通阳利湿方对神经根型颈椎病急性期模型大鼠的影响*

河北省中医院骨伤科（石家庄 050011）

王 鹏 乔 钢△ 贾露露△△ 国延军 牟成林 赵 建 崔书国 杜景华

神经根型颈椎病是因椎间盘突出、退变、节段性不稳定、骨质增生或骨赘形成等在椎管内或椎间孔处压迫、刺激颈神经根导致，在各型颈椎病中发病率最高，约占60% ～70%，［1］而其急性期根性疼痛尤为突出。笔者通过大量临床实践自拟通阳利湿方经验用药，取得较好临床疗效，但其机制尚不完全明了。本研究拟对大鼠颈神经根性疼痛的行为学等变化进行观察，探讨通阳利湿方对神经根型颈椎病急性期大鼠模型根性疼痛的治疗作用及机制。

1 材料

1.1 实验动物 选取健康成年雄性SPF级Spra gue－Dawley（SD）大鼠60只，体质量 （210±10）g，由河北省实验动物中心提供 （合格证编号:1212144）。笼内标准大鼠颗粒饲料饲养，室温 （24±2）℃，相对湿度70%左右，定时通风换气，照明:白天/黑夜各12 h循环。

1.2 试验药品 通阳利湿方，药物组成:桂枝9 g，黄芪30 g，葛根15 g，白芍25 g，白术12 g，茯苓15 g，猪苓12 g，泽泻10 g，苦杏仁6 g，香薷9 g，葶苈子10 g，车前子15 g，薏苡仁30 g，延胡索10 g，川芎9 g，酒大黄3 g，羌活9 g，姜黄10 g，威灵仙9 g。中药配方颗粒购于广东一方制药有限公司，批号:1308151。

1.3 仪器 ZH－YLS－3E电子压痛仪。

2 方法

2.1 神经根型颈椎病急性期大鼠模型的建立参照谢炜［2］、于林［3］、赵伟宏［4］椎管插线法。具体造模方法如下:用10%水合氯醛按0.3mL/100 g剂量麻醉腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后，剪毛，取俯卧位固定，常规消毒后，手指触及下颈部最高棘突 （T2），以此为基准，向上于颈部正中线做4 cm左右切口，切开皮肤、皮下组织，逐层钝性分离颈后部肌群，直至C4～T2左侧椎弓充分暴露，剥离干净其表面肌肉、韧带等组织，使用显微镊轻轻挑开 C5～6、C6～7、C7～ T1椎间隙的黄韧带及结缔组织，用止血钳轻轻钳开C6、C7左侧锥弓板及部分关节突，开窗暴露脊髓，用眼科神经剥离子把脊髓轻柔推至右侧，再用显微外科镊子将2根各8 mm长、直径0.55 mm尼龙渔线 （渔线经过酒精浸泡，无菌干燥后使用）分别沿脊髓纵轴向头尾两端插入至C5～7、C6～T1左侧神经根处，两根渔线在C6、C7神经根处重叠，牢固嵌入骨性椎管内，以加强对下位左侧颈神经根C6、C7的卡压损伤，避免大鼠自我修复过快。插线时精细操作，渔线避免过度向下压迫，以免碰破椎静脉丛后致椎管内大出血。置线成功后，逐层关闭创口，间断缝合。术后常规予手术大鼠肌内注射庆大霉素预防创口感染。术中麻醉意外致死亡2只，手术损伤致死亡4只，术后5天内死亡4只。剩余50只大鼠于术后即表现出显著的患肢疼痛相关行为，5天时进入病变平台期，无脱失，无自愈。

2.2 实验分组 入组大鼠于术后第5天进行评价，筛选条件如:①步态评分，2～3分;②未见脊髓压迫症状，共有40只大鼠符合条件入组。随机编号，分为2个组:对照组、治疗组，每组20只。

2.3 药物干预 两组均于术后第6天开始灌胃，以14天为1个疗程，治疗1个疗程。

2.3.1 治疗组:用药剂量按“动物体表面积比率换算等剂量方法”，由正常成人每日常用剂量换算得出，相当于成人20 g/70 kg·d－1，以1.79 g/kg·d－1剂量计算，将通阳利湿方颗粒加生理盐水配成浓度为62.65 g/kg的溶液，每只大鼠灌胃量为3 mL，连续灌胃14 d（2次/d）。

2.3.2 对照组:取与治疗组等量的生理盐水，连续灌胃14 d（2次/d）。

2.4 观察指标 在9:00～11:00期间，分别观察并记录治疗前后的数据，即术后第5天 （灌胃前1天即治疗前），术后第20天 （灌胃结束第1天即治疗后）的数据。

2.4.1 自发痛评估:将大鼠置于观察箱中，待其安静30 min后，记录5 min内左前肢离地的累积时间 （s），取3次的平均值。

2.4.2 步态评估:观察大鼠行走及休息时的姿势，参考Kawakami和Dubuisson法对其因疼痛挛缩造成的步态障碍进行评估。1分=左前足无畸形、正常步态;2分=左前足内收、蜷缩畸形;左前足轻触玻璃台面，轻微持重或不持重，走时跛行;3分=左前足内收、蜷缩畸形;左前足抬起，走动时不触台面。

2.4.3 痛阈值改变:用电子压痛仪压迫大鼠左前掌中央部位，以大鼠挣扎、嘶叫时的压力作为该大鼠的痛阈值。

2.4.4 游泳时间测定:大鼠于 （43±0.5）℃、水深35 cm的恒温水槽中游泳，当大鼠出现自然下沉时从水槽取出，大鼠入水至自然下沉的时间间隔记为大鼠游泳时间。

2.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件分析，实验数据用（±s）描述，治疗前后不同时间段的组内数据比较用两组配对t检验，P＜0.01为差异有非常显著性;组间比较采用两组独立t检验，P＜0.05为差异有显著性。

3 结果

3.1 治疗前后自发痛变化 治疗组大鼠术后第20天 （治疗后）左前肢离地的累积时间较术后第5天 （治疗前）降低，差异有非常显著性 （P＜0.01），对照组则差异不大 （P＞0.05）;治疗组治疗后左前肢的离地时间缩短明显，与对照组相比差异有显著性 （P＜0.05）。详见表1。

表1 治疗前后自发痛比较（±s）

表1 治疗前后自发痛比较（±s）

注:与治疗前相比，*P＜0.01;与对照组相比，△P＜0.05

组别 例数 治疗前 治疗后 治疗前后的差值治疗组 20 132.55±9.76 74.70±15.50＊△57.85±13.76对照组 20 133.80±12.78 117.05±21.5716.75±12.92

3.2 治疗前后步态评分变化 治疗组大鼠术后第20天 （治疗后）左前足步态评分较术后第5天（治疗前）减少，差异有非常显著性 （P＜0.01），对照组治疗后与治疗前差异不大 （P＞0.05）;治疗组治疗后左前足步态评分减少明显，与对照组相比差异有显著性 （P＜0.05）。详见表2。

表2 治疗前后步态评分比较（±s）

表2 治疗前后步态评分比较（±s）

注:与治疗前相比，*P＜0.01;与对照组相比，△P＜0.05

组别 例数 治疗前 治疗后 治疗前后的差值治疗组 20 2.55±0.31 1.24±0.18＊△1.31±0.38对照组 20 2.55±0.22 2.21±0.230.34±0.30

3.3 对大鼠痛阈值的影响 造模后，患侧痛阀值较健侧明显降低，但治疗组大鼠术后第20天（治疗后）左下肢痛阈值较术后第5天 （治疗前）显著提高，差异有非常显著性 （P＜0.01），对照组治疗后与治疗前差异不大 （P＞0.05）;治疗组治疗后左下肢痛阈值增加明显，与对照组相比差异有显著性 （P＜0.05）。详见表3。

表3 治疗前后痛阈值比较（±s）

表3 治疗前后痛阈值比较（±s）

注:与治疗前相比，*P＜0.01;与对照组相比，△P＜0.05

组别 例数 治疗前左下肢 右下肢治疗后左下肢 右下肢治疗组 20 497.85±61.66 743.05±61.96 572.95±79.68＊△845.90±98.72对照组 20 514.65±89.69 720.05±68.22 520.80±112.51775.90±69.30

3.4 游泳时间测定 治疗组和对照组大鼠游泳时间均较造模前的正常时间缩短，但治疗组大鼠术后第20天 （治疗后）游泳时间较术后第5天 （治疗前）增加，差异有非常显著性 （P＜0.01），对照组治疗后与治疗前变化不大 （P＞0.05）;治疗组治疗后游泳时间增加明显，与对照组相比差异有显著性 （P＜0.05）。详见表4。

表4 治疗前后游泳时间比较（±s），s

表4 治疗前后游泳时间比较（±s），s

注:与治疗前相比，*P＜0.01;与对照组相比，△P＜0.05

组别 例数 治疗前 治疗后 治疗前后的差值治疗组 20 336.70±27.11 380.65±53.98＊△43.80±52.78对照组 20 349.25±51.96 359.25±50.6510.00±6.53

4 讨论

目前国内颈神经根型疼痛动物模型的造模方法主要有2种:①椎管插线法;②福尔马林定量滤纸片法。福尔马林定量滤纸片法较难对两种刺激在实验中各自的作用进行定量研究，易造成实验结果偏倚，可控性因素低，所以选用单一发病机制的椎管插线法制备模型。［5］本实验对照组4组数值治疗前后的组内比较差异有一些变化，提示本实验模型存在一定的自愈性。

笔者通过大量临床观察发现神经根型颈椎病急性期多可对应中医湿阻阳遏型，自拟通阳利湿方对症治疗。方中君药黄芪、桂枝补气通阳。白芍、葛根舒太阳之经气;白术、薏苡仁、茯苓、猪苓、泽泻、车前子、葶苈子共用，温肾阳、健脾阳以气化运水;苦杏仁、香薷启肺上源，提壶揭盖;延胡索、川芎，调达肝气，使疏泄正常，以上皆为臣药。佐药酒大黄，制羌活、黄芪之燥热。威灵仙通行十二经，羌活入膀胱经上部，姜黄行肢臂，为使药。诸药合用，可通三焦阳气，化积聚水湿，共彰通阳利湿之效。

本实验表明，通过上述药理作用，通阳利湿方可以明显提高模型大鼠压足痛阈值，促进模型动物行为学改变的恢复，可能具有神经保护作用，符合中医理论对于“湿阻阳遏”的治疗原则，为临床推广应用提供了实验依据，但其具体作用机制还有待进一步研究。

［1］ 中国康复医学会颈椎病专业委员会.颈椎病诊治与康复指南（2010版）［R］.北京:中国康复医学会，2010.

［2］ 谢炜，赵伟宏，于林，等.川芍提取物对神经根型颈椎病模型大鼠根性疼痛的保护作用研究 ［J］.广东药学院学报，2008，24（5）:498－499

［3］ 于林.葛根提取物对神经根型颈推病根性疼痛治疗作用及机制研究［D］.广州:南方医科大学，2008.

［4］ 赵伟宏.川芍提取物对神经根型颈推病根性疼痛治疗作用及机制研究［D］.广州:南方医科大学，2008.

［5］ 蒋诗超，房敏，程英武，等.神经根型颈椎病动物模型国内研究进展及评价［J］.中华中医药杂志，2012，27（12）:3 052－3 056

（2014－04－03 收稿）