LC-MS/MS法检测降压类中成药及保健品中非法添加的7种化学药物

魏志雄，刘丹丹

(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523109)



LC-MS/MS法检测降压类中成药及保健品中非法添加的7种化学药物

魏志雄*，刘丹丹

(东莞市食品药品检验所，广东 东莞 523109)

目的：建立快速、灵敏、准确的检测降压类中成药及保健品中非法添加阿替洛尔、盐酸可乐定、氢氯噻嗪、卡托普利、盐酸哌唑嗪、利血平及硝苯地平等7种化学药物的LC-MS/MS方法。方法：采用 Phenomenex Luna C18(2.0mm×100mm，3μm)色谱柱进行分离，以0.5%甲酸水-乙腈为流动相梯度洗脱，流速为0.2 mL·min-1，离子源为ESI源，正负离子检测模式，对降压类中成药及保健品中非法添加的该7种化学药物进行定性检测。结果：7种化学药物的检出限分别为0.01～0.02ng，6批供试品有1批检测到非法添加氢氯噻嗪。结论：该方法专属性强、灵敏度高，适用于降压类中成药及保健品中非法添加该7种化学药物的定性分析。

中成药及保健品；化学药物；液相色谱-质谱联用法

高血压是常见病、多发病，其发病率随着人民生活水平的提高、生活方式的改变及年龄结构的老龄化而迅速增加，已经严重威胁到人类健康。降压类西药起效迅速，疗效确切，市场应用广泛，但其具有依赖性严重、停药反弹及长期应用会不同程度损害肝肾等副作用[1-2]。因受利益驱使，不法分子往中成药及保健品中非法添加降压类西药[3]，致使患者在不知情的情况下，未按照正确用法、用量使用药物，造成巨大的健康隐患和带来严重的不良反应。本实验在参考相关文献研究[4-7]的基础上，运用液质联用技术，采用多反应监测扫描方式，首次建立了同时监测非法添加的7种降压化学药物的定性检测方法，为更好地打击不法行为提供可靠的技术保障。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AB 3200 QTRAP 液质联用仪(美国应用生物系统公司)，配有电喷雾离子化源、三重四级杆质量分析器及Analyst 1.5.1工作站；Sartorius BP211D。

1.2 试药

对照品均由中国食品药品检定研究院提供。阿替洛尔(批号：100117-199903)、盐酸可乐定(批号：0071-9504)、氢氯噻嗪(批号：100309-200702)、卡托普利(批号：100318-200602)、盐酸哌唑嗪(批号：100164-200402)、利血平(批号：041-9409)及硝苯地平(批号：100338-0001)。样品：6个样品由本所在市场购得。乙腈、甲酸均为色谱纯，水为超纯水。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex Luna C18(2.0mm×100mm，3μm)；流动相：以0.5%甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，梯度洗脱，见表1。流速：0.2mL/min；进样量：5μL；柱温：35℃。

表1 液相色谱梯度洗脱

2.2 质谱条件

ESI电离源；正负离子扫描模式，区间扫描模式见表2；多反应监测(MRM)扫描方式；喷雾电压：5500V；气帘气压力：25psi；雾化气压力：40psi；辅助加热器温度：400℃；辅助气压力：40psi；碰撞气压力：Medium；碰撞室出口电压：3 V，解簇电压(DP)及碰撞能量(CE)。见表3。

表2 区间质谱扫描模式

2.3 对照品溶液的制备

对照品储备溶液：取上述7种对照品约10mg，精密称定，分别置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。

混合对照品溶液：分别精密吸取上述对照品储备液1mL，置同一100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 供试品溶液的制备

取一次服用量的供试品，研细，精密称取0.5g置于50mL量瓶中，加入甲醇40mL，超声处理15min，放冷至室温，加入甲醇至刻度，混匀，滤过，精密吸取续滤液1mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，过0.2μm滤膜，取续滤液，即得。

2.5 样品测定

取混合对照品溶液及供试品溶液各10μL注入液质联用仪，按照LC-MS/MS测定条件分别进行分析。

3 结果

3.1 质谱条件的优化

分别将7种对照品储备液用甲醇稀释至1μg·mL-1的对照溶液，采用ESI离子化方式，通过直接进样，进行质谱条件优化。首先，采用母离子扫描(Q1)方式得到准分子离子峰，在确定准分子离子峰的基础上，进行DP值的优化，得到各成分的最佳DP值，再采用子离子扫描(MS2)方式确定其子离子及最佳CE值，最后选择母离子及丰度较大的子离子组成检测离子对，使MRM具较高的灵敏度。此外，在样品测定中可适当增加离子对数量，使MRM具有更强专属性。结果见表3。

表3 7种降压化学药物的质谱条件优化结果

3.2 检测限

取对照品溶液适量，加甲醇逐步稀释，按上述液质联用条件进行测定，以S/N=3，计算各成分的最低检测限(LOD)。结果见表4。

表4 7种降压化学药物的最低检测限

3.3 样品测定结果

在质量色谱图中，如供试品出现与混合对照品保留时间一致的质量色谱峰，则需比较其与相应的对照品MS/MS图，若其离子对相同，且其相对丰度一致，见表5，则判断该样品中含有该化学成分。在抽取检验的6批次供试品中，检出1批样品添加了氢氯噻嗪，相应图谱见图1、图2。

表5 定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差

4 讨论

硝苯地平光稳定性较差，操作中应尽量避光，配置过程须采用棕色容量瓶。阿替洛尔因结构中含有一个手性碳原子，存在着对映异构现象，为外消旋体[8]，故在质量色谱中出现两个不同保留时间的吸收峰。

为使7种化学成分达到满意的分离度，分别对0.5%甲酸-乙腈、0.5%乙酸-乙腈、0.5%甲酸-甲醇、0.5%乙酸-甲醇及20mmol/L乙酸铵-乙腈等洗脱条件进行了考察，结果表明在0.5%甲酸-乙腈梯度洗脱时，7种化合成分的离子化效率高，并均能得到较好的分离。

本实验共建立了7种降压类保健品中非法添加成分的定性检测方法，该方法采用多反应监测的方式检测，专属性强，灵敏度高，检测结果更准确。

图1 混合对照品中氢氯噻嗪的质量色谱及MS/MS

图2 样品中氢氯噻嗪的质量色谱及MS/MS

[1] 王艳, 赵龙凤, 王勤英. 药物性肝损伤66例[J]. 中华肝脏病杂志, 2010, 18(9): 715-716.

[2] 沈素. 引起药源性肾损害的药物与常见类型[J]. 中国医刊, 2007, 42(11): 13-15.

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[4] 陈海滨, 吴春敏, 胡敏, 等. LC-MS/MS检测降压类中药制剂中非法添加的9种化学药物[J]. 海峡药学, 2012, 24(9): 47-50.

[5] 刘吉金, 杨敏, 李军, 等. HPLC同时检测保健品及中成药中非法添加9种抗高血压化学药物的研究[J]. 中国现代应用药学杂志, 2008, 25(8): 717-719.

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(责任编辑：宋勇刚)

Detection of Seven Chemical Medicines in Antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods by LC-MS/MS

Wei Zhixiong，Liu Dandan

(Dongguan Institute for Food and Drug Control，Guang Dong 523109,China)

Objective:To establish a rapid, sensitive and accurate LC-MS/MS method for the detection of atenolol, clonidine hydrochloride, hydrochlorothizide, caotopril, prazosin hydrochloride, reserpine and nifedipine, which were illegally added into antihytensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.Methods:Phenomenex Luna C18(2.0mm×100mm,3μm) was adopted with the mobile phase of 0.5% formic acid and acetonitrile by gradient elution. The flow rate was 0.2mL·min-1. The electrospray ionization source was applied and operated in positive and negative ion mode.Results:The limit detection of seven antihytensive medicines were in the range of 0.01～0.02 ng. Hydrochlorothizide was found in one formulation of six.Conclusion:The method is selective and sensitive and can be employed in the detection of seven chemical medicines in antihytensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.

Traditional Chinese Medicine and Health Foods; Chemical Medicines; LC-MS/MS

2014-01-16

魏志雄(1983-)，男，博士，广东省东莞市食品药品检验所主管中药师，研究方向为保健食品与药品检验。

R284.1

A

1673-2197(2014)11-0012-03