槐米中酚酸类化学成分的研究*

刘丽丽，李晓霞，陈玥，孙瑾，刘二伟，张祎

（天津市中药化学与分析重点实验室，天津 300193）

槐米中酚酸类化学成分的研究*

刘丽丽，李晓霞，陈玥，孙瑾，刘二伟，张祎

（天津市中药化学与分析重点实验室，天津 300193）

[目的]对国槐（Sophora japonica L.）米中的酚酸类成分进行研究，为进一步开发利用该植物资源提供依据。[方法]采用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及高效液相色谱法等方法进行分离纯化，并通过理化性质及光谱分析鉴定化合物的结构。[结果]从国槐米70%的乙醇提取物中分离鉴定了5个酚酸类化合物，分别为3，4-二羟基苯甲酸（1）、原儿茶酸甲酯（2）、没食子酸（3）、4-甲氧基-3，5-羟基苯甲酸（4）、枸橼苦素（5）。[结论]2、3、5为从槐属中首次分离得到的化合物。

槐米；酚酸类成分；结构鉴定

国槐（Sophora japonica L.）是豆目蝶形花科槐属植物，别称槐树、槐蕊、豆槐、白槐、细叶槐、金药材、护房树及家槐，在中国主产于河北、河南、江苏、广东、广西等地。其干燥花蕾被称为国槐米，性微寒、味苦，具有凉血、止血，清肝泻火等功效，用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕[1]。主要含有黄酮类化合物。笔者在对其化学成分研究的过程中，分离得到了5个酚酸类单体化合物（1～5），利用与文献类似的方法对结构进行了鉴定[2-3]。其中，2、3、5为从槐属中首次分离得到的化合物。

1 仪器与材料

安捷伦6520 Q-TOF LC/MS；Bruker 500 MR超导核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）。柱层析硅胶（200-300目）、薄层层析硅胶H（青岛海洋化工厂），薄层色谱硅胶预板、高效色谱用硅胶GF254（天津思利达科技有限公司），ODS（日本FujiSilisiaChemical公司），Sephadex LH-20（瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB公司），D101大孔吸附树脂（天津海光化工有限公司），Cosmosil 5 C18-MS-II分析柱及制备柱（日本Nacalai Tesque公司）。旋转蒸发仪（德国IKA公司，IKA RV10、上海亚荣生化仪器厂，RE52CS），高速离心机（美国Beckman Coulter有限公司，ALLEGRA-64R）。

实验所用试剂（色谱纯或分析纯）均为天津康科德科技有限公司产品。

所用药材国槐米于2010年10月购自安国市场，由天津中医药大学中药标本馆李天祥副教授鉴定为国槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾。植物标本存放于天津中医药大学中医药研究中心。

2 提取分离

取干燥的槐米8.0 kg，用5、3、3倍量体积分数70%的乙醇溶液加热回流提取3次，每次分别为2、2、1.5 h，减压回收溶剂，得到浸膏2.3 kg。取浸膏670 g，用EtOAc-H2O萃取，得到EtOAc、EtOAc层沉淀及H2O层萃取物分别为78、197、385 g。取上述EtOAc萃取物（50 g）经硅胶柱层析[CHCl3-MeOH（100∶0→100∶2→100∶3→100∶5，V/V）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1，V/V/V，下层）→MeOH]，共得7个组分（Fr.1～7）。Fraction 5（7.0 g）经ODS柱层析[MeOH-H2O（30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]，得到12个组分（Fr.5-1～12）。Fraction 5-2（152.1 mg）经制备高效液相色谱法（PHPLC）分离制备，得到3，4-二羟基苯甲酸（1，104.1 mg）及4-甲氧基-3，5-羟基苯甲酸（4，5.0 mg）。Fraction 5-6经Sephadex LH-20及硅胶柱层析，得到枸橼苦素（5，7.9 mg）。Fraction 6（7.5 g）经ODS柱层析[MeOH-H2O（10∶90→45∶55→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]得到12个组分（Fr.6-1～12）。Fraction 6-1（139.8 mg）经PHPLC [MeOH-H2O（12∶88，V/V）]分离制备，得到没食子酸（3，7.3 mg）。Fraction 7（7.0 g）经ODS柱层析[MeOHH2O（10∶90→45∶55→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]共得到12个组分（Fr.7-1～12）。Fraction 7-3（1 318.7 mg）经PHPLC制备，得到原儿茶酸甲酯（2，7.3 mg）。

3 结构鉴定

从槐米中分离得到的化合物结构鉴定见图1。

图1 从槐米中分离得到的化合物

化合物1：白色粉末。高分辨电喷雾四极杆飞行时间质谱（Q-TOF-ESI-MS）给出其准分子离子峰m/z 153.019 8[M-H]-，确定其分子式为C7H6O4（calcd for C7H5O4，153.019 3）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.57（1H，br.s，H-2），6.91（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.55（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：123.0（C-1），117.8（C-2），145.9（C-3），151.5（C-4），115.9（C-5），124.2（C-6），170.6（C-7）。上述1H-NMR和13C-NMR谱数据与文献[4]中报道的3，4-二羟基苯甲酸的数据基本一致，故鉴定化合物1为3，4-二羟基苯甲酸。通过异核单量子关系（HSQC）谱的测定，纠正了文献[4]中该化合物C-2位（δC115.7）及C-5位（δC117.7）的化学位移值。

化合物2：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 167.035 2[M-H]-，确定其分子式为C8H8O4（calcd for C8H7O4，167.035 0）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.42（1H，br.s，H-2），6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.41（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6），3.83（3H，s，7-OCH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.6（C-1），117.5（C-2），146.2（C-3），151.8（C-4），115.9（C-5），123.7（C-6），168.9（C-7），52.3（7-OCH3）。上述1H-NMR和13C-NMR谱数据与文献[5]中报道的原儿茶酸甲酯的数据基本一致，故鉴定化合物2为原儿茶酸甲酯。通过HSQC谱的测定，纠正了文献[5]中该化合物C-2位（δC115.9）及C-5位（δC117.5）的化学位移值。

化合物3：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准子分离子峰m/z 169.013 4[M-H]-，确定其分子式为C7H6O5（calcd for C7H5O5，169.014 2）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.06（2H，s，H-2,6）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.2（C-1），110.4（C-2,6），146.4（C-3,5），139.6（C-4），170.6（C-7）。上述1H-NMR谱数据与文献[6]中报道的没食子酸的数据基本一致，故鉴定化合物3为没食子酸。

化合物4：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 183.031 2[M-H]-，确定其分子式为C8H8O5（calcd for C8H7O5，183.029 9）。1HNMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.04（2H，s，H-2，6），3.85（3H，s，4-OCH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：128.1（C-1），110.4（C-2，6），151.6（C-3，5），140.9（C-4），170.5（C-7），60.8（4-OCH3）。通过与化合物3的13C-NMR谱数据相对照，羧基碳的数据没有发生明显的变化，提示该羧基没有甲酯化。同时，结合甲氧基碳的化学位移值[δ 60.8，明显低于甲酯化甲氧基碳的化学位移值（～53）]，推测甲氧基与4位相连。上述1H-NMR和13C-NMR谱数据与文献[7]中报道的4-甲氧基-3，5-羟基苯甲酸的数据基本一致，故鉴定化合物4为4-甲氧基-3，5-羟基苯甲酸。

化合物5：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 361.107 6[M+Cl]-，确定其分子式为C16H22O7（calcd for C16H22O7Cl，361.106 0）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.82（1H，br.s，H-2），7.08（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.72（1H，br.d，ca.J=8 Hz，H-6），3.32（2H，m，H2-7），5.95（1H，m，H-8），[5.02（1H，br.d，ca.J=11 Hz）、5.05（1H，br.d，ca.J=17 Hz），H2-9]，4.84（1H，d，J=7.5 Hz，H-1'），3.48（1H，dd，J=7.5、9.0 Hz，H-2'），3.47（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-3'），3.39（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4'），3.38（1H，m，H-5'），[3.68（1H，dd，J=4.0、12.0 Hz），3.86（1H，br. d，ca.J=12 Hz），H2-6']。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：136.5（C-1），114.2（C-2），150.8（C-3），146.4（C-4），118.3（C-5），122.1（C-6），40.8（C-7），139.0（C-8），115.9（C-9），103.1（C-1'），75.0（C-2'），77.9（C-3'），71.4（C-4'），78.2（C-5'），62.6（C-6'）。上述1HNMR和13C-NMR谱数据与文献[8]中报道的枸橼苦素的数据基本一致，故鉴定化合物5为枸橼苦素。

参考文献：

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2010：83.

[2]吴帅,刘二伟,张祎,等.川续断中化学成分的研究[J].天津中医药大学学报,2010,29(3):147-150.

[3]吴克磊,康利平,熊呈琦,等.蒺藜全草中甾体皂苷类化学成分研究[J].天津中医药大学学报,2012,31(4):225-228.

[4]刘轩,张彬锋,侴桂新,等.白茅根的化学成分研究[J].中国中药杂志,2012,37(15):2296-2230.

[5]李奕星,左文健,王辉,等.异叶三宝木枝条的化学成分研究[J].中国药物化学杂志,2012,22(2):120-123.

[6]梁耀光,徐巧林,谢海辉,等.芒果核仁的化学成分及其抑菌活性[J].热带亚热带植物学报,2010,18(4):445-448.

[7]章为,徐康平,周应军,等.两色紫金牛化学成分研究[J].中南药学,2007,5(5):444-448.

[8]尹永芹,沈志滨,孔令义.番薯块根化学成分研究[J].中药材,2012,35(6):913-917.

Study on phenolic acids from Flos Sophorae

LIU Li-li,LI Xiao-xia,CHEN Yue,SUN Jin,LIU Er-wei,ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin, Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the phenoic acids of Flos Sophorae for further research and development. [Methods]The chemical components were obtained by using chromatographies such as silica gel,ODS,Sephadex LH-20 and HPLC,and identified by the chemical and physical methods,especially spectral analysis.[Results]Five phenoic acids were obtained and identified as 3,4-dihydroxybenzoic acid(1),protocatechuic acid methyl ester(2), gallic acid(3),4-methoxy-3,5-dihydroxybenzoic acid(4),and citrusin C(5),respectively.[Conclusion]Compounds 2,3,and 5 are obtained from sophora genus firstly.

Flos Sophorae;phenolic acid;structural elucidation

R284.2

A

1673-9043（2014）01-0039-03

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.13

2013-09-06）

国家自然基金项目（81202995）；国家科技重大专项项目-重大新药创制（2011ZX09307-002-01）；新世纪优秀人才支持计划资助项目（NCET-12-1069）。

刘丽丽（1986-），女，硕士研究生，主要从事中药化学研究。

张祎，E-mail zhwwxzh@hotmail.com。