安神补脑液制备工艺优化研究

周颖

[摘要] 目的 为了优化安神补脑复方制剂制备工艺，提高药效。 方法 正交实验法确定最佳醇沉工艺。结果 药液相对密度为1.20，含醇量为60%，静置时间24 h的醇沉效果最佳。结论 按优化工艺制得的制剂2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷含量和出膏率高，且质量稳定。

[关键词] 安神补脑液；正交设计；淫羊藿苷；制备工艺

[中图分类号] R461 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）10-0048-02

安神补脑液由鹿茸、制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草、大枣、维生素B1等7味药物制成，具有生精补髓、益气养血、强脑安神等功效。适用于肾精不足、气血两亏所致的头晕、乏力、健忘、失眠；神经衰弱症见上述证候者。是临床上常用的成方制剂。虽然《中国药典》2010版一部中收载了该制剂，但“制法”项下仅记载了将“滤液浓缩至适量，加3倍量乙醇，静置，滤过，滤液备用”[1]， 对于醇沉工艺并没有具体的方法，为细化复方工艺，提高复方的药效和生物利用度，现采用正交法对该复方的醇沉工艺进行考察及优化。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型液相色谱系统，包括：高压二元泵（G1311A），可变波长检测器（G1313A），Agilent 1100 series色谱工作站（美国安捷伦科技有限公司）。

1.2 对照品

淫羊藿苷对照品购自中检所，供含量测定用，纯度>98%。

1.3 试剂

乙腈、甲醇均为色谱纯，乙醇为分析纯，购自天津科密欧化学试剂有限公司。

1.4 药材

制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草和大枣等药材购自沈阳市药材市场，经鉴定均为正品。

2 方法与结果

2.1醇沉前提取液的制备

由于药典中未记载该制剂的处方量，根据部颁标准的记载[2]，按处方配比取处方中的制何首乌62.5 g，淫羊藿50 g，干姜 12.5 g，甘草 6.25 g，大枣 12.5 g，精密测定。加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并煎液，滤过，滤液平均分成三份，分别减压浓缩至相对密度为1.15、1.20、1.25时备用。

2.2供试品溶液制备及色谱条件

通过组方分析，该复方醇沉部分的主要药味为何首乌和淫羊藿，因此，主要考察指标为出膏率、2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷）、淫羊藿苷。采用HPLC法对该复方的上述两个成分同时进行含量测定。

2.2.1供试品溶液的制备 将醇沉后的溶液滤过，加水定容至1000 mL摇匀，精密吸取1～10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.2色谱条件 迪马DiamonsilTM C18色谱柱（4.5 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-水为流动相， 梯度洗脱（0～10 min，乙腈体积分数为30%～50%；10～11 min，乙腈体积分数为50%～80%；11～15 min，乙腈体积分数为80%～100%；15～20 min，乙腈体积分数为100%）；流速为1.0 mL/min；检测波长为350 nm；柱温为30℃；进样量25 μL[3]。

2.3醇沉工艺的优化

采用L9（34）正交实验对醇沉条件中的密度、醇浓度及静置时间进行3种水平的考察，确定最佳醇沉方法。其影响因素水平见表1。

表1 醇沉工艺相关因素水平表

按L9（34）正交表安排进行试验。取上述不同相对密度的三份样品分别按正交表安排试验。以出膏率、淫羊藿苷、二苯乙烯苷三个指标进行考察，加权综合评分，其中总分100分，出膏率占20分，淫羊藿苷占40分、二苯乙烯苷占40分。正交分析与加权评分结果见表2、表3。

表2 醇沉条件考察实验结果

表3 方差分析表

注：F0.05（2，2）=19.00； F0.1（2，2）=9.00

直观分析和方差分析结果表明：三个考察因素中静止时间对结果影响最为显著，为主要影响因素；药液相对密度和含醇量对结果影响较小，为次要因素。最佳提取条件为A2B1C3，即药液相对密度为1.20，含醇量为60%，静止时间24 h。

2.4验证试验

称取何首乌（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大枣，共3份，分别加水煎煮3次，第1次2个小时，第2、3次各1个小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.20，加入乙醇使含醇量达到60%，静止放置24 h后分别测定出膏率、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的量，见表4。

表4 验证实验结果

3讨论

原提取工艺是将水提液浓缩至流浸膏，而流浸膏要求浓缩到每1 mL相当于原药材1 g，这对工业生产时质量监控极其不方便，因此，按流浸膏的比例浓缩后检测密度为1.20，因此选择将水提液减压浓缩至相对密度为1.15、1.20、1.25备正交实验使用。检测指标由体积改为密度，为工业生产质量监控提供方便。

正交实验结果的确定方法是无显著性差异因素选择最节能水平，有显著性差异因素选择结果最高的因素水平。由于正交结果表明药液密度和含醇量两个因素无显著性差异，因此按节能原则选择水平：药液密度选择1.20，因为其比1.15加甲醇量相对较少，且比1.25需要耗费的能源少；选择60%含醇量是因为其加醇量相对较少，节省资源。另外，静置时间因素由于其三个水平的结果有显著性差异，因此选择正交实验结果最好的水平，即24 h为最佳静置时间。

根据传统的复方制备工艺，本实验仅考察优化何首乌（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大枣的提取后的醇沉工艺，未对贵重药材鹿茸的制备工艺进行优化。优化后的醇沉工艺可以为该复方今后的制剂工艺研究提供依据。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010版一部[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010：715-716.

[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第三册[S]. 1991：73-78.

[3] 王伟，许祺，杜秀芳，等. 高效液相色谱法同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量[J]. 河北科技大学学报，2010，31（5）：403-405.endprint

[摘要] 目的 为了优化安神补脑复方制剂制备工艺，提高药效。 方法 正交实验法确定最佳醇沉工艺。结果 药液相对密度为1.20，含醇量为60%，静置时间24 h的醇沉效果最佳。结论 按优化工艺制得的制剂2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷含量和出膏率高，且质量稳定。

[关键词] 安神补脑液；正交设计；淫羊藿苷；制备工艺

[中图分类号] R461 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）10-0048-02

安神补脑液由鹿茸、制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草、大枣、维生素B1等7味药物制成，具有生精补髓、益气养血、强脑安神等功效。适用于肾精不足、气血两亏所致的头晕、乏力、健忘、失眠；神经衰弱症见上述证候者。是临床上常用的成方制剂。虽然《中国药典》2010版一部中收载了该制剂，但“制法”项下仅记载了将“滤液浓缩至适量，加3倍量乙醇，静置，滤过，滤液备用”[1]， 对于醇沉工艺并没有具体的方法，为细化复方工艺，提高复方的药效和生物利用度，现采用正交法对该复方的醇沉工艺进行考察及优化。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型液相色谱系统，包括：高压二元泵（G1311A），可变波长检测器（G1313A），Agilent 1100 series色谱工作站（美国安捷伦科技有限公司）。

1.2 对照品

淫羊藿苷对照品购自中检所，供含量测定用，纯度>98%。

1.3 试剂

乙腈、甲醇均为色谱纯，乙醇为分析纯，购自天津科密欧化学试剂有限公司。

1.4 药材

制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草和大枣等药材购自沈阳市药材市场，经鉴定均为正品。

2 方法与结果

2.1醇沉前提取液的制备

由于药典中未记载该制剂的处方量，根据部颁标准的记载[2]，按处方配比取处方中的制何首乌62.5 g，淫羊藿50 g，干姜 12.5 g，甘草 6.25 g，大枣 12.5 g，精密测定。加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并煎液，滤过，滤液平均分成三份，分别减压浓缩至相对密度为1.15、1.20、1.25时备用。

2.2供试品溶液制备及色谱条件

通过组方分析，该复方醇沉部分的主要药味为何首乌和淫羊藿，因此，主要考察指标为出膏率、2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷）、淫羊藿苷。采用HPLC法对该复方的上述两个成分同时进行含量测定。

2.2.1供试品溶液的制备 将醇沉后的溶液滤过，加水定容至1000 mL摇匀，精密吸取1～10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.2色谱条件 迪马DiamonsilTM C18色谱柱（4.5 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-水为流动相， 梯度洗脱（0～10 min，乙腈体积分数为30%～50%；10～11 min，乙腈体积分数为50%～80%；11～15 min，乙腈体积分数为80%～100%；15～20 min，乙腈体积分数为100%）；流速为1.0 mL/min；检测波长为350 nm；柱温为30℃；进样量25 μL[3]。

2.3醇沉工艺的优化

采用L9（34）正交实验对醇沉条件中的密度、醇浓度及静置时间进行3种水平的考察，确定最佳醇沉方法。其影响因素水平见表1。

表1 醇沉工艺相关因素水平表

按L9（34）正交表安排进行试验。取上述不同相对密度的三份样品分别按正交表安排试验。以出膏率、淫羊藿苷、二苯乙烯苷三个指标进行考察，加权综合评分，其中总分100分，出膏率占20分，淫羊藿苷占40分、二苯乙烯苷占40分。正交分析与加权评分结果见表2、表3。

表2 醇沉条件考察实验结果

表3 方差分析表

注：F0.05（2，2）=19.00； F0.1（2，2）=9.00

直观分析和方差分析结果表明：三个考察因素中静止时间对结果影响最为显著，为主要影响因素；药液相对密度和含醇量对结果影响较小，为次要因素。最佳提取条件为A2B1C3，即药液相对密度为1.20，含醇量为60%，静止时间24 h。

2.4验证试验

称取何首乌（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大枣，共3份，分别加水煎煮3次，第1次2个小时，第2、3次各1个小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.20，加入乙醇使含醇量达到60%，静止放置24 h后分别测定出膏率、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的量，见表4。

表4 验证实验结果

3讨论

原提取工艺是将水提液浓缩至流浸膏，而流浸膏要求浓缩到每1 mL相当于原药材1 g，这对工业生产时质量监控极其不方便，因此，按流浸膏的比例浓缩后检测密度为1.20，因此选择将水提液减压浓缩至相对密度为1.15、1.20、1.25备正交实验使用。检测指标由体积改为密度，为工业生产质量监控提供方便。

正交实验结果的确定方法是无显著性差异因素选择最节能水平，有显著性差异因素选择结果最高的因素水平。由于正交结果表明药液密度和含醇量两个因素无显著性差异，因此按节能原则选择水平：药液密度选择1.20，因为其比1.15加甲醇量相对较少，且比1.25需要耗费的能源少；选择60%含醇量是因为其加醇量相对较少，节省资源。另外，静置时间因素由于其三个水平的结果有显著性差异，因此选择正交实验结果最好的水平，即24 h为最佳静置时间。

根据传统的复方制备工艺，本实验仅考察优化何首乌（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大枣的提取后的醇沉工艺，未对贵重药材鹿茸的制备工艺进行优化。优化后的醇沉工艺可以为该复方今后的制剂工艺研究提供依据。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010版一部[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010：715-716.

[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第三册[S]. 1991：73-78.

[3] 王伟，许祺，杜秀芳，等. 高效液相色谱法同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量[J]. 河北科技大学学报，2010，31（5）：403-405.endprint

[摘要] 目的 为了优化安神补脑复方制剂制备工艺，提高药效。 方法 正交实验法确定最佳醇沉工艺。结果 药液相对密度为1.20，含醇量为60%，静置时间24 h的醇沉效果最佳。结论 按优化工艺制得的制剂2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷含量和出膏率高，且质量稳定。

[关键词] 安神补脑液；正交设计；淫羊藿苷；制备工艺

[中图分类号] R461 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）10-0048-02

安神补脑液由鹿茸、制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草、大枣、维生素B1等7味药物制成，具有生精补髓、益气养血、强脑安神等功效。适用于肾精不足、气血两亏所致的头晕、乏力、健忘、失眠；神经衰弱症见上述证候者。是临床上常用的成方制剂。虽然《中国药典》2010版一部中收载了该制剂，但“制法”项下仅记载了将“滤液浓缩至适量，加3倍量乙醇，静置，滤过，滤液备用”[1]， 对于醇沉工艺并没有具体的方法，为细化复方工艺，提高复方的药效和生物利用度，现采用正交法对该复方的醇沉工艺进行考察及优化。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型液相色谱系统，包括：高压二元泵（G1311A），可变波长检测器（G1313A），Agilent 1100 series色谱工作站（美国安捷伦科技有限公司）。

1.2 对照品

淫羊藿苷对照品购自中检所，供含量测定用，纯度>98%。

1.3 试剂

乙腈、甲醇均为色谱纯，乙醇为分析纯，购自天津科密欧化学试剂有限公司。

1.4 药材

制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草和大枣等药材购自沈阳市药材市场，经鉴定均为正品。

2 方法与结果

2.1醇沉前提取液的制备

由于药典中未记载该制剂的处方量，根据部颁标准的记载[2]，按处方配比取处方中的制何首乌62.5 g，淫羊藿50 g，干姜 12.5 g，甘草 6.25 g，大枣 12.5 g，精密测定。加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并煎液，滤过，滤液平均分成三份，分别减压浓缩至相对密度为1.15、1.20、1.25时备用。

2.2供试品溶液制备及色谱条件

通过组方分析，该复方醇沉部分的主要药味为何首乌和淫羊藿，因此，主要考察指标为出膏率、2，3，5，4-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷）、淫羊藿苷。采用HPLC法对该复方的上述两个成分同时进行含量测定。

2.2.1供试品溶液的制备 将醇沉后的溶液滤过，加水定容至1000 mL摇匀，精密吸取1～10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.2.2色谱条件 迪马DiamonsilTM C18色谱柱（4.5 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-水为流动相， 梯度洗脱（0～10 min，乙腈体积分数为30%～50%；10～11 min，乙腈体积分数为50%～80%；11～15 min，乙腈体积分数为80%～100%；15～20 min，乙腈体积分数为100%）；流速为1.0 mL/min；检测波长为350 nm；柱温为30℃；进样量25 μL[3]。

2.3醇沉工艺的优化

采用L9（34）正交实验对醇沉条件中的密度、醇浓度及静置时间进行3种水平的考察，确定最佳醇沉方法。其影响因素水平见表1。

表1 醇沉工艺相关因素水平表

按L9（34）正交表安排进行试验。取上述不同相对密度的三份样品分别按正交表安排试验。以出膏率、淫羊藿苷、二苯乙烯苷三个指标进行考察，加权综合评分，其中总分100分，出膏率占20分，淫羊藿苷占40分、二苯乙烯苷占40分。正交分析与加权评分结果见表2、表3。

表2 醇沉条件考察实验结果

表3 方差分析表

注：F0.05（2，2）=19.00； F0.1（2，2）=9.00

直观分析和方差分析结果表明：三个考察因素中静止时间对结果影响最为显著，为主要影响因素；药液相对密度和含醇量对结果影响较小，为次要因素。最佳提取条件为A2B1C3，即药液相对密度为1.20，含醇量为60%，静止时间24 h。

2.4验证试验

称取何首乌（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大枣，共3份，分别加水煎煮3次，第1次2个小时，第2、3次各1个小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.20，加入乙醇使含醇量达到60%，静止放置24 h后分别测定出膏率、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的量，见表4。

表4 验证实验结果

3讨论

原提取工艺是将水提液浓缩至流浸膏，而流浸膏要求浓缩到每1 mL相当于原药材1 g，这对工业生产时质量监控极其不方便，因此，按流浸膏的比例浓缩后检测密度为1.20，因此选择将水提液减压浓缩至相对密度为1.15、1.20、1.25备正交实验使用。检测指标由体积改为密度，为工业生产质量监控提供方便。

正交实验结果的确定方法是无显著性差异因素选择最节能水平，有显著性差异因素选择结果最高的因素水平。由于正交结果表明药液密度和含醇量两个因素无显著性差异，因此按节能原则选择水平：药液密度选择1.20，因为其比1.15加甲醇量相对较少，且比1.25需要耗费的能源少；选择60%含醇量是因为其加醇量相对较少，节省资源。另外，静置时间因素由于其三个水平的结果有显著性差异，因此选择正交实验结果最好的水平，即24 h为最佳静置时间。

根据传统的复方制备工艺，本实验仅考察优化何首乌（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大枣的提取后的醇沉工艺，未对贵重药材鹿茸的制备工艺进行优化。优化后的醇沉工艺可以为该复方今后的制剂工艺研究提供依据。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010版一部[S]. 北京：中国医药科技出版社，2010：715-716.

[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第三册[S]. 1991：73-78.

[3] 王伟，许祺，杜秀芳，等. 高效液相色谱法同时测定安神补脑液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量[J]. 河北科技大学学报，2010，31（5）：403-405.endprint