基于金黄膏体外透皮吸收实验探讨其透皮系统的药对配伍规律

2014-04-21曹颖王红刘俊红韩俊泉刘斌李棣华吕沅姗

环球中医药 2014年9期

曹颖王红刘俊红韩俊泉刘斌李棣华吕沅姗

如意金黄散出自明代陈实功编著的《外科正宗》，由大黄、黄柏、姜黄、白芷、天花粉、天南星、陈皮、甘草、苍术、厚朴组成，为2010年版《中华人民共和国药典》(一部)收录的品种，具有活血散瘀、消肿止痛之功效，临床用于治疗疮疡肿痛、丹毒流注、跌打损伤等证［2］。如意金黄散经剂改制备为外用膏剂的金黄膏，应用于临床多年，疗效确切。本实验以黄柏中小檗碱为指标成分，考察了金黄散全方组及缺姜黄、白芷组和缺姜黄、白芷、天南星、陈皮、厚朴组膏剂中盐酸小檗碱的体外经皮渗透行为，并探讨其不同药对配伍对其透皮效果的影响。

1 材料与方法

1.1 渗透屏障

雄性wistar 大鼠200～250 g，8 只，2012年3月27日购进，7 周龄，由中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所动物实验中心提供。将大鼠麻醉后固定四肢，剪去腹部正中线两侧的鼠毛，再用电动剃须刀剃净绒毛后迅速剥皮，小心剔除皮下脂肪及组织，用滤纸擦拭干净，得离体鼠皮作为渗透屏障，放入冰箱(－20℃)冷冻保存，共16 块。

1.2 药物和试剂

盐酸小檗碱对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号:110713-200911。

金黄膏及缺药膏剂，天津市中医药大学第二附属医院制剂室提供。金黄散全方组组成为大黄160 g、黄柏160 g、姜黄160 g、白芷160 g、天花粉320 g、天南星64 g、陈皮64 g、甘草64 g、苍术64 g、厚朴64 g;缺药方A 组，缺姜黄、白芷;缺药方B 组，缺姜黄、白芷、天南星、陈皮、厚朴。

甲醇、乙腈为色谱纯，购自天津市康科德科技有限公司，磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠为分析纯。

1.3 仪器

TK-12B 型透皮扩散试验仪(上海锴凯科技贸易有限公司)，SSI PC2000 型高效液相色谱仪(美国科学系统公司)，EZChrom Elite Client/Server 色谱工作站。

1.4 色谱条件

色谱柱:Apollo C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相:A 相为乙腈，B 相为0.1%磷酸水，二元梯度洗脱:0～5 分钟，20～40A;5～20 分钟，40～40A，流速1.0 ml/min，进样量为20 μl，检测波长:346 nm，柱温:30℃。该色谱条件下，理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于150000。

1.5 对照品溶液

精密称定盐酸小檗碱，加入容量瓶，用乙腈配制成浓度为0.290 mg/ml 的溶液，作为储备液。

1.6 供试液

由体外透皮试验所得接受液，加入梨形蒸馏瓶，分别于70℃水浴减压浓缩至干，精密吸取1 ml乙腈溶解，0.45 μm 微孔滤膜，作为供试液。

1.7 渗透扩散装置及实验方法

将鼠皮从冰箱取出，放至室温，在接收池中放入磁力搅拌子，将鼠皮固定于扩散池与接收池之间，真皮面向接收池。试验时，将精密称量的膏剂涂于处理好的鼠皮角质层，注满接收液(30%乙醇/磷酸盐缓冲溶液，pH=6.8)，液面恰与皮肤真皮层接触，排除气泡。开动磁力搅拌器和恒温水浴，磁力搅拌转速设定为400 r/min，水浴温度(37±0.5)℃，扩散池容积6 ml，扩散面积为2.92 cm2。于32 小时内的3、5、7、9、24、32 小时分段取样，补充相应的空白接受液，根据浓度吸取不同体积注入色谱仪，按照上述色谱条件测定小檗碱含量，

1.8 主要指标

将金黄散全方组、缺药方A 组、缺药方B 组药膏分别作透皮吸收试验，所加药膏量根据盐酸小檗碱含量确定，保证其基本一致。按1.7 项下方法试验，按下式计算不同膏剂不同时间段盐酸小檗碱的单位面积累积透过量Q。其中Q=(Mn+∑Mp)/A，式中Q 为t 时刻的累积透过量(μg/cm2)，Mn 为第n个取样点测得的药物透过量(μg)，∑Mp 为之前测得的药物透过量之和(μg);A(2.92 cm2)为皮肤扩散面积。每组平行做3 次，求Q 的平均值。

1.9 统计学方法

用Excel 统计数据，以经皮累计渗透量Q 对时间t 进行回归得线性方程，根据方程求出稳态透皮速率J(μg/cm2·h)和透皮时滞tlag(小时)。

2 结果

三组膏剂不同时刻各自平行做3 次测量，检测经皮累计渗透量Q，求平均值，结果见表1。然后以经皮累计渗透量Q 对t 进行回归得线性方程，根据方程求出稳态透皮速率J(μg/cm2·h)和透皮时滞tlag(小时)，见表2。

通过观察三组膏剂的稳态透皮速率J、透皮时滞tlag、32 小时内盐酸小檗碱累积透过量Q/32h，可以看出缺药方A 组和缺药方B 组的稳态透皮速率、透皮时滞、32 小时内小檗碱单位面积累积透过量及透过率都较全方高。金黄散全方组的稳态透皮速率及32 小时内盐酸小檗碱累积透过量都低于缺姜黄、白芷的缺药方A 组，说明姜黄、白芷对小檗碱的皮肤渗透有抑制作用，缺药方A 组和缺药方B 组的稳态透皮速率及32 小时内盐酸小檗碱累积透过量差别不大，有天南星、陈皮、厚朴的缺药方A 组的透皮时滞低于缺药方B 组，说明天南星、陈皮、厚朴对小檗碱的皮肤渗透有一定促进作用。

3 讨论

金黄膏中的姜黄，辛、苦，温，归肝、脾经，活血行气，通经止痛可用于治疗气滞血瘀痛症和风湿痹痛，其中姜黄素有抗炎作用，对细菌有抑制作用，为臣药;白芷，辛，温，归肺、胃、大肠经，解表散寒，祛风止痛，通鼻窍，燥湿止带，消肿排脓，可用于治疗风寒感冒，头痛，牙痛，风湿痹痛，鼻渊，带下症，疮痈肿毒，皮肤风湿瘙痒，为臣药;天南星，苦、辛、温。归肺、肝、脾经，燥湿化痰，祛风解痉，外敷散结消肿止痛，用于治疗湿痰，寒痰证，风痰眩晕，中风，癫痫，破伤风，痈疽肿毒，蛇虫咬伤;陈皮，辛、苦，温。归脾、肺经，理气健脾，燥湿化痰，用于治疗脾胃气滞证，呕吐，呃逆，湿痰、寒痰咳嗽，胸痹;厚朴，苦、辛，温。归脾、胃、肺、大肠经，燥湿消痰，下气除满，用于治疗湿阻中焦，脘腹胀满，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳，此三药皆辛苦温，辛以散结，苦以燥湿，温以通滞，共为佐药［3］。

姜黄、白芷对小檗碱皮肤渗透的抑制作用实则说明了此药对对金黄膏发挥疗效起到了促进作用。陈实功的如意金黄散的组成用于阳证、热证疮疡，从组方看辛温的药反而味和量都大。中药讲究君臣佐使，使药作为引经药，使药效直达病所，所以分析辛温的姜黄和白芷这一组药为“如意金黄散”的透皮促渗之药［4］。同时根据四气五味理论，姜黄、白芷同为辛温之品，具发散、行气之功，可散邪于表，给邪出路。

对姜黄、白芷药理作用的研究证明具有镇痛、抗炎的作用［5-6］，透皮给药而发挥作用。一般的透皮给药系统，是指药物以一定的速率透过皮肤，经毛细血管吸收进入全身血液循环达到有效浓度，产生疗效，起到全身治疗作用。还有一种情况，有些药物与角质层亲和力大或能与角质层发生特异结合，在皮肤内积聚储存，形成“储库效应”，向皮肤深部扩散的比较缓慢。其药理作用在局部发挥的比较明显，在全身的治疗作用不明显。金黄膏应用于临床多年，对于阳证、热证的治疗效果显著。如果小檗碱也有这种可能性，大部分积聚在皮肤，发挥抑菌消炎作用，一小部分透过皮肤向深部扩散，对全身起到治疗作用，恰好与金黄膏的适应症相吻合。因此，实验说明姜黄、白芷对小檗碱的渗透有抑制作用，正是其“储库效应”和散邪于表，给邪出路的体现。