鱼腥草滴眼液眼局部应用的安全性研究

王群 吴志鸿

目前常用的抗菌性滴眼液多为抗生素类西药，仅鱼腥草滴眼液为中药制剂。鱼腥草性辛微寒，入肺经，有清热解毒之功效［1-2］。《本草纲目》中首次应用鱼腥草之名，言其叶子有腥气，故称之为鱼腥草，其味辛，可“散热毒痈肿”。已有大量实验和临床研究证实，鱼腥草具有明显的抗菌和抗病毒作用，对多种微生物有抑制作用，可用于治疗流行性结膜炎、流行性角结膜炎和病毒性角膜炎等疾病，并取得良好的疗效［3-6］。用于眼科治疗的鱼腥草制剂，多通过滴眼、结膜下注射、雾化熏蒸和静脉点滴等方式发挥作用，其中滴眼液最为常见。鱼腥草滴眼液的有效性已多有报道，但是安全性研究却较少。本研究通过给予大鼠鱼腥草滴眼液局部点眼来观察评价鱼腥草眼角膜局部应用的安全性。

1 材料和方法

1.1 动物与分组

清洁型健康7～8 周雄性SD 大鼠，重120～220 g，由武警总医院实验动物中心提供。实验动物及实验所使用的条件均符合国家科学技术委员会的《实验动物管理条例》。20 只大鼠术前经裂隙灯显微镜检查无眼部异常，按照随机数字表法分为两组，每组各10 只，左眼为实验眼。对照组滴生理盐水(0.9% NaCl)，实验组滴鱼腥草滴眼液(四川升和制药有限公司生产，批号:20010110)，4 次/日(8∶30，12∶30，16∶30，20∶30)，每次1 滴，点眼后使大鼠眼睑闭合10 秒，共观察14 天。

1.2 大鼠行为学变化观察

每天在给予滴眼液点眼后观察大鼠有无抓挠眼部、甩头或频繁眨眼等行为学变化。

1.3 角膜形态变化观察

每天通过裂隙灯显微镜下检查大鼠的结膜、角膜和前节组织的情况，并进行眼前节照相。根据Draize 等的兔眼刺激性实验评分系统并进行改良后，对眼部相应组织受累的程度和面积，变化和反应进行评分。角膜评分:对角膜受累的强度和面积分别进行评分，各为0～4 分，将所得的分值相加后，乘以加权系数得到加权角膜积分。虹膜评分:根据虹膜充血、肿胀、角膜周围充血、出血，虹膜对光刺激反应情况等进行总体打分，为0～3 分，然后乘以加权系数得到加权虹膜积分。结膜评分:对结膜发红、水肿和分泌物分别打分，分别为0～3 分，将所得分值相加后乘以加权系数得到获得加权结膜积分。同时记录其他的损伤，如血管翳(角膜新生血管化)和眼球破裂等［7-8］。具体评分标准见表1。

1.4 结膜和角膜病理标本观察

滴眼后14 天，大鼠腹腔注射10% 水合氯醛(3.5 ml/kg)，麻醉充分后，在眼科手术显微镜下分离结膜组织和角膜组织，4%多聚甲醛固定后，常规制作石蜡切片并进行HE 染色，显微镜观察并进行照相。

1.5 统计学方法

使用IBM SPSS 20.0(IBM SPSS，芝加哥，IL)软件进行统计学分析。统计学方法为χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 行为学观察

实验组给予鱼腥草滴眼液后大鼠即有抓挠眼部的行为，半小时后行为消失。对照组大鼠也出现类似症状。

2.2 角膜形态变化观察

滴眼后第14 天，与实验开始前的前节照相比较，未见明显瞬目、流泪等症状，耐受性好。两组大鼠滴眼后行为学无明显差异，所有鼠眼接受药物点眼后用裂隙灯显微镜观察，未发现结膜充血、坏死及角膜混浊。观察期内各组实验鼠结膜和巩膜未见充血、水肿及坏死，角膜均保持透明，无水肿及内皮皱褶。虹膜表面无渗出、出血及坏死，瞳孔对光反射灵敏。晶状体透明，表面无渗出物。直接检眼镜观察玻璃体未见混浊，视网膜血管未见缩窄，视网膜平伏，未见渗出及出血(见图1)。两组角膜荧光素钠染色未见明显点染，角膜上皮完整(见图2)。两组大鼠结膜、角膜和虹膜Draize 评分采用χ2检验统计分析后提示差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 Draize 眼刺激性试验评分标准

图1 裂隙灯前节照相

图2 角膜荧光素钠染色后裂隙灯前节照相

2.3 HE 染色光镜观察

HE 染色光镜观察发现两组大鼠结膜组织完整，未见明显炎性细胞浸润(见图3)。两组大鼠角膜上皮层完整，基质纤维排列规则，未见明显炎性细胞浸润(见图4)。

3 讨论

图3 大鼠结膜HE 染色结果(HE 染色，×400)

图4 大鼠角膜HE 染色结果(HE 染色，×400)

药物在眼内产生毒副作用通常是由功能性改变到亚微观形态学改变，再到微观形态学改变，最后到肉眼可见的改变。角膜是眼科药物吸收的主要途径，尤其是滴眼液剂型药物的直接作用部位，也必然是药物毒性损伤的主要组织。眼科药物对角膜的毒性研究主要通过动物实验和临床观察来完成。本实验为了验证鱼腥草滴眼液眼局部应用的安全性，利用SD 大鼠进行在体实验，观察鱼腥草滴眼液点眼后的刺激性。刺激性是指在通过非口服给药方式给药后，药物对给药部位产生的不可逆的炎性反应，如果给药部位发生不可逆的损伤则称该药物对给药部分具有腐蚀性。本实验中对滴眼后大鼠结膜、角膜和虹膜组织的形态学进行了观察，并通过Draize 评分系统评估鱼腥草滴眼液的局部刺激性。结果发现鱼腥草滴眼液组和生理盐水组的差异不具有统计学意义，即鱼腥草滴眼液局部应用无明显刺激性。

大鼠在接受鱼腥草滴眼液点眼后，结膜、角膜和眼内组织形态学上都未观察到异常变化，病理切片组织结构正常，结膜上皮完整，角膜上皮完整，基质胶原排列整齐，未见炎性细胞浸润。鱼腥草滴眼液给药后，角膜荧光素钠染色结果阴性，角膜上皮完整。综上所述鱼腥草滴眼液局部应用比较安全。本研究初步分析了鱼腥草滴眼液的眼部用药安全性，后继需要进行一系列的研究，系统探讨鱼腥草滴眼液安全性，如检测不同浓度鱼腥草滴眼液对结膜上皮细胞和角膜上皮细胞的毒性作用，确定安全用药浓度区间;对鱼腥草滴眼液结膜下注射后的大鼠进行电生理检查，了解鱼腥草滴眼液是否对视网膜视神经功能产生影响;对鱼腥草滴眼液结膜下注射后的眼内组织进行病理学检查，了解鱼腥草滴眼液是否引起眼底组织的形态变化等。

［1］孙思邈.银海精微［M］.北京:人民卫生出版社，1955:17-18.

［2］杨磊.鱼腥草滴眼液的制备及临床应用［J］.中国药业，2006，15(11):47.

［3］王本祥.现代中药药理学［M］.天津:科技技术出版社，1997:252-257.

［4］李翔，王明芳，肖放，等.鱼腥草滴眼液治疗流行性角膜结膜炎［J］.中国中医眼科杂志，2000，10(4):211-214.

［5］李翔，王明芳，谢学军，等.鱼腥草滴眼液治疗急性卡他性结膜炎［J］.眼科新进展，2001，21(6):417-419.

［6］赵海滨，彭清华，吴权龙，等.鱼腥草滴眼液治疗单纯疱疹性角膜炎的实验研究［J］.中国中医眼科杂志，2002，12(3):129-131.

［7］NAS committee for the revision of NAS Publication.Principles and Procedures for Evaluating the Toxitity of House-hold Substances［M］.Washington.D.C.，National Academy of sciences，1977:41-54.

［8］石磊.靶向Bcl-2 小分子化合物纳米悬混液对碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制作用及其作用机制研究［D］.北京:解放军医学院，2013:17-20.