不同炮制方法对大黄遗传毒性减毒效果的研究

花胜利，肖热风，赖怀恩

(广东省制药工业公司，广东 广州 510110)



不同炮制方法对大黄遗传毒性减毒效果的研究

花胜利，肖热风，赖怀恩

(广东省制药工业公司，广东 广州 510110)

目的：探讨不同炮制方法对大黄遗传毒性的减毒效果。方法：将生大黄中药材400g平均分为四组，分别用清炒法、醋炒法、清蒸法和醋蒸法四种方法进行炮制，炮制后进行AMES实验并通过统计学方法比较差异性。结果：清蒸[TA102的S9阳性值为(250.1±8.0)，阴性值为(244.5±9.1)]和醋蒸[TA97的S9阳性值为(245.7±8.0)，阴性值为(165.9±9.1)]的大黄样品除醋蒸样品在代谢非活化条件下呈阳性以外，对于菌株TA97、TA98、TAl00、TAl02的致突变性都呈现阴性结果，而清炒和醋炒大黄的结果仍呈阳性。结论：清蒸炮制法与醋蒸炮制法对大黄的减毒作用比较明显，而清炒炮制法与醋炒炮制法对大黄的减毒效果不明显。

炮制；大黄；遗传毒性；减毒效果

大黄又名将军、黄良等，能攻积滞、清湿热，具有良好的泻火、凉血、祛瘀、解毒作用，现代药物研究[1-2]表明，大黄中主要成分是游离状态或结合状态的蒽醌类衍生物(如大黄酸、大黄素、芦荟素和大黄素甲醚等)，有文献[3]指出：大剂量生大黄能使受孕的雌性大鼠出现虚证表现，大大增大死胎率，暗示生大黄具有较强的生殖毒性，因此，临床应用大黄之前必须进行炮制减毒。为此，笔者对生大黄分别用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法对大黄进行炮制解毒，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

取同一批次的生大黄中药材(产地为甘肃)400g平均分为四组，处理因素分别为清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法四种。实验设计主要试剂包括二甲基亚砜和敌克松等均购自Sigma制药，甲基磺酸甲酯、溴化乙锭和曲拉通等药品购自河北石药集团。实验菌株为组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门菌TA97、TA100、TA98和TA102等(购自山东省疾病预防控制中心)，经过专家鉴定结果符合实验要求。对菌株进行培养的培养基制作方法与高建波、刘云文献[4]一致，在此不再赘述。实验用小鼠购自中国医科大学实验动物研究中心(为昆明种雄性小鼠)，体重范围为24～26g，平均体重范围为(25.01±0.81)g，所有小鼠在常规喂养1周后进行实验。

1.2 大黄炮制方法

四份大黄(各100g)分别用清炒法、清蒸法、醋炒法和醋蒸法方法进行炮制，清炒法是通过中火力度将大黄的表面炒至焦黄色，取出放凉备用；清蒸法是将大黄加热蒸透(一般蒸40min左右)，取出后在室温条件下放凉备用；醋炒法是先将大黄加醋搅拌均匀(加醋比例为每100g大黄拌入18g醋)，闷透后放在锅中翻炒，翻炒至大黄表面为焦黄色时取出放凉备用；醋蒸方法为先将大黄加醋搅拌均匀(加醋比例为每100g大黄拌入18g醋)，放入锅中加热蒸30min左右时取出放凉，干燥备用。

1.3 Ames实验

污染物致突变性实验方法参照柴宝娟、李祥、陈建伟等[5]文献中的标准平皿掺入法，受试物生大黄浓度梯度为0.05、0.10、0.50、2.50、5.0ms/表面皿对突变性进行检测，分别通过四种方法加工后的大黄均采用毒性最强的5.0ms/表面皿的浓度进行实验，代谢活化组设阳性对照2-AF，20μg/表面皿，TA100非代谢活化时阳性对照叠氮钠(NaN3)50pg/表面皿，其它菌株非代谢活化时阳性对照Dexon50μg/表面皿，阴性对照二甲基亚砜(DMSO)0.1mL/表面皿。

1.4 统计学方法

2 结果

清蒸[TA102的S9阳性值为(250.1±8.0)，阴性值为(244.5±9.1)]和醋蒸[TA97的S9阳性值为(245.7±8.0)，阴性值为(165.9±9.1)]的大黄样品除醋蒸样品在代谢非活化条件下呈阳性以外，对于菌株TA97、TA98、TA100、TA102的致突变性都呈现阴性结果，而清炒和醋炒大黄的结果仍呈现阳性，因此，通过Ames实验结果表明清蒸炮制法与醋蒸炮制法对大黄的减毒作用比较明显，而清炒炮制法与醋炒炮制法对大黄的减毒效果不明显，具体数据统计结果,见表1。

表1 不同炮制方法对大黄的污染物致突变性实验结果

3 讨论

大黄一般被认为毒性较低，临床应用比较安全，但服用过量可引起中毒，尤其是后下大黄毒性较大，可引起恶心、呕吐、头昏、腹绞痛、黄疸等。曾有报道[6]，30名受试者每日服大黄3次，3g/次，共5日，所有受试者均产生一系列胃肠反应，主要表现为腹泻、腹痛、呕吐、恶心、肠鸣，其中3例因严重腹泻、腹痛、呕吐而被迫卧床休息，经对症处理后缓解。国外曾报道[7]1例长期服蒽醌类泻药，导致结肠膨胀，手术切除结肠标本可见变黑，肌层神经元消失，平滑肌萎缩，因此，大黄在应用前需进行炮制以达到减毒增效的目的。

污染物致突变性实验一般被用来进行环境毒理学实验分析，由本研究数据统计结果可以看出，对大黄中药材的清蒸法和醋蒸法两种加工方法能有效降低大黄遗传毒性，董菊文献[8]研究中得出以下推论：大黄在经过加工和炮制的过程中，以结合方式存在的蒽醌类物质减少，而游离状态的蒽醌类物质增大，因此，泻下作用有所减弱。魏高文等[9]应用高效液相色谱法证明了以结合方式存在的蒽醌物质中有一部分会转化为游离状态(表现为结合蒽醌峰面积减少，同时游离状态蒽醌物质的峰面积明显增大)。笔者在以上文献研究的基础上，结合自身实践经验，分析原因如下：清蒸法和醋蒸炮制方法能使大黄药材在高温环境作用下，使蒽醌化合物的苷键发生断裂，产生毒性较弱的游离态蒽醌物质，降低大黄的遗传毒性。

表1显示了清蒸方法处理大黄后的毒性略高于醋蒸，主要原因是大黄中药材在酸性条件下，部分蒽醌类物质可被还原为蒽芬或其它互变异构体(如恩酮等物质)，使氧化过程相对降低。总之，清蒸法和醋蒸法两种炮制方法对大黄遗传毒性能起到明显降低的结果，而清炒和醋炒法并无明显的减毒效果。通过对大黄药材的蒸煮加工，能明显降低大黄的遗传毒性，这为大黄在临床应用中的减毒作用奠定了一定的基础，然而，本研究仅是对单纯的大黄中药材进行研究，关于大黄复方制剂的减毒还需进行进一步的实验研究。

[1] 冯天师，王玉刚，柴玉爽，等.正品及伪品大黄药效与毒性的比较研究[J].世界科学技术——中医药现代化，2012，14(4)：1863-1870.

[2] 马德君，冯磊，蒋红云，等.5种药剂对大型溞的急性活动抑制毒性研究[J].安徽农业科学，2012，40(17)：9331.

[3] 胡晓丞，李亚洲，佟继铭，等.大黄提取物对成年大鼠睾丸的毒性作用[J].中国药理学与毒理学，2012，26(5)：658-663.

[4] 高建波，刘云.大黄颗粒对大鼠的长期毒性试验研究[J].中国当代医药，2013，20(22)：4-6.

[5] 柴宝娟，李祥，陈建伟，等.大黄总提物的大鼠亚急性毒性[J].药学与临床研究，2011，19(4)：322-324.

[6] 温晓燕，孟繁洁，靳英辉，等.中药保留灌肠治疗病毒性肝炎疗效的Meta分析[J].中国循证医学杂志，2013，13(4)：474-481.

[7] LING-NA ZENG，ZHI-JIE MA，YAN-LING ZHAO，et al.The protective and toxic effects of rhubarb tannins and anthraquinones in treating hexavalent chromium-injured rats：the Yin/Yang actions of rhubarb[J].Journal of hazardous materials，2013， 247(15)：1-9.

[8] 董菊.牛黄解毒片的遗传毒性研究及其方药配伍减毒作用初探[D].南京：南京中医药大学，2012.

[9] 魏高文，何丽萍，赵静，等.大黄中蒽醌类衍生物的反相高效液相色谱分离条件优化的研究[J].光明中医，2008，23(9)：1256-1257.

(责任编辑：姜付平)

2014-03-14

花胜利(1960-)，男，广东省制药工业公司主管中药师，研究方向为药物管理。

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1673-2197(2014)11-0027-02