“通莲汤”联合微波热疗与单纯微波热疗对食管癌患者血清p53和癌组织survivin表达影响的对比研究

陈树山 贾永森 田福玲 闫昕 曹慧娟 秦丽娟 王召龙 何龙

（1.唐山市中医医院，河北唐山 063000；2.河北联合大学中医学院，河北唐山 063000；3.河北联合大学基础医学院，河北唐山 063000）

“通莲汤”联合微波热疗与单纯微波热疗对食管癌患者血清p53和癌组织survivin表达影响的对比研究

陈树山1贾永森2田福玲2闫昕2曹慧娟2秦丽娟3王召龙1何龙1

（1.唐山市中医医院，河北唐山 063000；2.河北联合大学中医学院，河北唐山 063000；3.河北联合大学基础医学院，河北唐山 063000）

目的：比较通莲汤联合微波热疗与单纯微波热疗对食管癌患者血清肿瘤抑制蛋白p53（简称p53）和活体癌组织生存素（survivin）影响的差异。方法：取38例局部中晚期食管癌患者血清，随机分为对照组（17例）和观察组（21例）。2组均行微波热疗，观察组加服中药通莲汤。应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者治疗前后血清p53；应用免疫组化两步法检测患者活体癌组织survivin蛋白。结果：对照组p53阳性患者7例，观察组4例，组间比较差异显著；观察组活体癌组织survivin蛋白阳性表达率显著低于对照组。结论：通莲汤联合微波热疗能显著抑制食管癌患者血清p53和活体癌组织survivin蛋白表达，效果优于单纯微波热疗。

食管癌 微波热疗 通莲汤 p53 survivin

我国属于食管癌高发国家，发病人数、患病率、死亡率均位居世界首位[1]。笔者应用微波热疗联合自拟“通莲汤”治疗老年中晚期食管癌，取得良好的疗效[2]。研究表明，肿瘤组织抑制蛋白p53（简称p53）和生存素（survivin）的过度表达可抑制食管癌细胞凋亡，促进癌细胞生长[3]，是预测该病进展的重要指标。本研究进一步观察了通莲汤配合微波热疗与单纯微波热疗对食管癌患者血清p53和活体癌组织survivin表达影响的差异。

1 临床资料

选取笔者所在医院2010年8月～2012年8月确诊为食管癌的患者38例。纳入标准：符合食管癌临床诊断标准或病理诊断依据；临床病历资料完整；放、化疗失败复发转移者或年龄大、体质弱不能耐受放、化疗；无热疗禁忌证。38例患者随机分为对照组（17例）和观察组（21例）。观察组：男14例，女7例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期6例，Ⅲ期Ⅳ15例；分化程度高3例，中4例，低14例。对照组：男10例，女7例；TNM分期Ⅰ期和Ⅱ期5例，Ⅲ期Ⅳ12例；分化程度高3例，中3例，低11例。2组基线资料比较，无显著性差异（P＞0.05）。

2 治疗方法

2.1 对照组采用微波热疗[2]。每次热疗时间90min，每次间隔＞72h，4次为1个疗程。

2.2 观察组微波热疗同对照组。加服活血化瘀、凉血解毒中药通莲汤。药物组成：白花蛇舌草15g，桃仁15g，红花8g，升麻15g，槟榔8g，半枝莲15g。水煎服，每日1剂，分2次服。自热疗开始至结束后1个月。

3 疗效观察

3.1 观察指标比较2组治疗后血清p53抗体和癌组织survivin蛋白表达。

3.1.1 标本采集血清标本：38例食管癌患者抽取空腹静脉血5mL，以3000r/min离心5min，分离血清后置-20℃保存。活体癌组织标本：采用拉网细胞学法，使用外置网套的橡胶气囊通过食管，病变组织被网套刮下涂片。

3.1.2 试剂及设备MTC-3D微波热疗机（南京启亚医疗设备有限公司），酶标仪（NOVAPATH-450，Bio-Tek公司），抗突变型p53酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒（美国CST公司），survivin兔抗人多克隆抗体（美国CST公司）。

3.1.3 检测方法应用ELISA检测血清p53抗体。使用抗p53试剂盒，操作按说明书进行，用酶标仪（波长为450nm）测定吸光值。根据标准曲线和公式计算血清p53抗体的半定量值（kU/L），参考值：血清p53抗体＜0.85kU/L为阴性，0.85～1.15kU/L为可疑阳性，＞1.15kU/L为阳性。

采用En Vision两步法进行免疫组化染色，分析患者癌组织survivin蛋白表达。步骤按说明书进行，所有切片均在同一光强度，同一放大倍数下进行图像分析，染色阳性物质呈棕黄色颗粒状。随机计数10个视野，记录每个视野的阳性表达率（阳性细胞数/全视野细胞数），取其均数作为每例样本阳性表达率的评定依据。所占比率为0～5%为阴性（-），5%～25%为弱阳性（+），25%～50%为中度阳性（++），50%以上为强阳性（+++）。

3.2 统计学方法使用SPSS18.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3.3 治疗结果

3.3.1 治疗前后2组患者血清p53抗体的检测

治疗前2组患者血清p53阳性率比较无显著性差异（P＞0.05）。治疗后观察组较之对照组p53阳性病例数显著减少，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 观察组与对照组患者治疗前后血清p53抗体表达比较（v=1）

3.3.2 治疗后2组患者活体癌组织survivin蛋白表达见表2。

表2 观察组与对照组活体癌组织survivin蛋白阳性细胞表达率（v=1）

4 讨论

食管癌属中医学“噎膈”范畴，系由于饮食不节，情志失调，正气内虚所致，由此产生气滞痰凝、热毒蕴结、血瘀不化。通莲汤活血祛瘀，清热解毒，破气导滞，升清降浊，胃气乃通，获得国家发明专利[4]。肿瘤微波热疗是近三十年来迅速发展的一门交叉学科，是加热灭活癌细胞的有效治疗新方法，可以直接杀伤肿瘤细胞，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成，提高机体免疫功能[5]。笔者将两者结合用于临床食管癌患者，观察了该治疗方案对患者血清p53和活体癌组织survivin的影响。

研究发现大多数恶性肿瘤患者的血清中均检测到p53抗体。王晖等[6]研究表明，食管癌患者血清抗p53抗体的阳性率明显高于正常人，所以认为检测血清中的p53抗体可以作为食管癌辅助诊断的指标。survivin基因是近年来发现的一种新的抗凋亡因子，是凋亡蛋白抑制因子的家族成员，可对抗G2/ M期诱导的凋亡，在癌组织中过表达可克服凋亡检测点，由于survivin基因对凋亡的抑制，细胞得以异常增殖及恶性转化，造成肿瘤发生发展。有研究显示，食管癌组织中的survivin和p53具有相似表达趋势[7]，该研究为survivin和p53作为联合靶点治疗食管癌提供了理论依据。

本研究观察到食管癌患者经通莲汤联合微波热疗后p53阳性率较之单纯微波热疗组显著降低，表明检测食管癌患者血清p53抗体对食管癌的治疗效果评价有一定参考价值。本研究通过拉网细胞学法提取到活体癌组织，经免疫组化法检测出survivin基因在中药联合热疗治疗后，阳性率显著下降，较之单纯热疗组具有显著性差异。

[1]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics. CA Cancer J Clin，2011，61（2）：69

[2]陈树山，贾永森，秦丽娟，等.通莲汤联合微波热疗治疗老年中晚期食管癌.长春中医药大学学报，2013，29（4）：585

[3]Chang E，Donahue J，Smith A，et al.Loss of p53，rather than beta-catenin overexpression，induces survivinmediated resistance to apoptosisin an esophageal cancer cell line.J Thorac Cardiovasc Surg，2010，140 （1）：225

[4]贾永森，马会霞，王志文，等.治疗食管癌的活血行气中药制剂及其制备方法.中国：ZL201110308544.0，2013年4 月10日

[5]张文征，张翠莲，陈信义.微波热疗治疗肿瘤的临床应用体会.中国医药指南，2012，10（21）：70

[6]王晖，王胜.食管癌患者p53表达的临床意义.中国现代医生，2012，50（20）：136

[7]赵文鹏，路平，苗战会，等.p53、survivin在食管癌中的作用.现代生物医学进展，2010，10（6）：1140

R735.1文献识别码A

1672-397X（2014）03-0034-02

陈树山（1968-），男，本科学历，主治医师，从事外科临床研究。

贾永森，jysen@163.com

2013-12-05

编辑：韦杭吴宁

河北省中医药管理局科研计划项目（2013236）；唐山市科学技术研究与发展计划项目（121302115a）