复方降脂软胶囊质量标准初步研究

苏德奇， 刘 涛， 马 龙

（新疆医科大学公共卫生学院， 新疆 乌鲁木齐 830011）

复方降脂软胶囊质量标准初步研究

苏德奇， 刘 涛， 马 龙*

（新疆医科大学公共卫生学院， 新疆 乌鲁木齐 830011）

目的 制定复方降脂软胶囊 （番茄红素、葡萄籽提取物、葵花籽油） 的质量标准，并对制剂的稳定性进行初步研究。 方法 高效液相色谱法测定软胶囊中番茄红素， 色谱条件为 Kromasil C18色谱柱 （150mm×4.6 mm， 5 μm） ，流动相为乙腈-甲醇 （50 ∶50）， 体积流量 1 mL/min， 检测波长为 472 nm， 柱温 30 ℃。 采用加速试验初步观察制剂稳定性。 结果 高效液相色谱法测定番茄红素的线性范围为 0.200 ～20.00 μg/mL， r=0.999 6； 平均加样回收率为101.2%， 标准偏差 （RSD） 为 1.09%； 贮存 1、 2、 3、 6 个月后， 软胶囊中番茄红素平均含有量分别为7.495 8、7.492 4、 7.501 3、 7.488 6 mg/粒， RSD为 1.29%。 结论 复方降脂软胶囊制剂性质稳定， 功效成分番茄红素定量测定方法专属性强、简便、可靠、测定结果准确。

降脂胶囊；番茄红素；葡萄籽提取物；质量标准；稳定性

随着社会的发展和人们生活方式的改变，心脑血管疾病已成为人类健康的头号 “杀手”， 高脂血症是导致动脉粥样硬化、冠心病、脑卒中等心脑血管疾病的首要危险因素［1］。 番茄红素 （ lycopene） 是 类 胡 萝卜 素 的 一种， 具 有猝灭单线态氧和清除自由基、预防冠心病的发生、抗癌和活化免疫细胞等多种生理活性，已成为研究与开发的热点［2-5］； 葡萄籽提取物 （ Grape Seed Extract， GSPE） 具有抗氧化性和清除氧自由基等作用，可以有效地保护心血管系统， 具有降血脂、 预防 高 血 压、 抗肿瘤、 抗辐 射 功效［6-8］。新疆是我国番茄和葡萄种植面积最大的省区，葡萄及番茄多以鲜食、制干和制酱为主，以酿酒和制汁为辅，而酿酒榨汁及制酱后的废渣多做饲料处理，科技水平低，经济效益不高，丰富的资源未能综合利用。课题组利用从番茄及葡萄加工副产品-番茄皮渣和葡萄皮渣中提取的番茄红素和葡萄籽提取物为主要功效成分， 研制了保健食品-复方降脂软胶囊。本实验对胶囊的质量标准，制剂的稳定性进行了探讨。

1 材料和方法

1.1 材料来源 复方降脂软胶囊为实验室小试产品 （批号： 20110911， 20110920， 20110927）， 规格 为 0.5 g/粒，30 粒/瓶。

1.2 仪器与试剂 LC-6AD高效液相色谱仪， SPD-20A型紫外检测器， CBM-20A色 谱工作 站 （ 岛津 公 司） 。 Millipor超纯水仪 （乌鲁木齐祥生仪器有限公司）， XS105 型十万分之一电子天平 （梅特勒-托利多上海有限公司）， 冰乙酸（天津市富宇精细化工有限公司）； 番茄红素对照品 （sigma公司， 批号 12550-1085， 纯度 ＞95%）； 甲醇 （色谱纯， 美国， Fisher实验器材有限公司）； 乙腈 （色谱纯， 天津康科德）； 焦性没食子酸 （分析纯， 成都贝斯特试剂有限公司）， 二氯甲烷 （分析纯， 淄博天德精细化工）； 实验用水均为超纯水。

2 实验方法与结果

2.1 软胶囊中功效成分检测

2.1.1 胶囊中葡萄籽提取物原花青素测定［9-10］按照文献方法测定胶囊中葡萄籽原花青素，要求原花青素含有量不低于 80.0 mg/g， 实测平均含有量为 87.9 mg/g（ n=6），RSD为 1.3%。

2.1.2 软胶囊中番茄红素检测方法的建立

2.1.2.1 样品制备 各批次复方降脂软胶囊均随机取 6粒， 剖开 胶 囊 挤 出 内 容 物 溶 液， 分 别 称 取 0.038 9 g、0.038 2 g、 0.042 0 g， 置 10mL量瓶中， 焦性没食子酸-二氯甲烷 饱 和 溶 液 溶 解、 定 容［11］， 过 0.45 μm 微 孔 滤 膜备用。

2.1.2.2 对照品制备 精密称取 2.50mg番茄红素对照品于 10 mL量瓶中， 焦性没食子酸-二氯甲烷饱和溶解定容，配制成 0.25 mg/L番茄红素对照品溶液， 过 0.45 μm微孔滤膜备用。

2.1.2.3 色谱条件 Kromasil C18色谱 柱 （150 mm×4.6 mm， 5 μm）， 流动相为乙腈-甲醇 （50 ∶50）， 体积流量 1 mL/min， 检测波长为 472 nm， 柱温 30 ℃。

2.1.2.4 标准曲线绘制 吸取对照品溶液 3、 4、 5、 6、 7 μL进样， 按上述色谱条件测定峰面积， 以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归， 番茄红素回归方程为Y=37 743 676 X+893 291.2， r=0.999 6， 在 0.200 ～20.000 μg/mL范围内线性关系良好。 番茄红素对照品、 软胶囊样品 HPLC色谱图见图1。

图1 番茄红素对照品和样品 HPLC色谱图

2.1.2.5 阴性试验 按照胶囊处方， 不加番茄红素， 制成空白胶囊液 （植物油 +葡萄籽提取物）， 按照 “2.1.2.1”项下方法制备阴性对照溶液， 进样 （见图 1）， 说明胶囊中其他成分对番茄红素成分无干扰。

2.1.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液 7 μL， 按上述色谱条件测定，连续进样6次。测定番茄红素峰面积积分值， 平均峰面积为5 835 578， RSD为 1.67%。 结果表明设备精密度良好。

2.1.2.7 稳定性试验 精密吸取批号为20110920 胶囊样品溶液， 分别在 0、 2、 4、 8、 24 h 进样， 测定番茄红素峰面积积分值， RSD值为 1.98%。 结果表明， 供试品溶液在 24 h内稳定。

2.1.2.8 重复性试验 取批号为 20110920 胶囊内容物， 按照 “2.1.2.1” 项下方法制备供试品溶液 6 份， 分别进样，测定峰面积， 计算。 结果胶囊液中番茄红素含有量为 37.86 mg/g， RSD为 1.27%。

2.1.2.9 加样回收率试验 随机抽取批号为20110911 的胶囊 1 瓶， 按照 “2.1.2.1” 项下方法制备供试品溶液， 按“2.1.2.3” 项下色谱条件进样， 测得样品胶囊中番茄红素为34.439 mg/g。 称取该样品 6 份， 分别加入番茄红素对照品1.25mg， 混匀， 过0.22 μm微孔滤膜， 进样量7 μL， 进行测定；根据检测结果计算其回收率，平均回收率为101.2%、 RSD为 1.09%。 结果见表 1。

表 1 番茄红素加样回收率试验结果 （n=6）

2.1.2.10 样 品 测 定 取 3 个 批 次 复 方 降 脂 软 胶 囊（20110911， 20110920， 20110927）， 按照 “2.1.2.1” 项下制备供试品溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液，按照上述色谱条件测定并计算样品中番茄红素含有量，重复测定 3 次， 平 均 含 有量 分 别 为7.496 8、 7.485 2、 7.491 2 mg/粒。

2.2 装量差异检查［12］随机取供试胶囊 20 粒， 精密称定质量， 倾出内容物 （不得损失囊壳）， 乙醚涮洗囊壳， 挥干后分别精密称定囊壳质量，测得胶囊平均装量为（0.502 1 ±0.005 1） g， 符合 《中国药典》 2010 年版规定。

2.3 崩解时限检查［12］取供试品 6 粒， 按 《 中国药典》2010 年版规定检查胶囊崩解情况， 胶囊崩解时间为 （12 ± 2） min， 符合药典规定。

2.4 稳定性试验 供试胶囊按市售包装， 密封于塑料瓶中， 在温度 （40 ±2）℃、 相对湿度 75% ±5%的条件下放置6个月，在试验期间第1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，软胶囊中番茄红素的含有量分别为7.495 8、 7.492 4、 7.501 3、 7.488 6 mg/粒， RSD 为1.29%， 胶囊中番茄红素含有量稳定。 按国标 GB/T5538-2005 方法测得胶囊内容物过氧化值量［13］， 过氧化值分别为3.15、 3.94、 4.30、 5.52meq/kg。

参照药物稳定性指导原则，分别在初始温度、4℃、室温、 40 ℃， 相对湿度 （RH） 75%条件下按模拟上市包装存放 3 个月， 测定崩解时间分别为 13、 16、 20、 55 min，表明不同贮存条件对制剂崩解时间影响较大。软胶囊在初始温度、 室温及4 ℃条件下贮存崩解时间接近， 而在40 ℃时， 崩解时限延长， 但依然符合 《中国药典》 2010 年版规定， 见表2。

表2 胶囊稳定性试验结果

3 讨论

番茄红素是一种脂溶性天然色素，是类胡萝卜素的一种。在见光、受热、紫外线照射下不稳定，常用的定量测定方法有紫外-可见分光光度法、 高效液相色谱法［14-17］。 由于该胶囊是一种复合胶囊，为了防止原花青素可能会对检测结果造成干扰，综合比较分析认为高效液相色谱法可靠性更好。 实验结果表明， 以焦性没食子酸-二氯甲烷饱和溶解定容， 以乙腈-甲醇 （50 ∶50） 为流动 相， 体积流量 1 mL/min， 检测波长 472 nm， 柱温 30 ℃条件下， HPLC法测定胶囊中番茄红素含有量具有良好的重复性、稳定性和精密度，可以作为胶囊质控的方法。

软胶囊贮存的湿度和温度对胶囊的稳定性有重要影响。在高温、高湿条件下，明胶网状结构中的胶原胶束发生变化，其结构剧烈改变，从而使软胶囊变得难以溶解，崩解时间明显延长；另有研究表明软胶囊壳含水量与崩解时间成正比［18］。 加速试验证实， 胶囊崩解时间也随温度升高而延长，但室温条件下可以确保胶囊的稳定性符合药典相关规定。

通过实验结果可以看出，复方降脂软胶囊制剂性质稳定，主要成分定量测定专属性强、可靠性好，基本达到预期设计目的。

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苏德奇 （1978—） ， 男， 医学博士， 副教授， 研究方向： 食品毒理。 Tel： （0991） 4362427， E-mail： xjmusdq@163.com

*通信作者： 马 龙 （1957—） ， 男， 教授， 博士生导师， 研究方向： 食品毒理。 Tel： （0991） 4362427， E-mail： xjmusdq@163.com