用于复方大青叶注射液的现代化生产。
复方大青叶注射液；工艺研究；陶瓷膜过滤；纳滤技术
随着国家对中药注射液监管力度的加大，传统的工艺技术，已很难适合现代标准要求[1]。为了保证中药注射液质量可控及安全有效，保障人民身体健康的要求，必须对中药注射液工艺过程进行改进[2]，使其既能符合中医药理论的特点，又符合现代标准要求。为此，我们与膜过滤厂家联合，首先对复方大青叶注射液工艺进行膜过滤试验，探索新的工艺路线，期望能减少醇沉、水沉工序，降低成本，且最大限度提高含量，保证热原、树脂、鞣质等符合要求。
1 制作原工艺
处方：大青叶 1 000g，金银花 500g，羌活 250g，拳参 250g，大黄 250g。制法：以上五味，加水煎煮3次，1h/次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.20(80℃)，加乙醇使含乙醇量达60%，静置使沉淀，滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.20(80℃)，加适量水使稀释，冷藏使沉淀，滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.20(80℃)，加乙醇使含醇量达85%，冷藏使沉淀，滤过，滤液回收尽乙醇，加适量注射用水，冷藏使沉淀，滤过，滤液用10%氢氧化钠溶液调pH值至7.9～8.2，加入无水亚硫酸钠使浓度达2%，煮沸1h，放冷，加活性炭5g，搅匀，静置，冷藏，滤过，滤液中加入苯甲醇20mL，搅匀，滤过至澄明，加注射用水至1 000mL，灌封，在100℃灭菌30min，即得。
2 原工艺存在的主要问题
①原工艺中需要消耗大量的乙醇，成本增加，而且对环境造成一定污染；②提取周期长，工时过长造成产品污染概率增加，影响产品质量；③大量的有效成分在提取过程中流失，相对成本增加，加大了产品的销售难度。根据原处方的分析，我们一直在寻找新的工艺技术，使产品质量提高，成本降低，减少污染。无机陶瓷膜过滤技术是将中药煎煮液，直接通过陶瓷膜、超滤膜、纳滤膜浓缩等工艺[3]，减少加热破坏及省去传统工艺中的两次酒沉、两次水沉工艺。提高产品含量，减少有效成分损失，而且能解决一直困扰中药注射液中的鞣质、树脂难除去和颜色较深的问题，彻底解决中药的粗、大、黑现象，并且符合中医药理论[4]。膜过滤工艺不使用乙醇等有机溶剂，无污染，还具有安全、高效等特点[5]，且缩短提取周期。我们联合膜过滤厂家，做了一系列的工艺试验，最终找到适合复方大青叶注射液工艺特点的膜过滤技术，进行如下试验。
3 药液提取
①煎煮药液，以大青叶计50kg；②处方：按原处方；③加水煎煮3次，1h/次，加水量分别为400、300、300kg，药液量约为1000kg；④将煎煮液过滤，减压浓缩至500kg，高速离心；⑤将煎煮药液分批进行膜过滤试验，考察不同规格膜过滤的通量，以及含量提高和杂质、热原除去情况，以探索最佳工艺过程。
4 试验
4.1 第一批次试验
我们做第一批膜过滤试验，具体情况如下：取大青叶备用液原液300kg，温度50℃，原液pH5.83，选用20万、15万分子量，及10万、5万分子量膜，分成两组分别做试验。
4.1.1 第一组试验 20万、15万分子量膜过滤液结果，见表1。
4.1.2 第二组试验 10万、5万分子量膜过滤液结果，见表2。
表1 20万、15万分子量膜过滤液结果
注：+为合格，-为不合格。
表2 10万、5万分子量膜过滤液结果
从以上试验来看，用陶瓷膜过滤后再超滤，可以除去树脂、鞣质等。膜浓缩药液，其透析液含量很少，说明用纳滤膜可以起到浓缩药液、而含量几乎不损失的作用，浓缩效果较好，可以采用。其含量转移率低，有以下几种原因：①甙糖在热水中溶解好，试验做到最后，药液放冷库，温度已很低，甙糖被膜部分截留；②大黄素转移率低，与其难溶于水有关，可加大透析水用量；③根据大黄素性质，药液pH偏低。
4.2 第二批试验
根据以上分析，重新制定第二批试验方案如下：将药液温度加热到60℃，pH值调到8.0，再用陶瓷膜过滤。加大透析用水量，每次都加到药液一倍量或更多，使有效成分充分被透析，且透析水温度也要加热到与药液相同温度。根据第一批试验结果及数据分析和制定的试验方案，做第二批试验。根据试验一结果，本次试验选15万、10万陶瓷膜，一万超滤膜及纳滤膜做试验。
4.2.1 第一组试验 陶瓷膜过滤试验，结果见表3。
4.2.2 第二组试验 一万分子量超滤试验，结果见表4。
表3 陶瓷膜过滤试验结果
注：树脂、鞣质项：+为合格，-为不合格。
表4 一万分子量超滤试验结果
注：内毒素、树脂、鞣质项：+为合格，-为不合格。
本批试验最终结果内毒素、杂质等都合格，含量也合格。纳滤液为处方量的2倍，可以降低成本。各阶段转移率较第一批高，含量有所提高，且内毒素、杂质都合格，所以选用膜材料，应选第二批膜材料为好。在此基础上，再优化工艺条件，可以达到高质量、低成本的要求。从原液到浓缩液，其含量总转移率结果见表5。
表5 溶液含量总转移率
取1 000mL备用液，测pH5.62，用NaOH溶液调pH7.85。加Na2SO3为2g摇匀，再加苯甲醇20mL，摇匀，测pH8.15。用0.65μm滤膜过滤3遍，灌封在1mL安瓿中，100℃30min消毒灭菌。送化验室全检，结果如下：①树脂、鞣质、蛋白质合格；热原合格、异常毒性合格；②含量测定：甙糖为26mg/支(应≥24mg/支)，大黄素为0.036mg/支(应≥0.03mg/支)；③pH值为7.95。
4.3 拟实验方案
根据以上试验数据分析，拟下次试验方案如下：①将煎煮药液浓缩到大青叶的2倍量，高速离心，再做膜滤过试验；②膜的选用，初步为15万、10万陶瓷膜滤过，超滤用一万分子量膜，纳滤用300nm膜浓缩。根据以上分析结果，按照拟定的试验方案，重新开始做一批50kg药材的膜过滤试验，具体如下：①药液提取：a.煎煮药液，以大青叶计50kg；b.处方：按原处方进行生产；c.加水煎煮3次，1h/次，加水量分别为400、300、300kg，则药液量约为1 000kg；d.将煎煮液过滤，减压浓缩到100kg，高速离心；②膜过滤试验数据：陶瓷膜选用10万分子量，超滤膜选用1万分子量，纳滤膜选用300nm孔径，全程过滤，将纳滤液灌封，送化验室检测，结果见表6。由表6可知，各项指标均符合注射液标准要求；其配制量为原工艺的2倍，大大降低了成本；其工艺不用乙醇提取，无污染；无加热过程，有效成分损失小，为清洁生产;③将所得样品在温度40℃、相对湿度65%的条件下做加速试验，结果见表7。经过6个月的加速试验，证明该工艺各项指标均符合国家标准，质量稳定、可靠。根据加速试验结果，我们制定新的工艺，具体如下：处方：大青叶1 000g，金银花500g，羌活250g，拳参250g，大黄250g，配制成1 000mL；制法：取处方量的五味药材，加入水煎煮3次，加水量分别为8、6、6倍，1h/次，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩到大青叶药材的2倍量。将药液高速离心，用10万分子量的陶瓷膜过滤，滤液加热到80℃，调pH值至8.0，冷至室温，再用1万分子量的陶瓷超滤膜过滤，超滤液用300nm的纳滤膜过滤浓缩到大青叶的2倍量，检测含量、树脂、鞣质、蛋白质等杂质合格，再检测异常毒性、内毒素合格后，灌封。成品配制过程：取备用液过滤，用40%NaOH调pH值至7.9～8.2，加入配制量的0.2%无水亚硫酸钠，搅匀，加热煮沸40min后，加活性炭5g再煮沸20min后，趁热过滤，滤液加入药用苯甲醇20mL，搅匀，滤至澄清，加注射用水到处方量，搅匀，灌封，冲N2，100℃、30min，灭菌消毒，即得。
表6 膜过滤试验数据结果
表7 加速试验结果
4.4 稳定性试验
根据加速试验结果，和制定的新工艺，我们又进行3批大生产，对这3批复方大青叶注射液进行了稳定性试验观察，试验结果见表8。
表8 稳定性试验结果
5 结论
通过我们的探索和工艺研究发现，在传统工艺基础上，运用现代膜过滤技术进行复方大青叶工艺的改进是可行的，而且该方法几乎是在常温条件下实现，极大地保留了有效成分，除去不必要的杂质，达到安全、有效、质量可控，符合现代的质量标准要求，并且稳定性都高于传统工艺的生产方法。我们认为该方法值得推广应用，对我们中药注射液走出困境不失为一种好方法。
[1] 沈兆军.复方大青叶注射液生产工艺的研究[J].齐鲁药事，2005，24(8)：485-486.
[2] 韩丽.应用逆流提取与膜分离技术的中药注射液新工艺研究——丹参粉针工艺研究[J].成都中医药大学，2003，5(7)：15.
[3] 元英进，刘明言，董岸杰.中药现代化生产关键技术[M].北京：化学工业出版社，2002：145.
(责任编辑：姜付平)
2014-03-15
苏海波(1973-)，男，湖南永辉医药有限公司中药师，研究方向为中药提取工艺。
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A
1673-2197(2014)11-0031-04
